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公开(公告)号：CN115417926A
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202210350779.4
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种大规模提取筋腱中胶原的方法及应用，首先将动物筋腱绞碎，先将动物筋腱置于碱液中浸泡，过滤，收集筋腱，重复浸泡和过滤若干次后，过滤得到含有胶原的溶液，再进行过滤，得到胶原浓缩液；在胶原浓缩液中加入缓冲液进行稀释，重复过滤稀释和浓缩步骤若干次，过滤浓缩后得到胶原溶液，再调节pH，然后进行酶解，酶解后进行过滤；再进行稀释，继续重复过滤浓缩和稀释步骤若干次，过滤后得到胶原蛋白溶液。该提取方法将碱法提取、酸法提取和酶法提取结合，能有效提取动物筋腱中的胶原蛋白且不损害有效成分，适合产业化大规模提取。利用上述提取方法得到胶原蛋白生物活性高，能够很好地促进细胞贴壁和延伸，适用于细胞培养。
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公开(公告)号：CN114703122A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210350780.7
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种使PK‑15细胞形成团块和传代培养的方法，具体步骤为：先对PK‑15细胞进行复苏，再进行细胞传代，然后配制特定的悬浮培养基，将PK‑15细胞与悬浮培养基混合倒入摇瓶中，再将摇瓶置于摇床进行悬浮培养，悬浮培养一段时间后再取样观察细胞生长状况，进行细胞计数，再进行细胞传代，得到团块状细胞，继续对团块状细胞进行细胞传代；连续传代并观察PK‑15细胞状态，得到成球形团块状的PK‑15细胞。本发明的培养方法在在不进行细胞驯化和基因改造的情况下，能直接悬浮PK‑15细胞，使得PK‑15细胞形成球形团生长，球形团块直径为20～80μm，还能够连续传15代以上。
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公开(公告)号：CN115074389A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210661981.9
申请日：2022-06-13
申请人： 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C12N15/867 , C12N15/11 , C12N15/66 , C12N15/40 , C12N5/10 , C12Q1/70 , G01N33/569 , G01N33/58 , C12R1/91 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的细胞系的构建方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该构建方法包括：(1)采用构建重组质粒；(2)采用所述重组质粒转染细胞，得到重组细胞；(3)将重组细胞和慢病毒包装质粒共同培养，得到慢病毒样颗粒的培养液；(4)将慢病毒样颗粒的培养液感染宿主细胞，筛选得到稳定株，培养后获得细胞系。实施本发明，可稳定提升NS1mRNA和蛋白的表达水平。
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公开(公告)号：CN115011562A
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN202210451385.8
申请日：2022-04-24
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开一种鸡新城疫禽流感二联疫苗的制备方法，其包括：(1)提供MDCK悬浮细胞，并培养传代；(2)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～5mg/L的地塞米松和2～8mg/L依达拉奉，得到鸡新城疫培养基；将鸡新城疫病毒接种至所述鸡新城疫培养基，培养得到新城疫病毒液；(3)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～6g/L的超滤过的酶消化产物，得到禽流感培养基；将禽流感病毒接种至所述禽流感培养基，培养得到禽流感病毒液；(4)将所述新城疫病毒液、禽流感病毒液灭活，并与辅料混合，得到鸡新城疫禽流感二联疫苗。本发明的制备方法简化了病毒繁殖培养工艺，提高了病毒滴度，进而得到的抗体效价高，攻毒保护效果好。
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公开(公告)号：CN108300704A
公开(公告)日：2018-07-20
申请号：CN201810129825.1
申请日：2018-02-08
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了一种用传代细胞系悬浮培养传染性支气管炎病毒的方法，包括：步骤1：取EB66细胞进行复苏与传代培养；步骤2：对步骤1所得EB66细胞进行鸡传染性支气管炎病毒的接种培养；步骤3：接毒后的EB66细胞每隔6-12h进行取样，测定病毒的EID50，在病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸡传染性支气管炎病毒。本发明采用EB66细胞作为鸡传染性支气管炎病毒的培养基质，利用提供用全悬浮传代细胞系EB66细胞进行高效的病毒生产，有效提高支气管炎病毒的培育滴度，从而为实现鸡传染性支气管炎病毒疫苗的大规模培养，降低病毒的培育成本。
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公开(公告)号：CN116064668A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211408464.7
申请日：2022-11-10
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，其公开了一种重组腺病毒质粒，其核苷酸序列如SEQNO.1所示。该质粒以及基于该质粒的病毒利用1型猪捷申病毒(Porcine Teschovirus‑1)的P2A蛋白具有自我剪切的功能，将其作为连接肽将IBDV的VP2和FAdV‑4的Fiber2蛋白编码基因串联，置于复制缺陷型人5型腺病毒载体的表达盒中，通过一次转录和翻译，可以同时实现2个蛋白的表达，以期为IBD和FAdV‑4二联候选活载体疫苗的研发提供新的思路。该病毒能够稳定表达VP2和Fiber2蛋白，其病毒滴度高。同时，本发明还公开了该质粒的制备方法。
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公开(公告)号：CN114703207A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210359526.3
申请日：2022-04-07
申请人： 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种重组质粒的制备方法，将F1片段、F2片段、HA片段或HA‑2P片段、F4片段同源重组得到重组质粒。通过将H9N2亚型禽流感的血凝素蛋白HA茎端C环上第403位异亮氨酸、第411位缬氨酸均突变为脯氨酸，并分别将突变前后的HA基因插在rDHN3‑mF病毒基因组的P基因和M基因之间的非编码区，获得了两株能稳定表达H9N2AIV的HA蛋白的新城疫基因VII型减毒株重组病毒rDHN3mF‑HA‑2P，经WB验证表明双脯氨酸突变后的HA基因与原HA基因相比，其表达效率更高。该重组病毒有望进一步开发成抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗。
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公开(公告)号：CN108635574A
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201810461794.X
申请日：2018-05-15
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： A61K39/145 , A61P31/16 , A61K39/12 , A61P31/14 , C12N7/00
CPC分类号： A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/552 , A61K2039/70 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12N7/00 , C12N2760/16134 , C12N2760/16151 , C12N2770/24034 , C12N2770/24051 , A61K2300/00
摘要： 本发明公开一种生产鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗的方法及其产品，该方法包括以下步骤：用EB66传代细胞分别接种鸭坦布苏、禽流感病毒株；在病毒ELD50或EID50效价达到最高时分别收获鸭坦布苏、禽流感病毒并保存；分别灭活鸭坦布苏、禽流感病毒；将灭活后的鸭坦布苏和禽流感病毒在吐温-80中完全混合，得到病毒混合液，在病毒混合液中加入已灭菌的油相佐剂，混合乳化，配制成鸭坦布苏、禽流感二联灭活疫苗。本发明通过采用EB66传代细胞系分别进行鸭坦布苏和禽流感病毒的培养，然后制备成的鸭坦布苏、禽流感二联疫苗具有生产工艺稳定、批间差异小、质量可控、产量和质量显著提高等优点。
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公开(公告)号：CN109207439A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201811172272.4
申请日：2018-10-09
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明公开了一种鸭瘟病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：鸭胚细胞衍生的传代细胞系的复苏与传代培养。步骤2：采用二阶培养法，向全悬浮培养的鸭胚细胞衍生的传代细胞系接种鸭瘟病毒，实现病毒大规模培养。步骤3：接毒后，每隔12h取样测定病毒的TCID50，在病毒TCID50达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的鸭瘟病毒。本发明的全悬浮培养方法提高了病毒培养规模和效率，符合未来疫苗生产的趋势，有广阔的应用前景及蕴含良好的经济效益。
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公开(公告)号：CN108261543A
公开(公告)日：2018-07-10
申请号：CN201810128488.4
申请日：2018-02-08
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 华南农业大学 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： A61K39/17 , A61K39/215 , A61K39/145 , C12N7/00 , A61P31/14 , A61P31/16 , C12R1/09
CPC分类号： A61K39/12 , A61K2039/5252 , A61K2039/70 , C12N7/00 , C12N2760/16134 , C12N2760/16152 , C12N2760/18134 , C12N2760/18152 , C12N2770/20034 , C12N2770/20052
摘要： 本发明提供了一种传代细胞源鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法及其应用，包括步骤如下：取EB66细胞于生物反应器中进行生长培养，用于病毒接种；采用二阶培养法，向EB66细胞接种新城疫病毒、传染性支气管炎病毒或禽流感病毒；在接毒24h后，病毒EID50达到最高时收获病毒并保存，得到病毒液；重复上述步骤以分别获得新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液并灭活；将灭活后的新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和禽流感病毒液混合，制备灭活疫苗。本发明采用EB66传代细胞系进行鸡新城疫病毒、传染性支气管炎和禽流感病毒的培养，避免了使用鸡胚造成胚体异源蛋白和外源病毒污染的风险，提高病毒的生产品质，简化病毒的生产工艺。
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