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公开(公告)号：CN108300704B
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN201810129825.1
申请日：2018-02-08
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了一种用传代细胞系悬浮培养传染性支气管炎病毒的方法，包括：步骤1：取EB66细胞进行复苏与传代培养；步骤2：对步骤1所得EB66细胞进行鸡传染性支气管炎病毒的接种培养；步骤3：接毒后的EB66细胞每隔6‑12h进行取样，测定病毒的EID50，在病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸡传染性支气管炎病毒。本发明采用EB66细胞作为鸡传染性支气管炎病毒的培养基质，利用提供用全悬浮传代细胞系EB66细胞进行高效的病毒生产，有效提高支气管炎病毒的培育滴度，从而为实现鸡传染性支气管炎病毒疫苗的大规模培养，降低病毒的培育成本。
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公开(公告)号：CN106916842B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201710184041.4
申请日：2017-03-24
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12N15/70 , C07K14/435 , C07K1/113 , C07K1/22 , C07K1/34
摘要： 本发明公开一种猫桎首蚤跳蚤唾液过敏原FSA1的表达方法，包括以下步骤：1)使用如SEQ ID No.1和PCR SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增；2)构建原核表达载体；3)筛选；4)诱导表达；5)纯化和6)复性。该方法各步骤操作简单，快速高效，是一种针对跳蚤唾液过敏原FSA1原核表达蛋白的纯化工艺，该工艺克服了已有工艺复性后复性浓度小，蛋白易聚集的缺陷，并且大大提高生产效率，降低生产成本，适合工业化大规模生产。
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公开(公告)号：CN111074000A
公开(公告)日：2020-04-28
申请号：CN201911127987.2
申请日：2019-11-18
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和/或360-505R基因缺失株的三重荧光定量PCR检测材料及试剂盒，检测材料包括引物和探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～9所示。本发明利用三组引物探针进行三重荧光定量PCR扩增非洲猪瘟病毒P72、CD2V和360-505R基因，减少了鉴定不同基因的检测成本和检测时间；可以辨别毒株是否存在基因的缺失，且具有良好的特异性及灵敏度。对于传统qPCR，每次仅扩增一个基因来说，本发明每次PCR反应同时扩增3个基因，成本降低了约2/3。
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公开(公告)号：CN110791591A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201911127959.0
申请日：2019-11-18
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和360-505R双基因缺失疫苗株LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒，所述检测引物包括两套引物，一套引物针对非洲猪瘟病毒野毒株的CD2v序列，能特异性检测非洲猪瘟病毒野毒株；另一套针对双基因缺失疫苗株,引物的位置在于360-505R基因27942-35500位缺失区两侧，能特异性的检测出该非洲猪瘟疫苗株。该检测方法采用恒温反应的检测手段，仅需加热即可实现整个反应，可以实现快速现场检测，所述方法检测灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快，可以作为有效的非洲猪瘟病毒野毒株与CD2v和360-505R双基因缺失疫苗株的的基层检测手段。
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公开(公告)号：CN109593729A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201811638643.3
申请日：2018-12-29
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： C12N7/00 , C12N7/02 , A61K39/235 , A61P31/20
摘要： 一种禽减蛋综合征病毒全悬浮培养方法，包括以下步骤：(1)在EB66悬浮传代细胞系中驯化禽减蛋综合征病毒，得到种毒；(2)将EB66细胞接种至生物反应器，使其在pH＝7.20±0.1的条件下进行悬浮培养；(3)按禽减蛋综合征病毒与细胞培养基体积比2/1000的比例，将步骤(1)所得种毒接种EB66细胞，培养pH＝7.40±0.1，在病毒效价达到最高时收获病毒液并保存。采用上述方法制得病毒液具有高纯度、高滴度的特点，将其灭活后制备的禽减蛋综合征疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。
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公开(公告)号：CN108261543B
公开(公告)日：2019-03-08
申请号：CN201810128488.4
申请日：2018-02-08
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： A61K39/17 , A61K39/215 , A61K39/145 , C12N7/00 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12R1/09
摘要： 本发明提供了一种传代细胞源鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法及其应用，包括步骤如下：取EB66细胞于生物反应器中进行生长培养，用于病毒接种；采用二阶培养法，向EB66细胞接种新城疫病毒、传染性支气管炎病毒或禽流感病毒；在接毒24h后，病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到病毒液；重复上述步骤以分别获得新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液并灭活；将灭活后的新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液混合，制备灭活疫苗。本发明采用EB66传代细胞系进行鸡新城疫病毒、传染性支气管炎和禽流感病毒的培养，避免了使用鸡胚造成胚体异源蛋白和外源病毒污染的风险，提高病毒的生产品质，简化病毒的生产工艺。
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公开(公告)号：CN108486041A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810269359.7
申请日：2018-03-28
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明提供了一种PI3K/Akt信号通路在鸡胚成纤维细胞内对马立克氏病毒增殖的应用及其检测方法，涉及生物信息学技术领域。上述PI3K/Akt信号通路在抑制鸡胚成纤维细胞中马立克氏病病毒增殖的应用证明可以通过抑制PI3K/Akt信号通路，进而抑制马立克氏病毒在鸡胚成纤维细胞内的增殖表达，该应用对进一步揭示鸡的马立克氏病的致病机制以及研发新的针对鸡马立克氏病的抗病毒策略具有积极的意义。同时本发明还优化了适用于检验MDV感染激活PI3K/Akt信号通路的免疫印记实验方法以及检验鸡马立克氏病毒DNA分子水平检测的PCR反应体系和条件。本发明提供的检测方法具有特异性高，灵敏性强和重复性好的特点。
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公开(公告)号：CN110791591B
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN201911127959.0
申请日：2019-11-18
申请人： 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与CD2V和360‑505R双基因缺失疫苗株LAMP检测引物及其LAMP检测试剂盒，所述检测引物包括两套引物，一套引物针对非洲猪瘟病毒野毒株的CD2v序列，能特异性检测非洲猪瘟病毒野毒株；另一套针对双基因缺失疫苗株,引物的位置在于360‑505R基因27942‑35500位缺失区两侧，能特异性的检测出该非洲猪瘟疫苗株。该检测方法采用恒温反应的检测手段，仅需加热即可实现整个反应，可以实现快速现场检测，所述方法检测灵敏度高、特异性强、重复性好、检测速度快，可以作为有效的非洲猪瘟病毒野毒株与CD2v和360‑505R双基因缺失疫苗株的的基层检测手段。
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公开(公告)号：CN109517808A
公开(公告)日：2019-03-26
申请号：CN201811389187.3
申请日：2018-11-21
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/50 , C12N15/63 , A61K39/215 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一株M蛋白糖基化位点突变的传染性支气管炎病毒及其制备方法与应用。本发明利用反向遗传学技术，获得IBV全长感染性克隆，再以其为模板，对IBV M蛋白糖基化位点进行N→D的点突变，体外转录电转染细胞后获得IBV M蛋白突变病毒株。该突变株的获得有助于研究IBV M蛋白糖基化位点突变对M蛋白的结构、病毒的增殖能力及其对细胞内质网压力的影响，判断病毒的复制能力和致病力是否发生改变，并且为研制IBV减毒疫苗提供了参考方法。
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公开(公告)号：CN109207439A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811172272.4
申请日：2018-10-09
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种鸭瘟病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸭瘟病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID50，在病毒TCID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸭瘟病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。
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