公开(公告)号：CN113801861B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202111098372.9

申请日：2021-09-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  高松 ,  陈坚 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/81 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种来源于朝鲜淫羊藿的黄酮4′‑O‑甲基转移酶及其应用，属于基因和代谢工程领域。本发明筛选获得了朝鲜淫羊藿来源的的黄酮4‑O‑甲基转移酶，并将其在微生物细胞中进行表达，用于催化8‑异戊烯基山奈酚合成淫羊藿素。本发明构建的重组酿酒酵母可以催化50mg/L的8‑异戊烯基山奈酚，获得2.0mg/L的淫羊藿素，在食品、医药领域有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN116334152A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310228783.8

申请日：2023-03-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  陈坚 ,  李光 ,  曾伟主 ,  李江华

IPC: C12P7/60 ,  C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种可以高效将2,5‑DKG转化为2‑KLG的2,5‑DKG还原酶，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达不同来源的2,5‑DKG还原酶和醛酮还原酶并对比其催化2,5‑DKG的能力，发现了一种新来源的催化能力更强的2,5‑DKG还原酶，并它的一些酶学性质进行了研究。所述2,5‑DKG还原酶可以用于构建葡萄糖至2‑KLG的一步反应，因而所述2,5‑DKG还原酶在化妆品、纺织品、食品领域具有重要作用。

公开(公告)号：CN114934028B

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202210784572.8

申请日：2022-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李冬 ,  陈坚 ,  李江华 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/60 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了L‑山梨糖脱氢酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以氧化葡萄糖酸杆菌来源的L‑山梨糖脱氢酶为出发序列，通过定点突变获得了可以提升2‑KLG产量的L‑山梨糖脱氢酶突变体。表达突变体的重组菌株RS‑V368A、RS‑V336I‑V368A、RS‑V336L‑V368A和RS‑V336M‑V368A发酵72小时后2‑KLG的产量达4.01g/L、4.92g/L、3.84g/L和3.53g/L。

公开(公告)号：CN116200322A

公开(公告)日：2023-06-02

申请号：CN202310143869.0

申请日：2023-02-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  陈坚 ,  平居荣 ,  曾伟主

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12P13/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产L‑酪氨酸的重组大肠杆菌及应用，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明敲除了aroP和tyrP基因，表达大肠杆菌内源的yddG基因来改造大肠杆菌的芳香族氨基酸转运系统，然后异源表达来自双歧杆菌的fpk和表达大肠杆菌内源的ppsA和tktA基因增加莽草酸途径的前体供应，再通过表达aroG和tyrA的抗反馈基因解除3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖酸‑7‑磷酸合成酶、分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶的反馈抑制，增加了莽草酸途径的碳通量。敲除tyrR基因解除TyrR蛋白对莽草酸途径关键酶的阻遏作用，再敲除了trpE和pheA基因阻断莽草酸途径的部分副反应，使得L‑酪氨酸的合成通量增加。最后敲除内源poxB基因实现对乙酸途径的改造，实现了高葡萄糖浓度的稳定发酵性能。

公开(公告)号：CN116004489A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202210781815.2

申请日：2022-07-04

Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 ,  江南大学 ,  江苏华熙益能生物科技有限公司

Inventor： 周景文 ,  黄忠实 ,  张天萌 ,  张伟平 ,  徐沙 ,  曾伟主 ,  高萌

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12P19/30 ,  A61K8/67 ,  A61K8/99 ,  A61K31/706 ,  A61K35/74 ,  A61P17/18 ,  A61P39/06 ,  A61Q19/08 ,  A23L33/135 ,  A23K10/18 ,  A23K10/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产NMN的重组大肠杆菌及其应用，属于基因工程及生物工程技术领域。本发明通过在大肠杆菌中表达如SEQ ID NO.1所示的烟酰胺磷酸核糖基转移酶NAMPT，表达如SEQ ID NO.2所示的PRPP合酶BaPRS，表达如SEQ ID NO.3所示的转运蛋白BMpnuC，并敲除pncC基因、ushA基因、nadR基因和purR基因，提高了大肠杆菌细胞中的NMN的积累量。本发明还通过优化发酵条件，使NMN可以在胞外高效积累，在5L发酵体系下可获得20g/L以上的NMN，在食品、药品、化妆品、饲料、纺织品等领域具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN115975901A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202310084887.6

申请日：2023-02-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  陈坚 ,  刘世柯 ,  曾伟主

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/61 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12P17/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及工程大肠杆菌合成牡荆素和荭草苷的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建了一株能充足供应糖基供体UDPG的菌株，通过使用CRISPR‑Cas9系统敲除糖酵解途径关键基因pgi和zwf，以及敲除了UDPG合成路径的旁路基因ugd，gcd和otsA；使用pETDuet‑1质粒过量表达大肠杆菌内源的UDPG关键基因磷酸葡萄糖变位酶基因(pgm)和UTP‑葡萄糖‑1‑磷酸尿苷酸转移酶(galU)，并使用pACYCDuet质粒游离表达UDP尿苷激酶(ndk)，构建一株能充足供应UDPG菌株，并在此菌株的基础上表达金莲花来源的8位碳苷糖基转移酶TcCGT1，以黄酮或其他类黄酮为底物用于合成糖基产物，在本发明中以木犀草素、芹菜素为例进行糖基产物牡荆素和荭草苷的发酵生产，最终，在5L发酵罐中牡荆素和荭草苷的产量分别达到17.25g/L和36.52g/L。

公开(公告)号：CN115948312A

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202211345561.6

申请日：2022-10-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  王炼 ,  曾伟主 ,  余世琴 ,  陈坚

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12N15/31 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种生产咖啡酸的重组大肠杆菌及应用，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明在大肠杆菌中异源表达约氏黄杆菌的酪氨酸解氨酶FjTAL和大肠杆菌BL21(DE3)内源的hpaBC，实现了咖啡酸的合成；并通过过量表达来源于皮状丝孢酵母的酪氨酸解氨酶TcTAL，减少了咖啡酸合成的中间产物的积累；通过敲除咖啡酸合成前体物酪氨酸合成的竞争途径，强化辅因子的合成和过表达多酚转运蛋白，使咖啡酸的产量得到明显提高。本发明构建的工程菌株咖啡酸的产量可达775.7mg/L，为工业化生产咖啡酸及其衍生物提供了一种新的方法。

公开(公告)号：CN115927150A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202211526894.9

申请日：2022-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  李宁 ,  余世琴 ,  曾伟主 ,  陈坚 ,  堵国成

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/52 ,  C12N15/31 ,  C12N15/77 ,  C12P13/06 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一株高产L‑高丝氨酸谷氨酸棒杆菌突变株的构建与应用，属于发酵工程技术领域。本发明以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌株，敲除调控蛋白McbR、氨基酸胞内转运蛋白MetD、高丝氨酸激酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、半胱氨酸β裂解酶、O‑乙酰高丝氨酸巯基化酶，弱化异柠檬酸脱氢酶、二氢吡啶酸合酶，过表达丙酮酸羧化酶基因突变体、天冬氨酸激酶突变体，天冬氨酸半醛脱氢酶、高丝氨酸脱氢酶、支链氨基酸转运蛋白BrnF、支链氨基酸转运蛋白BrnE，天冬氨酸氨基转移酶、双功能天冬氨酸激酶/高丝氨酸脱氢酶1突变体、NADP+依赖的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶。本发明提供的重组菌发酵罐上培养96h，L‑高丝氨酸的产量可达到63.5g/L。

公开(公告)号：CN115786154A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211538674.8

申请日：2022-12-01

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  曾伟主 ,  张云亮 ,  刘松 ,  陈坚 ,  余世琴

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12P5/02 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了通过提升乙醇耐受性高产角鲨烯重组酿酒酵母工程菌株及应用，属于基因工程和生物工程技术领域。本发明扩大MVA途径的代谢流，解除路径的代谢阻碍，使整个代谢路径畅通，保证充足的乙酰辅酶A最大极限的用于产物积累。通过海藻糖合成及热激蛋白的调节，增强了胁迫环境下的菌株耐受力，使得工程菌株在高浓度乙醇下依旧具有优良的代谢及生长生产能力。改造后的酿酒酵母菌株活性提高了80.21％，乙醇耐受能力提高到了30g/L，并且在50g/L乙醇胁迫下依旧具备优良活性。通过代谢工程改造与胁迫环境耐受能力的改造相结合，酿酒酵母发酵角鲨烯产量达到27.33g/L，细胞生产干重650.13mg/gDCW。

公开(公告)号：CN114806999B

公开(公告)日：2022-09-27

申请号：CN202210757779.6

申请日：2022-06-30

Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 ,  江南大学 ,  江苏华熙益能生物科技有限公司

Inventor： 周景文 ,  邓汉宁 ,  张天萌 ,  张伟平 ,  刘云鹏 ,  徐沙 ,  曾伟主 ,  余世琴

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12P17/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基因工程菌及其在制备二氢大豆苷元中的应用，属于生物工程技术领域。本发明通过全细胞催化实验筛选了并鉴定出一组具有大豆苷元还原酶活性的酶，其中氨基酸序列如SEQ ID NO.2~SEQ ID NO.6所示的酶具有大豆苷元还原酶活性，其中有氨基酸序列如SEQ ID NO.2的酶催化活性显著高于来源于Slackia isoflavoniconvertens的大豆苷元还原酶，转化率高达58%。氨基酸序列如SEQIDNO.13~SEQIDNO.16所示的酶的转化率分别为6%、3%、8%、7%。本发明为大豆苷元还原成二氢大豆苷元提供丰富的可选酶，也为大豆苷元的进一步还原提供更多的可用的酶元件，为促进下游高附加值产品的产量提供了可能性，推动高性能大豆苷元还原酶和二氢大豆苷元的产业化。