公开(公告)号：CN101424688A

公开(公告)日：2009-05-06

申请号：CN200810203009.7

申请日：2008-11-20

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  史一博 ,  严亚贤

IPC: G01N33/558

Abstract: 本发明涉及一种生物工程技术领域的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，再借助苯环上的羧基分别与KLH和BSA的氨基形成肽键，形成CPZ偶联物CPZ－KLH和CPZ－BSA。抗原CPZ－KLH用于制备多克隆抗体，抗原CPZ－BSA用于间接酶联免疫吸附实验检测多克隆抗体效价，用胶体金标记多克隆抗体，将其作为示踪标记物，在膜上的检测线上固定抗原CPZ－BSA、质控线上固定抗兔的多克隆抗体，金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据检测线、质控线显色与否来判定阴阳性结果。本发明可直接检测样品中的氯丙嗪小分子，检测速度快，所需时间短。

公开(公告)号：CN1332251A

公开(公告)日：2002-01-23

申请号：CN01126459.4

申请日：2001-08-14

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 陆苹 ,  孙建和 ,  胡志贤 ,  王欣

IPC: C12P21/08 ,  C12N7/01 ,  C12N5/12 ,  C12N5/16 ,  C07K16/00 ,  A61K39/395

Abstract: 抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的生产工艺,首先确立以分离纯化的超强毒,应用短程免疫及细胞杂交融合技术构建分泌抗病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并建立以Fibra－Cel为载体,进一步应用细胞反应器规模培养杂交瘤细胞、高效表达单抗的基础培养条件、系统参数及灌注培养模式,最后确定单克隆抗体规模纯化的具体参数。在获得大量单抗的基础上,将其加工成单抗制剂,并采用饮水口服的治疗方法,经试验证明,应用单抗制剂治疗病鸡,康复率达85%～100%,无不良反应。

公开(公告)号：CN119745826A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411979410.5

申请日：2024-12-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 王兆飞 ,  严亚贤 ,  孙建和 ,  焦升镜

IPC: A61K9/50 ,  A61K35/76 ,  A61K47/42 ,  A61K47/36 ,  A61K47/38 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种大肠杆菌噬菌体微囊化微球及其制备方法和应用。本发明提供了一种大肠杆菌噬菌体微囊化微球，包括以下原料：海藻酸钠溶液、乳清蛋白溶液、氯化钙溶液、羧甲基纤维素溶液和大肠杆菌噬菌体溶液。本发明具体实施例对微囊化微球进行了一系列指标的评价，结果显示：该微囊化微球的粒径约为2.040mm，为比较规则的球形；相对于传统的海藻酸钠微球，该微囊化微球具有更强的疏水效果和更好的热稳定性；并且海藻酸钠、乳清蛋白和羧甲基纤维素的包裹使噬菌体在体外模拟胃液中90min存活率提升约500倍；在模拟肠液中，微囊化微球能够在2h内将包裹的噬菌体完全释放。

公开(公告)号：CN118389443A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410506009.3

申请日：2024-04-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  孔令贺 ,  孙建和 ,  马婧姣

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N7/00 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了猪GSDMD敲除细胞系的构建方法及在PDCoV感染中的应用，属于分子病毒学领域，该猪GSDMD敲除细胞系为靶向敲除GSDMD基因的PDCoV宿主细胞。本发明还公开了猪GSDMD敲除细胞系在提高PDCoV体外培养感染量中的应用。本发明制备了猪GSDMD基因敲除质粒PX459‑GSDMD‑KO和细胞系3D4/21‑GSDMD‑KO，为猪GSDMD在免疫反应及PDCoV病毒感染中的作用研究提供了技术支撑。此外，本发明还提供了利用猪GSDMD敲除细胞系3D4/21‑GSDMD‑KO体外培养PDCoV，显著提高PDCoV病毒的感染量的方法，为PDCoV疫苗的生产奠定重要基础。

公开(公告)号：CN110499314A

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201910749622.7

申请日：2019-08-14

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 马婧姣 ,  谢立香 ,  严亚贤 ,  孙建和

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/79 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及蛋白真核表达启动子与蛋白表达载体及其构建方法与应用。蛋白表达载体是一种环状载体，包含原核复制起点、一个真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒，所述外源基因表达盒自上游至下游依次由蛋白真核表达启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号组成，所述连接片段含有AfeI识别序列。与现有技术相比，本发明的蛋白表达载体利用蛋白真核表达启动子驱动外源基因表达，该载体含有的启动子元件在禽源与人源细胞中均具有高效的蛋白表达效率，而且本载体的构建过程简便、快速、经济、高效。本发明的蛋白表达载体具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN110055254A

公开(公告)日：2019-07-26

申请号：CN201910352557.4

申请日：2019-04-28

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  程玉强 ,  伦敏翔 ,  严亚贤

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用；基于CRISPR/Cas9，设计针对鸡IRF7基因的gRNA靶序列并连接至VK001-02质粒，获得鸡IRF7基因打靶载体；利用脂质体将打靶载体转染至鸡成纤维细胞中。通过嘌呤霉素筛选转染成功的细胞后，经有限倍比稀释法筛选获得敲除chIRF7基因的鸡成纤维细胞。该敲除细胞系经TCID50验证表明其可使病毒滴度增高。该方法适用于鸡天然免疫模式识别受体所介导的干扰素表达通路中重要转录因子IRF7的作用及功能的研究。同时本发明所构建的敲除细胞系可使许多先天免疫通路所介导的干扰素β表达水平下调，利于病毒繁殖，可用于疫苗制备中病毒的扩增。

公开(公告)号：CN102539772B

公开(公告)日：2014-08-06

申请号：CN201210002401.1

申请日：2012-01-06

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  王元凯 ,  孙建和

IPC: G01N33/577

Abstract: 本发明涉及一种检测伏马毒素B1的方法，包括以下步骤：将FB1半抗原与OVA偶联，得到偶联物FB1-OVA；将抗FB1单克隆抗体与免疫磁珠结合；将抗体-磁珠结合物加入EP管中，洗涤，将待侧样品的萃取液加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将OVA-FB1加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将抗FB1单克隆抗体加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，将HRP标记羊抗鼠二抗加入上述管中，震荡；去除上清液，洗涤，加入发光底物，震荡，测定发光值；制作标准曲线，再根据待测样品的发光值，通过标准曲线得到对应的FB1浓度。本发明采用抗FB1单克隆抗体，与其他谷物中的真菌毒素无交叉反应，特异性强，减少了假阳性率。

公开(公告)号：CN102565163B

公开(公告)日：2013-11-20

申请号：CN201210002341.3

申请日：2012-01-06

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  王元凯 ,  孙建和 ,  王斌 ,  秦易

IPC: G01N27/333 ,  G01N27/26

Abstract: 本发明公开了一种丝网印刷电极检测玉米赤霉烯酮的方法。所述丝网印刷电极的工作电极区域涂覆有Nafion-多壁碳纳米管-胶体金-壳聚糖混合物膜层。制备时将多壁碳纳米管活化后和Nafion混合；制备胶体金，利用壳聚糖将Nafion-多壁碳纳米管和胶体金混合均匀；将混合物涂覆工作电极的工作区域上，37℃干燥成膜。本发明检测ZEN的方法是鉴于待测样品若有ZEN毒素，则与抗ZEN抗体竞争结合，使与电极上ZEN-OVA结合的抗体量减少，由此使电极上HRP-羊抗鼠二抗量也减少，并影响ΔI；然后根据ZEN标准品绘制的标准曲线来判定谷物检测样品中ZEN的含量。本发明检测对象单一且针对性强，准确率高，灵敏度强。

公开(公告)号：CN103275946A

公开(公告)日：2013-09-04

申请号：CN201310163704.6

申请日：2013-05-06

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  毛紫薇 ,  吉文汇 ,  王恒安 ,  孙建和

IPC: C12N9/14 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12P19/32 ,  C12P19/40

Abstract: 本发明涉及一种生物技术领域的用于水解ATP的酶制剂ATPase-S及其制备方法；所述酶制剂ATPase-S的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；本发明还涉及前述用于水解ATP的酶制剂ATPase-S的制备方法，所述方法包括如下步骤：步骤一，培养猪链球菌S.suis2-H，制备猪链球菌前噬菌体基因组DNA；步骤二，PCR扩增目的基因；步骤三，构建重组载体，转化大肠杆菌，诱导表达ATPase-S。本发明通过大肠杆菌重组、表达猪链球菌前噬菌体的特异性目的基因，获得了具有生物学活性的ATPase-S融合蛋白，能够高效水解ATP，在pH7、23℃和Mg2+存在的条件下，其活性最强。

公开(公告)号：CN101865924B

公开(公告)日：2013-07-03

申请号：CN201010210195.4

申请日：2010-06-26

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 严亚贤 ,  王雨晨 ,  孙建和

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/531

Abstract: 一种化学检测技术领域的基于免疫磁珠联合酶联免疫吸附试验检测伏马毒素的方法，通过制备伏马毒素-KLH偶联物和伏马毒素-OVA偶联物并将伏马毒素-KLH偶联物与免疫磁珠结合，制备成伏马毒素检测磁珠；再利用伏马毒素-KLH偶联物制备伏马毒素单克隆抗体，并与伏马毒素检测磁珠一并运用竞争ELISA方法进行伏马毒素分子检测，并通过磁性分离法获取伏马毒素检测磁珠，进行显色后通过酶标仪获得检测结果。本发明对低于检测极限的伏马毒素样品，通过免疫磁珠的富集作用以及磁珠在液体中充分扩散使得结合表面积扩大，从而能够间接改变检测极限，提高检测的灵敏度，避免漏检。