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公开(公告)号：CN117430675A
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202311271956.0
申请日：2023-09-27
申请人： 华南农业大学 , 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
IPC分类号： C07K14/165 , C07K1/22 , C12N15/50 , C12N15/70 , C12N15/66 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/58
摘要： 本发明公开了一种用于检测鸡传染性支气管炎的试剂盒的抗原及其制备方法、试剂盒，涉及生物工程技术领域。本发明利用能够稳定表达重组鸡传染性支气管炎病毒核蛋白(N蛋白)的重组菌，在特定条件下诱导表达重组N蛋白并经亲和层析纯化。用纯化出的重组蛋白作为包被抗原，建立了一种简便、特异的间接ELISA方法。本发明还为检测鸡传染性支气管炎病毒抗体提供了特异、敏感、快速、操作简便的试剂盒。
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公开(公告)号：CN110804677B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN201910973936.5
申请日：2019-10-14
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6848 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和/或360‑505R基因缺失株的巢式二重PCR检测引物及试剂盒，八对检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～8所示。本发明利用8对引物巢式二重扩增非洲猪瘟病毒CD2V和360‑505R基因，减少了鉴定不同基因的检测成本和检测时间；可以辨别毒株是否存在基因的缺失，以及是否存在混合感染。对于传统巢式PCR，每次仅扩增一个基因来说，本发明每次PCR反应同时扩增两个基因，成本降低了约1/2；对于普通二重PCR来说，本发明灵敏度提高1010个数量级以上，可达1×10‑18ng/μL，具有广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN110777220B
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN201911129895.8
申请日：2019-11-18
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12Q1/6804 , C12N15/11
摘要： 本发明属于病毒株鉴别方法技术领域，具体为一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株的引物组和探针，包括第一引物组和第一探针；所述第一引物组中的上游引物如序列SEQ ID NO：1所示；所述第一引物组中的下游引物为5’端带有生物素的如序列SEQ ID NO：2所示的DNA分子；所述第一探针为5’端带有羧基荧光素、3’端带有C3‑spacer基团的如序列SEQ ID NO：3所示的DNA分子。同时，还提供了一种用于检测MGF360‑505R基因缺失株的引物组和探针；该引物组和探针组特异性强、灵敏度高，同时，本发明还提出了基于RPA‑LFD技术和上述引物组和探针组的RPA试纸条试剂盒和鉴别方法。
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公开(公告)号：CN116482360A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310619455.0
申请日：2023-05-30
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543 , G01N21/64
摘要： 本发明适用于生物检测技术领域，提供了一种基于生物传感器的快速检测沙门氏菌的方法，包括以下步骤：将待检测牛奶高速离心后，去除上层脂肪和下层沉淀，并调节牛奶的pH值，将处理后的牛奶作为待检测样品；将生物传感器与待检测样品进行混合，捕获待检测样品中可能存在的沙门氏菌；将生物传感器与液体培养基混合，并将得到的混合物置于能使沙门氏菌增殖的条件下进行培养；将培养物吸入无菌注射器中，利用超滤膜过滤后，利用PBS进行洗涤，洗涤后的剩余物在紫外灯照射下观察是否有荧光，有荧光则说明有沙门氏菌，没有荧光则没有沙门氏菌。本发明检测方式简单、快速、便捷，只需根据紫外线照射后是否有荧光现象即可判断是否存在沙门氏菌。
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公开(公告)号：CN116064668A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211408464.7
申请日：2022-11-10
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，其公开了一种重组腺病毒质粒，其核苷酸序列如SEQNO.1所示。该质粒以及基于该质粒的病毒利用1型猪捷申病毒(Porcine Teschovirus‑1)的P2A蛋白具有自我剪切的功能，将其作为连接肽将IBDV的VP2和FAdV‑4的Fiber2蛋白编码基因串联，置于复制缺陷型人5型腺病毒载体的表达盒中，通过一次转录和翻译，可以同时实现2个蛋白的表达，以期为IBD和FAdV‑4二联候选活载体疫苗的研发提供新的思路。该病毒能够稳定表达VP2和Fiber2蛋白，其病毒滴度高。同时，本发明还公开了该质粒的制备方法。
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公开(公告)号：CN115417926A
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202210350779.4
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种大规模提取筋腱中胶原的方法及应用，首先将动物筋腱绞碎，先将动物筋腱置于碱液中浸泡，过滤，收集筋腱，重复浸泡和过滤若干次后，过滤得到含有胶原的溶液，再进行过滤，得到胶原浓缩液；在胶原浓缩液中加入缓冲液进行稀释，重复过滤稀释和浓缩步骤若干次，过滤浓缩后得到胶原溶液，再调节pH，然后进行酶解，酶解后进行过滤；再进行稀释，继续重复过滤浓缩和稀释步骤若干次，过滤后得到胶原蛋白溶液。该提取方法将碱法提取、酸法提取和酶法提取结合，能有效提取动物筋腱中的胶原蛋白且不损害有效成分，适合产业化大规模提取。利用上述提取方法得到胶原蛋白生物活性高，能够很好地促进细胞贴壁和延伸，适用于细胞培养。
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公开(公告)号：CN114703207A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210359526.3
申请日：2022-04-07
申请人： 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种重组质粒的制备方法，将F1片段、F2片段、HA片段或HA‑2P片段、F4片段同源重组得到重组质粒。通过将H9N2亚型禽流感的血凝素蛋白HA茎端C环上第403位异亮氨酸、第411位缬氨酸均突变为脯氨酸，并分别将突变前后的HA基因插在rDHN3‑mF病毒基因组的P基因和M基因之间的非编码区，获得了两株能稳定表达H9N2AIV的HA蛋白的新城疫基因VII型减毒株重组病毒rDHN3mF‑HA‑2P，经WB验证表明双脯氨酸突变后的HA基因与原HA基因相比，其表达效率更高。该重组病毒有望进一步开发成抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗。
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公开(公告)号：CN114703122A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210350780.7
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种使PK‑15细胞形成团块和传代培养的方法，具体步骤为：先对PK‑15细胞进行复苏，再进行细胞传代，然后配制特定的悬浮培养基，将PK‑15细胞与悬浮培养基混合倒入摇瓶中，再将摇瓶置于摇床进行悬浮培养，悬浮培养一段时间后再取样观察细胞生长状况，进行细胞计数，再进行细胞传代，得到团块状细胞，继续对团块状细胞进行细胞传代；连续传代并观察PK‑15细胞状态，得到成球形团块状的PK‑15细胞。本发明的培养方法在在不进行细胞驯化和基因改造的情况下，能直接悬浮PK‑15细胞，使得PK‑15细胞形成球形团生长，球形团块直径为20～80μm，还能够连续传15代以上。
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公开(公告)号：CN109517809B
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN201811449640.5
申请日：2018-11-30
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一株缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒及制备方法与应用。本发明将野生型传染性支气管炎病毒的E蛋白的第26位氨基酸由丙氨酸突变为苯丙氨酸，得到的缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒。本发明通过构建缺失E蛋白离子通道活性的传染性支气管炎重组病毒，以及获得了回复突变体，对突变后的病毒进行分离纯化方法及其特性分析，有助于开发特异性的抗病毒药物和预防病毒感染的有效疫苗，对冠状病毒的研究具有重大的公共卫生和经济意义。
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公开(公告)号：CN113088539A
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN202110217088.2
申请日：2021-02-26
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/40 , A61K39/12 , A61P31/14
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种表达IBDV VP2蛋白的重组腺病毒及制备与应用。通过PCR扩增IBDV的VP2基因片段与穿梭质粒pAdtrack‑GOI的双酶切产物进行同源重组得到穿梭质粒pAdTrack‑GOI‑VP2，将穿梭质粒线性化后与携带了腺病毒骨架质粒pAdEasy‑1的BJ5183感受态细胞进行菌内同源重组得到重组腺病毒载体pAd‑VP2；最后将pAd‑VP2线性化后转染HEK293A细胞得到重组腺病毒rAd‑VP2。本发明重组腺病毒rAd‑VP2纯化后滴度可达6.72×109GFU/mL，接种动物后能够有效刺激特异性抗体的产生，为IBDV亚单位疫苗的研发奠定一定的基础。
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