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公开(公告)号：CN116515713A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202310660086.X
申请日：2023-06-06
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明公开了一种生产菌种培养方法，包括以下步骤：S1、对孢子进行制备；S1‑1、对放线菌孢子进行制备；S1‑2、对霉菌孢子进行制备；S1‑3、对细菌孢子进行制备；S1‑4、对于不产孢子的细菌进行制备；S2、对种子进行制备；S2‑1、摇瓶种子制备，指的是某些孢子发芽和菌丝繁殖速度缓慢的菌种，需将孢子经摇瓶培养成菌丝后再进入种子罐，这就是摇瓶种子；S2‑2、种子罐种子制备，从第一级种子罐开始计算发酵级数，种子罐的级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少由于多次移种带来的染菌的机会，但也必须考虑要尽量延长发酵罐生产产物的时间，缩短由于种子发芽、生长而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率。
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公开(公告)号：CN111153968B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010074806.0
申请日：2020-01-22
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明公开了一种提高外源碱性蛋白酶表达量的信号肽突变体及其构建方法与用途，属于基因工程技术领域。所述突变体是将来源于芽孢杆菌的Sec途径的信号肽的C端第‑1位和/或第‑3位氨基酸突变为丙氨酸,即将C端的最后三位氨基酸序列突变为AXA或者在信号肽C端后增加氨基酸序列AXA，所述X为任意氨基酸。本发明构建方法简单易行，适用于枯草芽孢杆菌系统，信号肽突变后的碱性蛋白酶表达量均高于未突变体。本发明为介导枯草芽孢杆菌表达系统中异源碱性蛋白酶基因的表达奠定基础，有效推动了碱性蛋白酶的高效表达及工业化生产。
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公开(公告)号：CN113897342A
公开(公告)日：2022-01-07
申请号：CN202111107706.4
申请日：2021-09-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明公开了一种基于分子对接的3’,5’‑二磷酸腺苷的高特异性的偶联酶YND突变体，所述YND突变体的基因序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4，所述YND突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。本发明以晶体结构已知的酵母3’,5’‑二磷酸腺苷酶为出发点设计并改造了一种PAP特异性强的偶联酶。本发明改造的酶由大肠杆菌表达系统诱导表达，储存于储存液中，‑80℃条件下，能维持活性3个月，用相应的缓冲体系稀释使用，方便且可更换反应体系，解决了体系缓冲物质对ST活性检测局限性的问题。
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公开(公告)号：CN112501149A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011513325.1
申请日：2020-12-21
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种碱性蛋白酶突变体及其基因、工程菌、制备方法和应用。本发明通过提取克劳氏芽孢杆菌基因组DNA，经PCR扩增得到野生型碱性蛋白酶基因序列，将扩增得到的野生型碱性蛋白酶基因通过易错PCR进行随机突变，通过高通量筛选后获得了若干个高活力碱性蛋白酶基因，再将这些高活力碱性蛋白酶基因进行DNA改组，通过筛选后获得八个更高活力的碱性蛋白酶突变体基因。将这八个突变体基因构建重组载体并在枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌中成功表达，得到产酶活力提高的重组菌株，进一步通过发酵工艺优化获得新型碱性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN110144319B
公开(公告)日：2021-01-15
申请号：CN201910332253.1
申请日：2019-04-24
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明提供了一种高效异源表达碱性蛋白酶的基因工程菌，是利用核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的启动子与信号肽组合与克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶基因aprE构建重组表达载体，并转入枯草芽孢杆菌宿主WB600中，最终电转到解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.11218中，获得重组基因工程菌。利用该基因工程菌发酵生产的重组碱性蛋白酶的摇瓶发酵活力达到20000U/mL，是原始启动子P43和信号肽SPSacB组合的2.8倍，在5L罐放大实验，该重组菌株酶活达到60000U/mL，为实现碱性蛋白酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110106128A
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201910332240.4
申请日：2019-04-24
申请人： 天津科技大学 , 山东隆科特酶制剂有限公司
摘要： 本发明提供了一种生产重组碱性蛋白酶的基因工程菌，是利用核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的启动子与信号肽组合与克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶基因aprE构建重组表达载体，并转入枯草芽孢杆菌宿主WB600中，最终电转到解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.11218中，获得重组基因工程菌。利用该基因工程菌发酵生产的重组碱性蛋白酶的摇瓶发酵活力达到18000U/mL，是原始启动子P43和信号肽SPSacB组合的2.52倍，在5L罐放大实验，该重组菌株酶活达到58000U/mL，为实现碱性蛋白酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109266594A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811118873.7
申请日：2018-09-25
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种恩拉霉素高产菌株及其构建方法。本发明将传统高产菌的选育与转录组测序技术相结合，通过对比已知的两株抗性存在显著差异的菌株的基因组序列，进而找到两株菌的基因组序列之间的不同碱基并确定其所在基因组序列中的位置和它所决定的基因名称及作用，针对该基因对抗生素生产菌株进行遗传操作，从而筛选出高抗性工程菌株。获得的基因工程菌较原始菌株的恩拉霉素产量分别提高了5％，18.3％和19.5％，本发明为恩拉霉素高产菌株的选育提供了一种新思路。
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公开(公告)号：CN104745614B
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201510104041.X
申请日：2015-03-10
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种新型低温蛋白酶编码基因及其在大肠杆菌中的功能表达，本发明从动性球菌Planococcus sp.11813中克隆到一段新型低温蛋白酶编码基因cpls8，序列分析表明：该基因所编码的蛋白序列共含有329个氨基酸残基，属S8家族丝氨酸蛋白酶，与目前数据库中已发表蛋白序列的最高源性仅为77％。该基因在E.coil Rosseta(DE3)实现了功能表达，酶学性质分析表明：其最适催化pH值为10，最适催化温度为37℃左右，在20～30℃之间可保持最高酶活的50％以上，因此属典型的低温碱性蛋白酶，在洗涤、食品、医药等领域具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN108085329A
公开(公告)日：2018-05-29
申请号：CN201711339447.1
申请日：2017-12-14
申请人： 天津科技大学
CPC分类号： C12N15/70 , C07K14/4711 , C12N2800/22
摘要： 本发明属于生物技术和基因工程技术领域，具体为利用大肠杆菌表达系统高效表达及纯化Aeta蛋白。本发明构建的Aeta表达体系提供了原核生物可溶性表达人淀粉样蛋白Aeta的表达载体的构建方法，并将表达载体导入至大肠杆菌表达宿主中，经诱导发酵表达、两步纯化及鉴定后获得高纯度可溶性的目标Aeta蛋白。本方法所采用的大肠杆菌表达系统，具有表达效率高、表达量大、成本低、易操作等特点，所表达的Aeta蛋白纯度高、产率高等优点。
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公开(公告)号：CN103290048B
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201310262705.6
申请日：2013-06-27
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种适用于芽孢杆菌属同源重组的质粒及工程菌，包括序列8的线性片段。所述质粒以16SrDNA的序列作为同源臂，同源臂之间为卡那抗性筛选标记基因、P43启动子、多克隆位点、终止序列。本发明的质粒可以将各种目的基因整合在芽孢杆菌属各种菌上，并可以获得含有不同拷贝数目的基因的转化子，实现目的基因在芽孢杆菌属的稳定高效表达。此外，我们利用此质粒构建了pKD314-apr4M重组质粒，并且通过同源重组方法获得了含有不同拷贝数稳定高产的工程菌。
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