适用于表达异源蛋白的病毒载体的构建及其使用方法

    公开(公告)号:CN111647621A

    公开(公告)日:2020-09-11

    申请号:CN202010352990.0

    申请日:2020-04-23

    IPC分类号: C12N15/83 C12N15/66

    摘要: 本发明提供了一种适用于表达异源蛋白的病毒载体的构建及其使用方法,其特征在于:菜豆荚斑驳病毒(BPMV)载体,其包含编码RNA2多蛋白开放阅读框(ORF)的核酸序列。本发明通过对质粒载体和病毒序列进行一系列修改,发明了一种BPMV全长的cDNA重组质粒载体pGG7R2。同时,在该质粒载体上引入荧光报告集团GFP蛋白,用于追踪和分析外源蛋白的表达水平。BPMV载体也可用于病毒诱导的基因沉默和异源多肽的表达方法。本发明还提供了病毒诱导的基因沉默方法,适用于确定目的基因的功能。

    一种玉米整株TRV载体介导病毒诱导基因沉默方法

    公开(公告)号:CN106520828B

    公开(公告)日:2020-09-04

    申请号:CN201611082938.8

    申请日:2016-11-30

    IPC分类号: C12N15/83 A01H5/00 A01H6/46

    摘要: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一种玉米整株TRV载体介导病毒诱导基因沉默方法。具体步骤如下:取玉米种子50粒,用刀片将胚上方的种皮划开;用有效氯为1%的次氯酸钠消毒液进行种子消毒,备用;用基因工程的方法将扩增后的番茄PDS基因片段连接到TRV病毒诱导基因沉默载体pTRV2中;农杆菌转化及培养;配制转化菌液;玉米种子侵染。玉米基因组复杂,突变体不易获得,遗传转化困难且受基因型限制,本发明首创利用利用TRV、采用番茄PDS病毒基因对玉米种子进行病毒载体的侵染,进而实现玉米PDS基因沉默,本发明方法简便、快捷、高效、低成本、不需要基因转化,且本发明为全株沉默,效率高,方便研究目的基因在各个组织中功能。

    桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用

    公开(公告)号:CN111454925A

    公开(公告)日:2020-07-28

    申请号:CN202010325136.5

    申请日:2020-04-23

    摘要: 本发明公开了一种桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用。所述基因、蛋白的序列分别如基因编码序列表中SED ID NO.1和SED ID NO.2所示。本发明通过桑树在镉胁迫下的生理生化检测以及公开桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2,完善桑树在镉胁迫下生理生化以及信号通道蛋白的表达分析和应用。可以用于桑树在镉胁迫下生理生化变化分析以及桑树中信号通道蛋白基因研究。使用VIGS技术,将桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因转入根瘤农杆菌GV3101,利用病毒沉默原理减少基因的表达,后检测转基因植株的生理生化指标以研究桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2在提高植物抗逆性上的作用。

    一种抑制香蕉果实淀粉降解的方法及VIGS沉默系统

    公开(公告)号:CN111321166A

    公开(公告)日:2020-06-23

    申请号:CN202010140663.9

    申请日:2020-03-03

    IPC分类号: C12N15/83 A01H5/08

    摘要: 本发明提供了一种抑制香蕉果实淀粉降解的方法,采用VIGS沉默系统转染香蕉果实,VIGS沉默系统包括烟草脆裂病毒pTRV1和含有SEQ ID NO.1所示序列的烟草脆裂病毒pTRV2。本发明首次实现了香蕉果实淀粉降解相关基因VIGS沉默系统的构建,能够有效沉默香蕉果实淀粉降解相关基因。本发明还进一步明确了菌液浓度、辅助病毒载体和表达病毒载体的比例、培养温度、侵染时间等条件,为成功沉默基因掌控好每个技术环节,有效抑制香蕉果实总淀粉和直链淀粉含量降低以及果糖、葡萄糖、蔗糖等含量升高。本发明为香蕉果实淀粉降解相关基因的功能验证奠定了良好的基础,为控制香蕉或其他植物果实淀粉降解提供了研究思路和技术依据。

    番木瓜环斑病毒西瓜株系超表达载体的构建

    公开(公告)号:CN108203715A

    公开(公告)日:2018-06-26

    申请号:CN201710598414.2

    申请日:2017-07-21

    IPC分类号: C12N15/83 C12N15/65

    摘要: 本发明涉及植物病毒基因工程领域,提供了一种番木瓜环斑病毒西瓜株系超表达载体的构建技术及应用。通过基因插入重组的方式,将番木瓜环斑病毒西瓜株系山东分离物PRSV‑SD的基因组克隆到35S启动子下游,获得侵染性克隆pCamPRSV;在此基础上,将GFP基因插入pCamPRSV的NIb基因和CP基因之间,构建了能够表达外源GFP基因的超表达载体pCamPRSV‑GFP。

    一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN104962580B

    公开(公告)日:2018-04-27

    申请号:CN201510371509.1

    申请日:2015-06-30

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12N15/83 C12N15/66

    摘要: 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体,包括:a)一个修饰的植物弹状病毒基因组;b)一个新引入的转录单元,它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列;c)一个异源核酸序列,它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元,其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力,所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体,具有表达量高,表达稳定性好,可以插入较长的外源基因片段,且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点,可以用于表达多种外源蛋白,也可以用于制备动物疫苗,具有广阔的应用价值和应用前景。