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公开(公告)号：CN116855588A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310817657.6
申请日：2023-07-03
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q1/6888 , C12N15/113 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a和Cas13a介导的双重核酸荧光可视化检测方法及其应用，在同一反应体系中进行Cas12a和Cas13a酶切，采用荧光染料JOE修饰的ssDNA‑FQ报告基因和ROX修饰的ssRNA‑FQ报告基因，可在一次反应中通过观察“绿‑红‑黄”荧光信号转变实现同时检测两个核酸靶标，该方法检测灵敏性高、特异性强，利用该方法已开发了能够快速检测CD163基因敲除猪和乳铁蛋白LF基因敲入猪的特异检测试剂盒，因此该方法在分子检测领域具有较大的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN116808067A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202211611438.4
申请日：2022-12-14
申请人： 上海兆维医药科技有限公司 , 华中农业大学
IPC分类号： A61K31/737 , A61P31/20 , A23K20/163
摘要： 本发明属于医药技术领域，公开了λ‑卡拉胶在抗非洲猪瘟病毒感染中的应用。本发明以CD2v为靶标，通过表面等离子共振及分子对接筛选获得了能与CD2v活性功能域相匹配，并能显著竞争性抑制CD2v与宿主基因互作的λ‑卡拉胶；进一步病毒实验表明，λ‑卡拉胶能够显著抑制非洲猪瘟病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制，在临床治疗或预防ASFV感染方面具有很高的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN116144631B
公开(公告)日：2023-09-15
申请号：CN202310086152.7
申请日：2023-01-17
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12Q1/6816
摘要： 本发明公开了一种高活性和耐热性高的核酸内切酶及其介导的基因编辑系统，具体地，本发明提供了一种利用宏基因组学结合实验鉴定出的温度适用范围广的核酸内切酶Gs12‑7，其优点在于蛋白温度耐受性高，识别含有BTYV的PAM序列，因而具有更大基因编辑空间且在基因组中高活性高特异切割靶标DNA。本发明建立了基于CRISPR/Gs12‑7系统介导的核酸可视化检测与基因组靶向编辑技术，在基因组定点修饰与核酸检测领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116688123A
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210184657.2
申请日：2022-02-25
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： A61K45/00 , A61K48/00 , A61K31/7105 , C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/85 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了宿主PRKCSH基因作为靶点在防治多种RNA病毒感染中的应用，通过实验证实，敲除猪的PRKCSH基因可以显著抑制日本乙型脑炎病毒对宿主细胞的粘附与入侵，还可显著抑制猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、塞内卡病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒在宿主细胞中的复制，此外，敲除人的PRKCSH基因可以显著抑制日本乙型脑炎病毒在宿主细胞中的复制。因此，特异靶向编辑PRKCSH基因或干扰其蛋白表达可抑制多种RNA病毒侵染宿主细胞。
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公开(公告)号：CN116536352A
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202210093455.7
申请日：2022-01-26
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种复制型引导编辑器介导的高效精准多基因编辑系统。本发明提供了一种用于多基因编辑的载体，其能够表达由Cas9切刻酶或其变体和反转录酶或其变体融合而成的融合蛋白、EBNA1蛋白和Csy4蛋白；并且含有Orip元件和用于插入pegRNA编码序列的区域；所述用于插入pegRNA编码序列的区域含有插入位点和位于所述插入位点上游的启动子。相比于传统方法，该技术可一次性精确高效编辑多个基因，在基因治疗、多基因动物疾病模型的构建、基因设计育种以及聚合精准育种等领域具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN116410955A
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202310247616.8
申请日：2023-03-10
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/55 , C12Q1/6818 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了两种CRISPR/Cas系统的新型核酸内切酶及其应用，具体地，本发明首次提供了两种结合宏基因组学与实验手段挖掘到的新型CRISPR/Cas12a系统家族新成员Gs12‑3、Gs12‑5，特别是新发现的Gs12‑3与已知Cas12a蛋白相比具有覆盖靶标位点范围更广的基因组编辑能力，还建立了基于CRISPR/Gs12‑3系统介导的核酸可视化检测技术。
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公开(公告)号：CN116286737A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310006257.7
申请日：2023-01-02
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/63 , C12Q1/6813
摘要： 本发明公开了一种无PAM序列要求的CRISPR/Cas基因编辑系统。具体地，本发明提供了一种利用宏基因组学结合实验鉴定出的无PAM限制核酸内切酶Gs12‑10，其优点在于可以在基因组中几乎任何位置切割靶标DNA。本发明建立了基于CRISPR/Gs12‑10系统介导的核酸可视化检测与基因组靶向编辑技术，在基因组定点修饰与核酸检测领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114807431A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202110407304.X
申请日：2021-04-15
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种改进的基于CRISPR系统介导的核酸可视化检测技术及其应用。具体地，本发明的用于检测靶标核酸分子的荧光或裸眼可视化的检测体系，包括：(a)Cas12a蛋白；(b)crRNA，所述crRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于靶标核酸分子；和(c)核酸探针，所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号，在所述的检测体系中，在可见光下，ssDNA‑reporter的浓度为2.5‑30μM，较佳地10‑30μM，更佳地10‑20μM；在蓝光下，ssDNA‑reporter的浓度为0.1‑30μM，较佳地，0.3‑30μM，更佳地，2.5‑10μM，在紫外光下，ssDNA‑reporter的浓度为0.05‑30μM，较佳地，0.15‑30μM，更佳地，0.15‑1μM。本发明检测体系和检测方法具有快速、灵敏、高特异、裸眼可视化、适合现场快速检测等优点。
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公开(公告)号：CN113866286A
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN202011070002.X
申请日：2020-09-30
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了生物标志物在评估猪肉肌内脂肪含量中的应用，利用代谢组学分析挖掘出一组有效的生物标志物，包括8种甘油三酯类物质TG(18:1/18:4/18:4)、TG(14:0/20:1/22:1)、TG(18:1/18:1/20:0)、TG(12:0/16:0/18:3)、TG(18:0/20:1/20:1)、TG(16:0/16:1/20:1)、TG(18:1/18:1/22:0)、TG(18:1/18:3/18:3)。通过生物标志物对猪肉的肌内脂肪含量进行简便、快速的评估，可辅助开展猪肉品质分类，解决肉质性状难于度量的问题，进而推动肉质性状遗传评估工作的开展。
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公开(公告)号：CN113637730A
公开(公告)日：2021-11-12
申请号：CN202111059118.8
申请日：2021-09-09
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种等温扩增技术结合核酸外切酶介导的可视化核酸检测方法，利用等温扩增技术扩增待检测核酸，Exo III剪切扩增子3’末端序列暴露单链DNA靶标，茎环探针结合靶标，Exo III能够剪切探针3’末端并释放荧光基团，通过裸眼或横向流动试纸条可快速、灵敏地检测病毒核酸。该方法无需特殊检测装置，检测速度快、灵敏性高、成本低，且在室温条件下均可完成检测，裸眼和试纸条可视化过程在25~30 min内完成，检测灵敏度可达到2个拷贝。
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