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公开(公告)号：CN110714025A
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201810772549.0
申请日：2018-07-13
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体公开了一种靶向猪TTN基因的打靶载体及其应用。所述打靶载体是基于CRISPR/Cas9系统的sgRNA表达载体，其中，sgRNA的靶标序列分别位于猪TTN基因的第278个外显子。利用本发明所述打靶载体对猪TTN基因进行靶向敲除，敲除效率可达到11.1％，将TTN基因敲除成功的体细胞通过体细胞核移植技术还可进一步构建TTN基因敲除猪模型，为研究扩张型心肌病(DCM)的分子机制提供了材料。
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公开(公告)号：CN111944811B
公开(公告)日：2022-02-11
申请号：CN202010746768.9
申请日：2020-07-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/90 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/11 , C12Q1/6888 , C12Q1/02 , A01K67/027 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及靶向敲除FRZB基因的双sgRNA和敲除FRZB基因的猪成纤维细胞系及其应用。本发明提供了靶向敲除FRZB基因的双sgRNA，针对FRZB基因第一外显子上两个位点进行切割，后将所述sgRNA构建至表达载体后通过优化的电转体系转染猪成纤维细胞，再利用流式细胞仪分选出高纯度的阳性单克隆细胞，经基因组鉴定筛选得到FRZB敲除的细胞系。本发明解决了构建敲除细胞系过程中转染效率、打靶效率低、单克隆纯度低的难题，操作简便且得到了较长片段删除的编辑细胞系。涉及到的细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备，为深度挖掘FRZB基因生物学功能提供了较好的研究工具。
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公开(公告)号：CN111944811A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010746768.9
申请日：2020-07-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/90 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/11 , C12Q1/6888 , C12Q1/02 , A01K67/027 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及靶向敲除FRZB基因的双sgRNA和敲除FRZB基因的猪成纤维细胞系及其应用。本发明提供了靶向敲除FRZB基因的双sgRNA，针对FRZB基因第一外显子上两个位点进行切割，后将所述sgRNA构建至表达载体后通过优化的电转体系转染猪成纤维细胞，再利用流式细胞仪分选出高纯度的阳性单克隆细胞，经基因组鉴定筛选得到FRZB敲除的细胞系。本发明解决了构建敲除细胞系过程中转染效率、打靶效率低、单克隆纯度低的难题，操作简便且得到了较长片段删除的编辑细胞系。涉及到的细胞系可作为体细胞核移植的供体，用于转基因猪的制备，为深度挖掘FRZB基因生物学功能提供了较好的研究工具。
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公开(公告)号：CN108949832A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810771366.7
申请日：2018-07-13
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/90 , C12N9/22 , C12N15/877 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/907 , A01K67/0275 , A01K2207/15 , A01K2227/108 , A01K2267/0306 , C12N9/22 , C12N15/8778
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体公开一种用于敲除猪GHR基因的打靶载体及其应用。所述打靶载体是基于CRISPR/Cas9系统的sgRNA表达载体，其中，sgRNA的靶标序列分别位于猪GHR基因的第10外显子和3′UTR上。利用本发明所述打靶载体对猪GHR基因进行靶向敲除，敲除效率可达到12.7％，将GHR基因敲除成功的体细胞通过体细胞核移植技术还可进一步构建GHR基因敲除猪模型，为研究GHR基因的生理作用和分子机制提供材料。
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公开(公告)号：CN108432404A
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201810305235.X
申请日：2018-04-08
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及一种开沟施肥机，包括液压系统、肥箱(6)、机架(16)、肥箱开口度调节装置、肥箱链板式输肥装置、单沟施肥装置、双沟施肥装置、开沟深度调节装置、行走机构。该机可通过液压系统调节开沟深度、施肥量；该机具有单沟施肥装置、双沟施肥装置，且可更换使用；当该机匹配单沟施肥装置时，可实现对行距较小的果树施肥；当该机匹配双沟施肥装置时，可实现对行距较大的果树施肥，使开沟施肥靠近果树根系，并提高工作效率。本发明适用于果园有机肥机械化施肥，可适应不同行距的果树开沟、施肥、覆土一体化机械化作业，并可调节开沟深度、施肥量。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116617414A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310345367.6
申请日：2023-03-31
Applicant: 中国农业大学
IPC: A61K48/00 , A61K31/05 , A61K9/127 , A61K47/24 , A61K47/28 , A61K47/42 , A61P31/16 , B82Y5/00 , B82Y40/00
Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种脂质体，所述脂质体内包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚；所述Cas13d mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.81所示。该脂质体包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚，具有良好的抗病毒效果和广谱性；同时本发明还公开了该脂质体的应用以及制备方法。
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公开(公告)号：CN110004144B
公开(公告)日：2021-04-06
申请号：CN201910166863.9
申请日：2019-03-06
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/85 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明提供了一种猪小肠上皮细胞表达的PGC启动子及其应用，该PGC启动子核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，本发明通过在线网站预测PGC可靠启动子区；化学合成方法合成引物；通过限制性酶切位点MluⅠ和NheⅠ，将PGC启动子序列插入pGL3‑Basic载体，得到PGC‑双荧光素酶重组质粒；转染大肠杆菌进行质粒扩增，提取质粒，测序验证；转染入猪小肠上皮细胞，发现猪源PGC启动子可在猪小肠上皮细胞中启动双荧光素酶基因表达，说明所述启动子能够调控下游基因在猪小肠上皮细胞中表达，有利于构建稳定高效的小肠转录调控元件，在制备转基因动物和小肠疾病基因治疗研究中具有应用价值。
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公开(公告)号：CN105462970B
公开(公告)日：2020-03-31
申请号：CN201510954779.5
申请日：2015-12-17
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/11 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体公开了一个猪特异性友好位点Pifs501。所述友好位点Pifs501在基因组上的位置为：第16号染色体上第44288819bp(NC_010458.3，基于猪基因组序列信息版本号Sscrofa10.2，2011年9月)。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs501可用于外源基因的稳定表达，解决转基因过程中外源基因表达的不稳定以及位置效应的不可预知性等问题。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs501，使得对大家畜进行定点整合外源基因变得可靠，为大家畜的定点整合奠定了基础。本发明针对猪特异性友好位点Pifs501提供的打靶载体可以高效特异的实现打靶。
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公开(公告)号：CN110616221A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910972235.X
申请日：2019-10-14
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N5/10 , C12N15/11 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种猪小肠上皮细胞启动子SIECP及其应用。本发明公开的猪小肠上皮细胞启动子SIECP为序列表中序列1所示的DNA分子。本发明的SIECP，可以在小肠上皮细胞中启动目的基因表达，可用于培育转基因动物，为构建稳定、高效的小肠转录调控元件提供理论依据，对环境友好型转基因动物的生产以及小肠疾病的基因治疗研究具有参考价值，在生命科学领域以及小肠疾病治疗领域有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN105462970A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201510954779.5
申请日：2015-12-17
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/11 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体公开了一个猪特异性友好位点Pifs501。所述友好位点Pifs501在基因组上的位置为：第16号染色体上第44288819bp(NC_010458.3，基于猪基因组序列信息版本号Sscrofa10.2，2011年9月)。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs501可用于外源基因的稳定表达，解决转基因过程中外源基因表达的不稳定以及位置效应的不可预知性等问题。本发明提供的猪特异性友好位点Pifs501，使得对大家畜进行定点整合外源基因变得可靠，为大家畜的定点整合奠定了基础。本发明针对猪特异性友好位点Pifs501提供的打靶载体可以高效特异的实现打靶。
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