一种筛选LacZ基因标记山羊痘病毒的宿主细胞的方法

    公开(公告)号:CN112779293A

    公开(公告)日:2021-05-11

    申请号:CN202110113418.3

    申请日:2021-01-27

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种筛选LacZ基因标记山羊痘病毒的宿主细胞的方法,包括检测细胞的培养;将检测细胞置于底层胶为LMA,顶层胶为X‑gal、LMA混合液的培养介质中进行培养,观察培养介质中胶色变化,选择胶色不变化的检测细胞作为所述LacZ标记基于山羊痘病毒的宿主细胞;提取检测细胞RNA进行RT‑PCR,对得到的PCR扩增产物测序,并将测序DNA与LacZ基因进行同源性分析鉴定。本发明方法不光适用于乳仓鼠肾细胞、羊肾细胞、羔羊睾丸原代细胞,作为LacZ基因标记重组病毒的宿主细胞都可使用该方法进行筛选,通过简单的变色观察即可筛选出适合LacZ标记重组病毒的宿主细胞,为后续便于挑蓝色病毒蚀斑纯化,排除细胞本身产生蓝斑对LacZ基因标记重组病毒蓝斑造成干扰。

    表达ORFVF1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法

    公开(公告)号:CN115960845A

    公开(公告)日:2023-04-14

    申请号:CN202211293210.5

    申请日:2022-10-21

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒及其构建方法。该病毒构建方法如下:(1)根据山羊痘病毒基因组序列、羊口疮病毒F1L基因开放阅读框序列,以135基因编码区两侧区域DNA片段为左右重组臂,中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区以及标记基因gpt、EGFP、早晚期启动子,并且含有loxp位点,构建同源重组供体质粒;(2)利用步骤(1)所得同源重组供体质粒转染细胞,制得表达ORFV F1L蛋白的重组山羊痘病毒。本发明提供的重组山羊痘病毒不影响山羊痘病毒的体外复制能力,该重组山羊痘病毒所插入的F1L外源基因在机体内随载体病毒的复制而表达,可作为羊痘、羊口疮弱毒疫苗的新方案。

    化脓隐秘杆菌的保护性抗原及其筛选方法与应用

    公开(公告)号:CN118878649A

    公开(公告)日:2024-11-01

    申请号:CN202410978015.9

    申请日:2024-07-19

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种化脓隐秘杆菌的保护性抗原及其筛选方法与应用。本发明从化脓隐秘杆菌2012CQ‑ZSH菌株基因组注释的蛋白质中搜索ATP结合盒底物结合蛋白,通过BLAST分析其基因保守性和菌株分布率,预测保护性抗原;然后利用GST融合蛋白表达系统制备其重组蛋白;并在免疫小鼠上开展攻毒试验,测定抗原免疫保护水平,筛选获得保护性抗原。本发明研究证实,PLO及ATP结合盒底物结合蛋白IBP、ALD73390是保护性抗原,其免疫保护率大于80%,表现出良好免疫保护水平。本发明对开发化脓隐秘杆菌蛋白质疫苗具有重要意义。

    一种化脓隐秘杆菌疫苗制剂及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN118512585A

    公开(公告)日:2024-08-20

    申请号:CN202410084671.4

    申请日:2024-01-19

    Abstract: 本发明涉及疫苗技术领域,具体涉及一种化脓隐秘杆菌疫苗制剂及其制备方法和应用。一种化脓隐秘杆菌疫苗制剂,其原料包括保藏号为CGMCC No.28995的化脓隐秘杆菌和佐剂,所述佐剂包括ISA 15、ISA 61、ISA 201和氢氧化铝中的至少一种。本技术方案从疑似羊化脓隐秘杆菌致死羊中取样并分离培养获得化脓隐秘杆菌,含有9种以上的毒力基因,动物实验显示出较强的毒力,适合用于制备化脓隐秘杆菌疫苗。在上述新发现的基础上,使用佐剂制备化脓隐秘杆菌疫苗。本方案获得的疫苗在免疫效果、安全性、疫苗制剂稳定性等多个方面都能获得最理想效果,可以同时提升疫苗的免疫原性和降低毒性,具有理想的应用推广前景。

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