公开(公告)号：CN106399366A

公开(公告)日：2017-02-15

申请号：CN201610786071.8

申请日：2016-08-30

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李秋艳 ,  李宁 ,  李向清 ,  刘原武 ,  温啸 ,  李燕 ,  宋慧霞 ,  李志远 ,  张在虎 ,  张久明 ,  李向东

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/877 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/0375 ,  C07K14/775 ,  C12N5/0603 ,  C12N15/65 ,  C12N15/66 ,  C12N15/8778

Abstract: 本发明提供一种猪ApoE基因敲除打靶载体及其构建方法。所述打靶载体是以载体pLoxPneo作为骨架载体，还包括正筛选元件、负筛选标记基因以及猪ApoE基因的5’同源臂和3’同源臂。本发明还提供所述打靶载体在制备猪ApoE基因敲除动物模型中的应用。利用本发明方法成功获得了健康存活的ApoE基因敲除的纯合子小型猪，为心血管疾病的新药创制奠定基础，同时为开展病理研究、药物筛选、药效评价等提供保障。

公开(公告)号：CN103320389A

公开(公告)日：2013-09-25

申请号：CN201210079113.6

申请日：2012-03-23

Applicant: 南开大学 ,  中国农业大学

Inventor： 李治国 ,  刘林 ,  李宁 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  宋致远 ,  刘娜 ,  叶孝颖 ,  王玲玲

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/873 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027 ,  C12N15/55 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明是一种高表达猪HDAC6且具有高抗病毒感染能力的转基因猪及其制备方法。该方法是将序列表中序列1或序列2的DNA序列导入哺乳动物细胞中，获得高表达猪HDAC6蛋白的转基因细胞；以所述转基因细胞为核移植供体细胞，离体的卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得克隆胚胎；将所述的克隆胚胎通过非手术法移入家畜子宫内进行妊娠，获得转基因家畜。本发明的方法能在转基因猪体内稳定表达猪HDAC6，显著提高猪的抗病毒感染能力。

公开(公告)号：CN104419719A

公开(公告)日：2015-03-18

申请号：CN201310392856.3

申请日：2013-09-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  吴森 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  赵蕊

IPC: C12N15/85 ,  A61D19/00 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。

公开(公告)号：CN104419719B

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201310392856.3

申请日：2013-09-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李宁 ,  孙照霖 ,  康倩倩 ,  吴森 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  赵蕊

IPC: C12N15/85 ,  A61D19/00 ,  A01K67/027 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于基因工程领域，本发明提供了一种转基因猪筛选标记基因敲除的方法，利用猪精子特异诱导启动子启动Cre/loxP位点特异重组酶系统，建立的自我剪切元件PCN，正常进行打靶筛选阳性克隆，进行SCNT获得founder阳性转基因猪后，通过配种，自我剪切敲除标记基因。其中剪切元件PCN中：P代表猪精子特异启动子，C代表Cre酶基因，N代表打靶时所需的正筛选标记neo基因。由于Cre酶是在精子成熟时特异启动，因此后代即可获得敲除筛选标记neo基因的猪，因此方便的获得筛选标记基因敲除的猪。

公开(公告)号：CN104789593A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201510158978.5

申请日：2015-04-03

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李宁 ,  李向清 ,  李秋艳 ,  温啸 ,  李燕 ,  宋慧霞 ,  李志远 ,  张佳 ,  张在虎 ,  张久明

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供了一种基因打靶载体，所述基因打靶载体包括人血清白蛋白基因、正筛选基因、负筛选基因和猪血清白蛋白基因的5’同源臂和3’同源臂，其中，所述正筛选基因的两端具有重组酶识别序列。利用本发明所提供的打靶载体可以实现基因打靶克隆猪纯合子的血液中只表达人血清白蛋白，不表达猪自身的血清白蛋白，利于后续从猪的血液中高效分离纯化人血清白蛋白；从而为利用猪的血液作为生物反应器生产人血清白蛋白的研究和产业化应用提供支持。