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公开(公告)号：CN110129349B
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN201910282838.7
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了基于ISApl1插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC19‑tpm质粒和pUC19‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建pTFX‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切pTFX‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。再进一步将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，并将获得的荧光标记的大肠杆菌与目标菌株混合培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高、成本低，适用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物。
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公开(公告)号：CN110079540B
公开(公告)日：2020-07-31
申请号：CN201910282837.2
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株。本发明方法操作简单，可高通量的获得转座突变株，适用于构建耐药菌株或筛选药物。
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公开(公告)号：CN111088192A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN202010019410.6
申请日：2020-01-08
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12N1/20 , B09C1/10 , C02F3/34 , C12R1/01 , C02F101/38
Abstract: 本发明属于抗生素的生物降解技术领域，涉及一种降解微生物，具体涉及一种金黄杆菌DDW4-2菌株及其在降解四环素类抗生素中的应用，为挖掘更多四环素类抗生素降解菌，本发明提供一种金黄杆菌(Chryseobacterium jejuense)DDW4-2菌株，该菌株于2019年11月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:60821，该菌株的16S rDNA具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，其对四环素类抗生素具有良好的降解作用，能够在16小时后降解48.4％的四环素，为四环素类药物的残留问题提供了安全、环保的解决途径。
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公开(公告)号：CN110129246A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910355278.3
申请日：2019-04-29
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了一株供体菌、其构建方法与应用以及质粒抑制剂筛选方法。所述的供体菌包含自杀型荧光质粒和pCRISPR-LUX质粒，该供体菌本身不表达荧光；而所述的自杀型荧光质粒可通过接合转移进入受体菌，由于接合子脱离了失去核酸内切酶活性的Cas9蛋白的抑制而可以表达荧光。本发明还提供了所述的供体菌的构建方法及应用，所述的应用为通过分析接合子的荧光表达情况对接合转移效率进行定量分析或质粒抑制剂的筛选。同时，本发明还提供了一种基于CRISPR/dCas9筛选质粒抑制剂的方法，可实现高通量筛选抑制耐药质粒接合转移的物质，筛选过程高效、方便、快捷，适用范围较为广泛，为克服细菌耐药性提供新的思路和方法。
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公开(公告)号：CN110117605A
公开(公告)日：2019-08-13
申请号：CN201910282847.6
申请日：2019-04-10
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC26-tpm质粒和pUC26-RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建p26-RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切p26-RP4质粒和pBBR1MCS4-LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。将本发明中获得的自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，得到荧光标记的大肠杆菌；最后将其与目标菌株共培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高，可用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110055192A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201910290884.1
申请日：2019-04-12
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于环境污染物生物处理技术领域，具体涉及大肠杆菌（Escherichia coli）LHM10-1菌株及其在降解四环素族抗生素中的应用，大肠杆菌（Escherichia coli）LHM10-1菌株，于2019年3月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），保藏编号为GDMCC No：60622。本发明大肠杆菌LHM10-1菌株对四环素族抗生素具有良好的降解作用。进一步地，本发明提供的大肠杆菌LHM10-1能够在16小时后降解83.91%的四环素和92.24%的伊拉瓦环素,为四环素族抗生素药物的残留问题提供了安全、高效、环保的解决途径。
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公开(公告)号：CN110031576A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910291334.1
申请日：2019-04-12
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物检测技术领域，特别涉及一种能够检测产四环素类抗生素降解酶细菌的质谱方法，包括以下步骤:S1.细菌与药物共培养：将待测细菌进行培养，得到培养液，并加入四环素类抗生素标准品溶液（四环素类抗生素的终浓度为140~160μg/mL），混匀后30~40℃条件下孵育6~10h；S2.样品前处理：将孵育好的共培养物离心，吸取上清液，在靶板上进行点靶，自然晾干，随后用α-氰基-4-羟基肉桂酸覆盖并再次自然晾干；S3.样品的测定和数据分析：将步骤S2中经过点靶后的靶板采用质谱法进行检测，分析质谱范围依四环素类抗生素的种类而定。本方法具有灵敏度高、准确度高及分辨率高的特点，适用于产四环素类抗生素降解酶细菌的检测。
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公开(公告)号：CN109722466A
公开(公告)日：2019-05-07
申请号：CN201910090138.8
申请日：2019-01-30
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12Q1/10 , C12Q1/04 , G16B5/00 , G06N3/04 , G06N3/08 , C12R1/19 , C12R1/40 , C12R1/22 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种运用AI模型快速检测产生碳青霉烯酶菌株的方法，通过使用溴百里酚蓝溶液，测定混合溶液的OD值，最后运用AI模型通过分析混合溶液OD值的变化趋势判断菌株是否能够产生碳青霉烯酶；本发明通过检测菌株的OD值随时间变化的趋势降低了误差；通过检测菌株溶液的OD值，能够在极短时间内快速判断菌株是否产生碳青霉烯酶，极大地节省了时间；对于弱产酶的菌株，运用AI模型分析菌株溶液OD值的变化，快速判断出来；将OD值导入到LSTM模型中，即可立刻得到菌株是否能够产酶以及产酶能力的强弱，且能直观的看到一批次中菌株产酶阳性数量与产酶阴性数量的多少，并直接导出产酶结果，不必人工记录实验结果，高效便捷。
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公开(公告)号：CN108090502A
公开(公告)日：2018-05-29
申请号：CN201711191507.X
申请日：2017-11-24
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于深度学习的最低抑菌浓度识别方法，包括下述步骤：S1、图像切割得到单孔图像：将原始图像处理成模型能够接收的单孔图像；S2、构造样本：给用作训练的单孔图像加上对应标签，构成深度学习模型能够用来训练的样本；S3、构建及训练模型：构建能够用来识别溶液浑浊与否的模型，并用训练样本集进行训练；S4、使用模型判断浑浊与否：模型可以接收训练集以外的图像，判断其溶液是浑浊还是清澈；S5、得到药品对应最低抑菌浓度：根据微孔板中各个圆孔的浑浊/清澈情况得出药品最低抑菌浓度。本发明大大提高了操作人员的工作效率，由于其无需专用设备的特性，能够推广到大多数的工作单位，为工作研究提供方便。
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公开(公告)号：CN107460119A
公开(公告)日：2017-12-12
申请号：CN201610375781.1
申请日：2016-05-30
Applicant: 华南农业大学
IPC: C12M1/38 , C12M1/34 , C12M1/22 , C12M1/00 , C12Q1/06 , C12Q1/04 , G06T7/00 , G06T11/20 , G06T13/00
CPC classification number: C12M23/10 , C12M41/14 , C12M41/36 , C12M41/46 , C12Q1/04 , C12Q1/06 , G06T7/0002 , G06T11/206 , G06T13/00
Abstract: 本发明提供的一种监测细菌生长的设备监测方法，设备包括恒温培养箱、扫描仪、计算机，以及于计算机CPU安装的细菌生长监测处理系统，所述恒温培养箱内装有通过数据线和集线器与计算机连接的若干个扫描仪，每个扫描仪内安放有若干培养皿；于所述计算机CPU安装的细菌生长监测系统，由图像采集模块、图像处理模块、图像分析模块、结果呈现模块组成。本发明监测方法通过扫描仪获得菌落大小和像素面积的一致性，进而得到细菌生长情况，相比于传统通过分光光度计的方法测细菌量，该方法大大减少了系统误差和偶然误差；本发明监测方法不仅可以应用于细菌计数，细菌分离和鉴定。还可以用作混合样品检测，高通量筛选质粒抑制剂等，并且具有微生物成像的功能。
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