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公开(公告)号：CN112941059B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202110203167.8
申请日：2021-02-23
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/82 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N1/21 , A23L5/20 , A23L19/18 , C12R1/19 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其在枯草芽孢杆菌中的表达，属于酶工程和微生物工程技术领域。采用本发明公开的米黑根毛霉来源的L‑天冬酰胺酶突变体A344E在45℃、pH7.0的条件下酶活为786.8U/mg，为野生酶509.1U/mg的1.5倍；并且本发明的L‑天冬酰胺酶突变体可以实现在枯草芽孢杆菌中高效表达，采用本发明提供的方法，可以得到是一种表达的L‑天冬酰胺酶突变体酶活为原始菌株7.1倍的重组枯草芽孢杆菌，拓宽其在食品领域的应用范围，使L‑天冬酰胺酶能大规模应用于生产中。
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公开(公告)号：CN112080503B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202011006160.9
申请日：2020-09-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种优化启动子提高γ‑谷氨酰胺转肽酶表达量的方法，属于基因工程领域。本发明实现了B.pumilus ML413来源的γ‑谷氨酰转肽酶基因在枯草芽孢杆菌168中的高效表达，采用本发明所提供的优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的启动子，构建的基因工程菌对γ‑谷氨酰转肽酶的表达量，较采用未优化的启动子构建的基因工程菌对γ‑谷氨酰转肽酶的表达量，分别提高了30％、63％。
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公开(公告)号：CN111718948B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202010736326.6
申请日：2020-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一段基因及其在生产计曼尼醇中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种可高产计曼尼醇的酿酒酵母工程菌BY4742/GAL1p‑GES‑ADH1t，此酿酒酵母工程菌是通过将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的编码计曼尼醇合酶的基因整合至酿酒酵母BY4742的基因组中得到的；将此酿酒酵母工程菌接种至发酵培养基中发酵48h，即可使发酵液中计曼尼醇的产量高达45.31mg/L。
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公开(公告)号：CN111172090B
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202010095689.6
申请日：2020-02-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用离子转运蛋白促进钝齿棒杆菌合成L‑精氨酸的方法，具体公开了一种通过过表达单价阳离子/H+逆转运蛋白Mrp1A以及阳离子转运ATP酶CTAP1提高L‑精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对基因mrp1和ctap1的敲除和过表达，通过对胞内[Na+]和[K+]的测定，明确离子转运蛋白在离子浓度、pH稳态和渗透压方面的调节作用。采用5L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌5‑5(mrp1ctap1)发酵至96h，重组菌的L‑精氨酸产量达到65.3g/L，产率为0.395g/g，比钝齿棒杆菌SYPA5‑5提高了39.1％。
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公开(公告)号：CN112111468B
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202011006299.3
申请日：2020-09-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种γ‑谷氨酰胺转肽酶突变体及其应用，属于基因工程领域；本发明在天然γ‑谷氨酰胺转肽酶的基础上，通过定点突变生物技术改造γ‑谷氨酰胺转肽酶分子结构，本发明所提供的突变体T401P、T422S，其转肽酶活较原始菌株分别提高了32.3％、41.8％；比酶活分别提高了近4.5倍、5.1倍，本发明表明401位点及422位点残基对于GGT催化苦味氨基酸具有重要影响，可用于改善含苦味氨基酸产品的口感与品质，这对于γ‑谷氨酰胺转肽酶在医药和食品行业的应用具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111575221B
公开(公告)日：2021-12-28
申请号：CN202010457248.6
申请日：2020-05-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于PNTs的生产灵菌红素的方法，属于生物技术领域。本发明提供了可高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1/pigFPNT和JNB5‑1/pigNPNT，粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1/pigFPNT和JNB5‑1/pigNPNT是通过分别在粘质沙雷氏菌的灵菌红素合成基因簇pigF和pigN的3'端连接序列如SEQ ID No.11所示的核苷酸片段获得的，将粘质沙雷氏菌工程菌JNB5‑1/pigFPNT和JNB5‑1/pigNPNT分别接种至发酵培养基中发酵96h，即可使发酵液中灵菌红素的产量分别高达7.55g/L、8.37g/L。
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公开(公告)号：CN113667651A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202110908307.1
申请日：2021-08-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高及最适pH改变的NADH氧化酶突变体，属于基因工程技术领域。本发明提供的NADH氧化酶突变体N20D、Y66D、N116E、N20D/Y66D、N20D/N116E均能够实现在中性条件下酶活提高的技术效果，并且，NADH氧化酶突变体N20D/N116E的最适pH从9.0下调到了7.0，比酶活也得到显著提升，在pH 7.0时比酶活可达9.19U/mg蛋白，是野生型的2.9倍，加强了该酶再生NAD+的能力，为工业化氧化还原酶催化提供了一种实际有效的辅酶再生策略。
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公开(公告)号：CN112980758A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110243463.0
申请日：2021-03-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酸棒杆菌合成5‑氨基乙酰丙酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了敲除α‑酮戊二酸抑制蛋白和琥珀酸脱氢酶以及过表达5‑氨基乙酰丙酸合成酶的重组谷氨酸棒杆菌的构建。采用5‑L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum 13032/△odhI△sdhA/pXMJ19‑hemA发酵84h，在加终浓度4g/L甘氨酸的情况下在48h合成了25.05g/L的5‑ALA，生产率为0.52g/L/h，此时糖酸转化率达到16.79％。实现了5‑氨基乙酰丙酸的高产，获得了以葡萄糖为碳源开始一步发酵的截止目前的最高产量。
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公开(公告)号：CN112852701A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110171925.2
申请日：2021-02-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成(S)‑2‑羟基丁酸的单细胞工厂的构建与应用，属于生物技术领域。本发明将L‑苏氨酸脱氨酶、L‑乳酸脱氢酶及脱氢酶基因串联表达构建重组的大肠杆菌单细胞工厂用于(S)‑2‑羟基丁酸高效合成，通过RBS序列优化控制L‑苏氨酸脱氨酶的表达量，解决中间产物酮丁酸的快速积累而抑制转化的问题。利用单细胞工厂进行全细胞转化可减少物质进出障碍加快转化速率，促进辅因子胞内循环而无需外源添加，成本低廉。采用本发明构建的方法制备的(S)‑2‑羟基丁酸的产量达到136g/L，(S)‑2‑羟基丁酸的时空产率为8.5g/L·h；并且副产物丙酮很容易通过蒸馏去除，为其工业化生产提供实际有效策略。
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公开(公告)号：CN110607290B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911046656.6
申请日：2019-10-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种底物特异性提高的苯丙氨酸脱氢酶突变体及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体对苯丙酮酸的底物特异性较野生型有了明显的改善，同时，对L‑正缬氨酸、L‑亮氨酸、L‑缬氨酸、L‑苯甘氨酸的特异性较野生型有了明显的降低，因此，将本发明的苯丙氨酸脱氢酶突变体用于血液等样品中苯丙氨酸含量的检测时，可排除其他氨基酸的干扰，提高检测灵敏度，在制备苯丙氨酸检测试剂盒以及苯丙酮尿症检测试剂盒方面具有极高的应用前景。
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