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公开(公告)号：CN109183158A
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201811009522.2
申请日：2018-08-31
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种酵母单杂交文库构建方法专利申请事宜。该方法用于烟草基因组全长转录因子文库构建，包括转录因子筛选及开放阅读框全长扩增引物设计、制备cDNA模板、PCR扩增、磷酸化处理、连接重组接头、构建全长转录因子的文库质粒、质粒转化并构建文库等步骤。本申请所提供全长转录因子酵母单杂交文库构建方法，是对现有构建方法的进一步综合性改进，具有转录因子阳性筛选率高、筛选准确性高、所构建文库质量高等优点，同时由于对于相关操作步骤有所优化，因而能够节省构建时间和构建成本，因此具有较好的实用价值和推广应用意义。
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公开(公告)号：CN109180791A
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201811107003.X
申请日：2018-09-21
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/82 , C12N5/10 , A01H5/00
摘要： 本发明涉及一种与植物耐旱相关的基因及其编码蛋白与应用，属于生物技术领域。与植物耐旱相关的基因命名为NtDSR1，来源于栽培烟草，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。NtDSR1是一种调节烟草耐旱性的新基因，受干旱和高盐诱导高表达。将构建好的过量表达质粒PDT1-NtDSR1导入植物，获得的NtDSR1过量表达的株系耐旱性比空载体对照株系显著增强，即在干旱条件下NtDSR1基因可提高植物幼苗期及营养生长时期的存活率，显著改善植物的耐旱性，可为烟草耐旱分子育种提供优良的候选基因。
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公开(公告)号：CN102943091B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210440489.5
申请日：2012-11-07
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 一种利用RNAi技术培育抗多种病毒烟草的方法，通过对GenBank中4种病毒（CMV、PVY、PVX、TMV）的多条基因组全长序列进行比对，筛选到4种病毒在基因组范围内的相对保守区域；最终选定各病毒序列，人工合成800bp的嵌合基因；依此构建了嵌合基因的RNAi植物表达载体，通过农杆菌转化普通烟草，获得转基因植株。本发明的特点是：以我国四种主要烟草病毒为对象，利用植物基因工程技术将人为构建的包含四种病毒序列的发夹状结构转入烟草中，使烟草转录出的发夹状双链RNA结构在植物自身机制下剪切成小RNA（siRNA），特异性地干扰、降解或沉默靶标病毒基因在烟草植株体内的正常复制和积累，筛选获得抗多种烟草病毒的烟草新材料。
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公开(公告)号：CN103033472A
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201210548508.6
申请日：2012-12-18
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： G01N21/00
摘要： 一种基于采样一致性的烤烟种期形态分类表征方法，其特征在于：包括下述步骤：①选择烟株100株，依次编号挂牌，烤烟种期不同阶段的形态分类表征采集样品所需烟株从挂牌烟株中选取；②结合烤烟种期传统划分，粗略表征；③量化分类表征：依据烟株蕾、花、果存在的不同比例进行量化分类表征，将烤烟种期划分为6个阶段，④烤烟种期不同阶段烟株样品的采样只选取符合各时期量化分类范围内的烟株进行采样，以满足采样一致性的要求。与现有分类方法比较，本发明采用最直观的花蕾、花和果的不同比例，量化烤烟种期客观存在的形态特征，分类准确规范，易于操作，有利于采集到一致的烤烟种期样品，从而能更好进行生物学分析测定，更准确反映样品的真实信息。
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公开(公告)号：CN118006522A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410049612.3
申请日：2024-01-12
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明涉及一种提高纤维素酶活性的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明以枯草芽孢杆菌为出发菌，过表达内切葡聚糖酶C36基因；所述C36基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。经检测，以CMC‑Na为底物时，测得基因工程菌的CMC酶活为52.88U/mL，FPA酶活为30.81U/mL。相比于阴性对照菌株PMB‑BS(转化空载体的枯草芽孢杆菌)，CMC酶活增加了4.6倍，FPA酶活增加了1.6倍。本发明提供的基因工程菌显著提高了纤维素酶产量和酶活，适合在工业中大规模生产使用。
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公开(公告)号：CN116426526A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310360710.4
申请日：2023-04-06
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/83 , A01H5/00 , A01H6/82
摘要： 本发明公开一种烟草环状RNA NRC2、病毒诱导的基因沉默载体及其应用。本发明的烟草环状RNA NRC2的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。本发明构建环状RNA NRC2沉默植株，检测证明，转基因沉默植株中多种生物碱含量明显降低，说明环状RNA NRC2参与烟草生物碱合成的过程。同时，转基因沉默植株中茉莉酸(JA)和茉莉酸‑异亮氨酸(JA‑ILE)的含量显著上升，说明烟草环状RNA NRC2在植物高茉莉酸(JA)和茉莉酸‑异亮氨酸(JA‑ILE)含量育种领域具有广阔的应用前景，具有巨大的经济效益潜力。
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公开(公告)号：CN110951758B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN201911345952.6
申请日：2019-12-24
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明属于植物生物工程技术领域，具体涉及一种叶绿体中表达紫杉二烯的重组载体pLD‑TS。该载体制备步骤包括：紫杉二烯合成酶基因TS基因获得、载体构建、转化验证等步骤。该载体在烟草叶绿体中，以烟草叶绿体基因组上trnI和trnA为左右同源序列，利用Prrn启动子调控筛选标记aadA基因，同时利用psbA基因的启动子和5’UTR调控紫杉二烯合成酶基因TS的表达。发明人利用烟草作为异源宿主，借助基因工程手段对紫杉二烯合成途径进行了重构。初步实验结果表明，本申请在烟草叶绿体中高效表达异源合成了紫杉二烯，烟草转化株叶片中紫杉二烯的含量最高可达127.69μg/g，表现出较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112813181B
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN202110156904.3
申请日：2021-02-04
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及适用于雪茄烟不同组织基因表达分析的内参基因及其应用。本发明通过geNorm、NormFinder和BestKeeper三个分析软件对RPL8、RPL14A、RPS16、UBC27、UBC28、UBC35、AC10、EIF2、PSAP和CPI十个候选内参基因在雪茄烟不同发育时期不同组织(根、茎、叶、花萼、花冠、柱头、子房、雄蕊、雌蕊和种子)中的表达稳定性进行了分析。结果表明RPL14A和/或UBC27基因在雪茄烟不同发育时期不同组织中稳定表达，即RPL14A和/或UBC27基因能够作为雪茄烟不同组织荧光定量PCR的内参基因。本发明进一步提供了RPL14A基因和UBC27基因的qRT‑PCR引物，为雪茄烟不同组织基因表达的精确定量分析奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110923244B
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN201911319316.6
申请日：2019-12-19
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及一个烟草线粒体RNA编辑因子NtMEF1及其应用专利申请。基因NtMEF1由2163个碱基组成，具体碱基序列如SEQ ID NO.1所示。烟草线粒体RNA编辑因子NtMEF1，由756个氨基酸残基组成，具体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本申请中，发明人通过对特定线粒体RNA编辑因子NtMEF1的初步研究，发现其与烟草甘油酸物质含量高度相关，在将该基因沉默后，烟草中甘油酸物质含量发生了明显降低。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育奠定一定的应用基础和参考借鉴。
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公开(公告)号：CN110819640B
公开(公告)日：2022-06-21
申请号：CN201911317969.0
申请日：2019-12-19
申请人： 中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要： 本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及烟草NtNRP1基因及其应用专利申请。NtNRP1基因由981个碱基组成，具体碱基序列如SEQ ID NO.1所示。NtNRP1蛋白由326个氨基酸组成，具体氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本申请中，发明人通过对特定烟草NtNRP1基因的初步研究，发现其与烟草硝酸根物质含量高度相关，进一步功能性验证过程中，在将该基因沉默后，烟草中硝酸根物质含量发生了明显上升。基于这一特性，可为烟草生长过程中营养调节、烟草新品种培育奠定一定的应用基础和参考借鉴。
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