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公开(公告)号：CN110628793A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910891844.2
申请日：2019-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用生物传感器筛选精氨酸高产菌株的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种可用于筛选精氨酸高产菌株的生物传感器，此生物传感器含有编码阻遏蛋白的基因argR、编码启动子的基因PargC以及标记基因sacB，使用此生物传感器筛选精氨酸高产菌株具有操作简单、检测周期短、检测效率高的优势。
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公开(公告)号：CN110607319A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201911040157.6
申请日：2019-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种适用于枯草芽孢杆菌分泌表达蛋白的表达载体及应用，属于基因工程和生物技术领域。该分泌载体是将编码信号肽SPphoD的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和编码分子伴侣PrsA的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.3)分别连接到pMA5-P43上构建分泌质粒pMA5-SPP。以pMA5-SPP为载体，在枯草芽孢杆菌中表达L-天冬酰胺酶，其胞外分泌量占总表达量的38％，胞外分泌量是常见信号肽SPpel介导下分泌量的2.95倍。
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公开(公告)号：CN110438097A
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201910750086.2
申请日：2019-08-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体，具体公开了一种热稳定性与酶活提高的L-异亮氨酸羟化酶突变体及其在4-羟基异亮氨酸生产中的应用，属于基因工程技术领域。本发明提出的提高热稳定性的方法可用于其他羟化酶的改造，为生产其他高附加值羟化氨基酸提供了理论指导。利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L-异亮氨酸羟化酶的比酶活可达2.4±0.08U/mg，全细胞重复5批次，连续转化45h，可以得到856.91mM(126.1g/L)的4-HIL，且5批次后，L-异亮氨酸羟化酶的转化能力仍为第一次转化的84.1％。
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公开(公告)号：CN106282080B
公开(公告)日：2019-09-03
申请号：CN201610654331.6
申请日：2016-08-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌来源的甾酮C27‑单加氧酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过基因敲除及加强表达的方法，在新金色分枝杆菌中筛选到甾醇边链降解过程中关键酶SMO的三个同工酶。将其分别在高产雄甾二烯二酮(ADD)的新金色分枝杆菌中加强表达，ADD产量得到明显提高，其中SMO2的效果最明显。通过过量表达SMO2，ADD最终产量从5.2g/L提高到7.3g/L。本发明为微生物发酵法提高ADD产量的工业化提供了有益的指导。
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公开(公告)号：CN109943548A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910265104.8
申请日：2019-04-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法，具体公开了一种通过整合突变改造双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD，修饰pII信号转导蛋白GlnK尿苷酰化，提高L-精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了对双功能尿苷酰转移/去除酶GlnD的整合突变改造，在此基础上过量表达pII信号转导蛋白GlnK，增强GlnK的尿苷酰化。采用5-L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc-HDAA/pXMJ19-glnK发酵至96h，重组菌的L-精氨酸产量达到52.2g/L，生产强度达到0.544g/L·h，实现了L-精氨酸的高产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106191152B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201610574794.1
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明通过增强氨同化作用促进钝齿棒杆菌L‑精氨酸合成。主要是将氨同化途径关键酶钝齿棒杆菌来源谷氨酰胺合酶编码基因glnA和谷氨酸脱氢酶编码基因gdh，以及大肠杆菌来源的天冬氨酸酶编码基因aspA在钝齿棒杆菌SDNN403中过量共表达，可以有效提高钝齿棒杆菌SDNN403L‑精氨酸产量。
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公开(公告)号：CN105274129B
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201510817023.6
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种信号肽及其在利用淀粉产L‑精氨酸重组菌中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过分子克隆技术和基因工程技术将来源Streptomyces kathirae CCTCC M 2012432不带自身信号肽的α‑淀粉酶与不同微生物来源的Sec和Tat两个主要分泌途径的十二条信号肽分别融合，在高产L‑精氨酸菌种中表达，筛选出一条高效分泌α‑淀粉酶的信号肽SEQ ID N0.1。首次报道，以该信号肽介导分泌α‑淀粉酶的重组钝齿棒状杆菌CGMCC No.0890/pMSPamy能利用廉价淀粉发酵生产L‑精氨酸，最优碳源添加条件下5L发酵罐上产量为48g/L。
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公开(公告)号：CN108642100A
公开(公告)日：2018-10-12
申请号：CN201810468484.0
申请日：2018-05-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种在钝齿棒杆菌中合成L-鸟氨酸的方法，属于基因工程和代谢工程领域。本发明利用表达质粒pDXW10质粒，将N-乙酰鸟氨酸脱乙酰酶、N-乙酰谷氨酸合酶进行表达并且对其RBS进行优化同时对起始密码子进行替代。5-L发酵罐发酵培养重组钝齿棒杆菌SYPO/pDXW10-EcargAHY-SmargE b72h，L-鸟氨酸的产量达到46.2g/L，比出发菌株钝齿棒杆菌，L-鸟氨酸的产量提高了62.2％，生产强度达到0.642g/L/h，并且糖酸转化率为0.414g/g。
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公开(公告)号：CN105296456B
公开(公告)日：2018-08-07
申请号：CN201510819438.7
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了种酸性稳定的谷氨酸脱羧酶(GAD)的pH稳定性向中性范围偏移的突变体,属于生物工程领域。将来源于植物乳杆菌GB01‑21谷氨酸脱羧酶的谷氨酸脱羧酶编码基因进行定点突变,主要将第91位的谷氨酸E分别突变为精氨酸R或丙氨酸A。谷氨酸脱羧酶突变体分别在pH6.5时的相对酶活由原来的38%提高至72%或84%,在中性pH范围内的酶活稳定性显著提高。以重组大肠杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时,GABA产量达到260g/L,产率为99.6%;而以重组谷氨酸棒杆菌合成的谷氨酸脱羧酶突变体进行转化时,GABA产量达到116g/L,产率为99.5%。本发明减少了发酵设备在酸性条件下的损耗,为高效合成γ‑氨基丁酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108103049A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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