一种基于多重PCR和产物分选建库方法及磁珠分选方法及应用

    公开(公告)号:CN118308470A

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202410287890.2

    申请日:2024-03-13

    申请人: 东华大学

    摘要: 一种基于多重PCR和产物分选建库方法及磁珠分选方法及应用,涉及核酸检测领域。本发明采用极低循环数多重PCR对靶标区段进行扩增,提高了扩增子间的均一性;随后在扩增产物中添加Carry DNAs并进行两轮磁珠分选,此步骤避免了扩增产物大量丢失。最后通过PCR反应连接测序引物形成适合于NGS测序平台的扩增子。利用极低循环数的多重PCR,避免了高循环带来的扩增子间的不均一性和产生的大量引物二聚体;通过添加Carry DNAs的两轮磁珠分选能够避免扩增产物丢失,并提供有效的质量控制,方便后续实验。该技术是一种成本低廉,操作方便,适合于常规实验室的多重PCR扩增捕获建库方法。

    一种超级电容器用富含介孔的分级多孔碳材料的制备方法

    公开(公告)号:CN110862077B

    公开(公告)日:2022-11-04

    申请号:CN201911133348.7

    申请日:2019-11-19

    申请人: 东华大学

    发明人: 赵亚萍 李凯

    IPC分类号: C01B32/05 H01G11/32 H01G11/24

    摘要: 本发明涉及一种超级电容器用富含介孔的分级多孔碳材料的制备方法。该方法包括:将木质素、丝胶与硫酸溶液混合,超声分散,将得到的悬浊液水热反应,水洗,烘干,然后与活化剂混合,活化反应,再浸泡到盐酸溶液中,洗涤,抽滤。该方法原料来源丰富且成本低,工艺简单,得到的分级多孔碳材料结构规整,孔径分级清晰,其表面呈现出多孔结构,将其制备成电极后具有较大电容且倍率性能优异,经过长时间循环后结构依旧稳定,满足了超级电容器开发的需要。

    一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法

    公开(公告)号:CN105695581A

    公开(公告)日:2016-06-22

    申请号:CN201610136155.7

    申请日:2016-03-10

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法,包括:按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组,并在组内调整引物浓度比例;构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板,进行三轮多重竞争性PCR反应;混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序,提取数据并分析,即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台,准确快速定量目标模板和内参照模板,并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析,流程简单易行,价格低廉;当需要分析多样本间多基因表达差异时,不失为一种具有高准确度,通量适中,成本廉价的方法。

    一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法

    公开(公告)号:CN104170792B

    公开(公告)日:2016-06-08

    申请号:CN201410397040.4

    申请日:2014-08-13

    申请人: 东华大学

    IPC分类号: A01K67/02 C12Q1/68

    摘要: 本发明涉及一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法,包括:将ZZ2小鼠与小鼠C57BL/6J杂交,获得F1代,取F1代小鼠与C57BL/6J回交,获得F2代,通过基因分型筛选出整个1号染色体为杂合状态的小鼠;F2代小鼠与C57BL/6J回交,以相同的方式回交,筛选10代后,形成1号染色体为杂合状态,其余染色体均为纯合C57BL/6J基因型的小鼠群体;鉴定回交小鼠的基因DNA;1号染色体为ZZ2与B6杂合状态的回交小鼠经过10代回交后,育成携带ZZ2小鼠1号染色体的同源基因导入近交系,通过兄妹自交和基因鉴定筛选,即得。

    一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法

    公开(公告)号:CN103937826B

    公开(公告)日:2016-04-06

    申请号:CN201410136599.1

    申请日:2014-04-04

    申请人: 东华大学

    IPC分类号: C12N15/66

    摘要: 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法,包括:用PCR方法获得目的基因,将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下,与目的基因连接克隆到pUC19载体上,然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下,克隆到PB载体上,获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核,得到转基因小鼠,用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能,并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。

    一种mir-505双等位基因敲除的方法

    公开(公告)号:CN104651401A

    公开(公告)日:2015-05-27

    申请号:CN201510098102.6

    申请日:2015-03-05

    申请人: 东华大学

    摘要: 本发明涉及一种mir-505双等位基因敲除的方法,包括:构建两种针对mir-505基因的打靶载体,在哺乳动物细胞中通过CRISPR/Cas系统介导打靶载体对mir-505基因进行替换敲除,利用G418抗性筛选得到mir-505单等位基因敲除细胞,并在该细胞基础上再一次利用CRISPR/Cas系统和绿色荧光打靶载体作用对另一条mir-505进行敲除,通过荧光筛选得到mir-505双等位基因敲除的细胞。本发明为构建基因彻底敲除细胞模型提供帮助,具有良好的应用前景。