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    一种基于亲和素-生物素系统细胞图形化芯片及其制备和应用
    51.
    发明授权
    一种基于亲和素-生物素系统细胞图形化芯片及其制备和应用 有权

    公开(公告)号：CN103013821B

    公开(公告)日：2014-11-26

    申请号：CN201210511033.3

    申请日：2012-12-03

    申请人： 清华大学

    发明人： 任大海 ,  尤政 ,  夏亦秋 ,  王俊 ,  谢锦宇

    IPC分类号： C12M1/34 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06

    摘要： 本发明公开了属于生物微系统技术领域的一种基于亲和素-生物素系统细胞图形化芯片及其制备和应用。此方法利用光刻和化学沉积的方法制备亲生物性的六甲基二硅胺点阵列以及生物钝化的聚乙二醇图形化区域；然后在六甲基二硅胺点阵列上形成牛血清白蛋白-生物素、亲和素和生物素化细胞的三明治结构，从而定向排布细胞，实现细胞的分离与定位。本发明的方法所用材料简单，方法简便；通过对HMDS阵列的大小以及排布方式的控制来实现对细胞阵列的排布进行控制；可用于各种细胞的图形化；在芯片的后续检测应用中，单细胞阵列不易被破坏；所用材料以及生化物质对细胞活性影响不大，能够使其用于活体细胞的检测。

    一种染色体核型分析永生化质控细胞库及其构建方法
    52.
    发明公开
    一种染色体核型分析永生化质控细胞库及其构建方法 无效

    公开(公告)号：CN104060329A

    公开(公告)日：2014-09-24

    申请号：CN201310109734.9

    申请日：2013-03-19

    申请人： 翁炳焕

    发明人： 翁炳焕

    IPC分类号： C40B40/02 ,  C40B50/06 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/02

    摘要： 本发明涉及一种用于医疗领域的染色体核型分析永生化质控细胞库及其构建方法，其主要特征是取因诊治需要而作染色体病诊断后并已确诊为疑难染色体异常的剩余的呈贴壁生长的原代或传代活细胞，以转基因技术导入借T4DNA连接酶连接同时经BamHI酶切的pcDNA3.1(-)DNA和PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分离的SV40LTag DNA所构建的SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组质粒，使重组子与细胞DNA整合，以G418筛选整合有重组子的永生化细胞，作传代扩增后冻存活细胞，然后提取数例各自制备的不同病例的细胞，按质控所需比例混合，使原先每例细胞只有一种染色体异常转变为含有不同比例的、易于误诊的多种染色体异常，增加了鉴别诊断、染色体嵌合体诊断的难度和复杂性，标本易得且将废弃的多余细胞转化为有效的质控材料。

    用随机序列标记质粒对DNA片段进行高通量两端测序的方法
    53.
    发明公开
    用随机序列标记质粒对DNA片段进行高通量两端测序的方法 失效

    公开(公告)号：CN103882530A

    公开(公告)日：2014-06-25

    申请号：CN201410116844.2

    申请日：2014-03-26

    申请人： 清华大学

    发明人： 刘晓 ,  徐志超 ,  尉晓林 ,  吴仲义 ,  阮珏

    IPC分类号： C40B40/02 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/68

    摘要： 本发明公开了一种用随机序列标记质粒对DNA片段进行高通量两端测序的方法。本发明还提供了一种用于对DNA片段进行高通量两端测序的质粒库，质粒库中每个质粒均由质粒骨架片段和自上游到下游依次由标记序列1、待测DNA插入位点序列和标记序列2组成的DNA片段连接而成；且质粒库中任两种质粒，所述标记序列1和所述标记序列2的组合彼此不同；且所述质粒骨架片段中不含有与所述待测DNA插入位点序列相同的序列。利用本发明所提供的质粒库构建的文库除了拥有传统文库的特点外，还可以使用高通量的测序法对其中的基因组DNA进行两端测序。本发明使得长片段DNA两端测序具有了快速、便宜且准确的特点。

    一种基于可调节微磁场的细胞阵列芯片
    54.
    发明授权
    一种基于可调节微磁场的细胞阵列芯片 有权

    公开(公告)号：CN102936754B

    公开(公告)日：2014-06-04

    申请号：CN201210479206.8

    申请日：2012-11-22

    申请人： 清华大学

    发明人： 任大海 ,  尤政 ,  王俊 ,  谢锦宇

    IPC分类号： C40B40/02

    摘要： 本发明公开了属于生物医学工程技术领域的一种基于可调节微磁场的细胞阵列芯片。此芯片由基底层、接地层、第一绝缘层、微线圈阵列层、第二绝缘层、铁磁体层、第三绝缘层依次层叠而成，第一绝缘层、第二绝缘层、铁磁体层和第三绝缘层上分别刻蚀有导电窗口；微线圈阵列层由微线圈阵列和正极焊盘构成，铁磁体层对应微线圈阵列层的微线圈有通孔阵列；本发明的芯片利用图形化微线圈阵列形成梯度磁场，形成一些列无形的磁性颗粒牢笼，将磁性颗粒向中心吸引，磁性颗粒一旦进入磁场内部，若没有足够的力就无法使其脱离该磁场的束缚，提高了细胞图形化的效率，缩短细胞图形化的周期，同时使单细胞图形化操作步骤得到简化。

    一种随机shRNA文库的构建方法
    55.
    发明公开
    一种随机shRNA文库的构建方法 无效

    公开(公告)号：CN102925987A

    公开(公告)日：2013-02-13

    申请号：CN201210464692.6

    申请日：2012-11-19

    申请人： 杨国栋 ,  袁丽君 ,  王臻

    发明人： 杨国栋 ,  袁丽君 ,  王臻

    IPC分类号： C40B50/06 ,  C40B40/02 ,  C12N15/85

    摘要： 创建了一种基于pLKO.1慢病毒载体的随机shRNA文库构建方法，其方法为：合成特征性核酸序列(自5’到3’依次为21任意核酸、由Xho1酶切位点形成互补链的小茎环结构)，将其退火后补平成完全的发夹结构，通过连接反应加入shRNA表达所需终止序列和克隆所需3，端酶切位点EcoR1，在此基础上通过DNA聚合酶和单条引物产生其互补链，并再次通过连接反应，给新生成的链的3’端连接上酶切位点Age1；通过PCR的方法扩增同时含有Age1和EcoR1的序列；然后将PCR产物连入pMD-18 simple T载体，再用Xho1酶切后自连的方法，去除shRNA内部额外的序列，最后将插入片段亚克隆至pLKO.1载体中，构建表达完全随机的shRNA文库，并包装成病毒。该文库在筛选致病基因和药物靶点方面具有广阔的应用前景。

    中国林蛙皮cDNA文库
    57.
    发明公开
    中国林蛙皮cDNA文库 无效

    公开(公告)号：CN101671851A

    公开(公告)日：2010-03-17

    申请号：CN200910067567.X

    申请日：2009-09-22

    申请人： 吉林大学

    发明人： 滕利荣 ,  周杰 ,  程瑛琨 ,  孟庆繁 ,  丁天兵

    IPC分类号： C40B40/02 ,  C40B50/06

    摘要： 本发明涉及分子生物学领域及生物制药领域，具体涉及一种中国林蛙皮cDNA文库及其构建方法，并涉及从所构建的cDNA文库中筛选具有抗临床多重耐药菌活性的抗菌肽基因。构建文库所需中国林蛙(Rana temporaria chensinensis，David)为长白山区人工放养，蛙皮为秋季林蛙排卵之前采集。得到的文库特征为，cDNA片段大约分布在0.3～6kb，文库滴度2.4×10 5 pfu/mL，重组率达到99.4％。可从文库中筛选广谱、高效的抗菌肽基因，一方面可以为开发研究新的抗菌肽提供依据；另一方面可以使定向改变抗菌肽的抗菌谱、溶解度、稳定性范围等成为可能。

    一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用
    59.
    发明公开
    一种大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用 无效

    公开(公告)号：CN101451147A

    公开(公告)日：2009-06-10

    申请号：CN200810247367.8

    申请日：2008-12-30

    申请人： 中国科学院微生物研究所

    发明人： 温廷益 ,  邓爱华 ,  张芸 ,  于雷

    IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06 ,  C12R1/125

    摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌－枯草芽孢杆菌穿梭表达载体及其应用。本发明的大肠杆菌－枯草芽孢杆菌穿梭表达载体，包括如下元件：分泌型信号肽的编码序列、枯草芽孢杆菌的复制起始蛋白的编码序列、枯草芽孢杆菌的启动子序列、大肠杆菌的复制起始序列。本发明的载体既能在大肠杆菌内稳定复制，又能在枯草芽孢杆菌内复制并表达。本发明的载体可应用于建立蛋白质突变体基因库，先将突变基因连入载体，使各种突变基因在大肠杆菌中复制，再将其转入枯草芽孢杆菌中进行表达和筛选，构建突变库的效率相当于大肠杆菌操作系统，不但可以简单灵活的控制库容量大小，而且可以充分利用枯草芽孢杆菌宿主细胞的外分泌表达能力，方便突变库性能的检测和筛选。