一株产碱性蛋白酶菌株、所产碱性蛋白酶及方法

    公开(公告)号:CN113817629B

    公开(公告)日:2023-05-02

    申请号:CN202110869761.0

    申请日:2021-07-30

    发明人: 贡国鸿 吴跃进

    IPC分类号: C12N1/20 C12N9/54 C12R1/07

    摘要: 本发明公开一株产碱性蛋白酶菌株,涉及生物技术领域,所述菌株为柯赫芽孢杆菌(Bacillus kochii),所述菌株的保藏日期为2020年6月8日,保藏单位为中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北武汉市八一路珞珈山武汉大学,保藏编号为CCTCC M 2020180。本发明还提供上述菌株所产碱性蛋白酶和碱性蛋白酶的生产方法。本发明的有益效果在于:本发明中的菌株可以高效产碱性蛋白酶,所产碱性蛋白酶在55℃活性达到最高,在pH 10‑11时酶活性最高,二价阳离子中Mg2+、Mn2+对酶活有正向提升作用。

    一种固定化酶的制备方法及其在京尼平苷转化中的应用

    公开(公告)号:CN103695409A

    公开(公告)日:2014-04-02

    申请号:CN201310737625.1

    申请日:2013-12-27

    IPC分类号: C12N11/10 C12P17/06

    摘要: 本发明公开了一种固定化酶的制备方法,包括步骤:多糖海藻酸钠与京尼平交联;加入β-葡萄糖苷酶聚合获得聚合液;将上述聚合液滴入CaCl2溶液成固定化小球;将上述固定化小球在MnSO4溶液中进行金属离子置换,形成杂化海藻酸锰固定化颗粒。本发明还公开了一种京尼平苷转化方法,将上述制备的杂化海藻酸锰固定化颗粒以填充床反应器进行连续生物转化,水解京尼平苷制备京尼平。本发明的有益效果在于通过该固定化方法,使固定化酶比游离酶具有更好的稳定性和更强的水解性能,达到同样水解效果时间缩短一半以上,且水解的更彻底。在PBR反应器中进行连续转化时,持续时间500小时以上,转化率维持在90%左右。

    一种改变真菌孢子产量及形态的方法

    公开(公告)号:CN103333804B

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201310162551.3

    申请日:2013-05-04

    摘要: 本发明公开了改变真菌孢子产量及形态的方法,包括以下步骤:(1)将目的真菌在菌丝液体培养基中培养,提取目的真菌全基因组;(2)设计引物从目的真菌全基因组中扩增几丁质合成酶基因片段;(3)将几丁质合成酶基因片段与载体连接构建用于抑制形态表达的干扰载体;(4)干扰载体转化目的真菌,利用载体上的抗性基因筛选转化子;(5)将转化子接入平板,培养一定时间后,统计孢子数量,并用电子显微镜观察孢子形态。本发明通过分子生物学手段调控几丁质合成酶基因的表达水平可以大量获得突变株,本发明获得的突变株的孢子产量和形态均有明显变化。

    一种改变真菌孢子产量及形态的方法

    公开(公告)号:CN103333804A

    公开(公告)日:2013-10-02

    申请号:CN201310162551.3

    申请日:2013-05-04

    摘要: 本发明公开了改变真菌孢子产量及形态的方法,包括以下步骤:(1)将目的真菌在菌丝液体培养基中培养,提取目的真菌全基因组;(2)设计引物从目的真菌全基因组中扩增几丁质合成酶基因片段;(3)将几丁质合成酶基因片段与载体连接构建用于抑制形态表达的干扰载体;(4)干扰载体转化目的真菌,利用载体上的抗性基因筛选转化子;(5)将转化子接入平板,培养一定时间后,统计孢子数量,并用电子显微镜观察孢子形态。本发明通过分子生物学手段调控几丁质合成酶基因的表达水平可以大量获得突变株,本发明获得的突变株的孢子产量和形态均有明显变化。

    一种利用黄杆菌高效生产维生素K2的方法

    公开(公告)号:CN103290077A

    公开(公告)日:2013-09-11

    申请号:CN201310280268.0

    申请日:2013-07-04

    IPC分类号: C12P7/66 C12R1/20

    摘要: 本发明公开了一种利用黄杆菌高效生产维生素K2的方法。将黄杆菌原始菌株在培养基上活化后,采用低能离子束及低温等离子体复合诱变方式选育高产菌株,经过含维生素K2类似物平板初筛及摇瓶发酵复筛后,高产菌株发酵单位提高50~100%;在黄杆菌发酵过程中通过添加表面活性剂,使胞内维生素K2溶至胞外,维生素K2产量提高50~200%。本发明能够能够极大的提高维生素K2发酵水平,实现高效生物合成维生素K2,为实现维生素K2的大规模工业化发酵提供了可能,使用方便。

    一种微生物土壤活化菌剂及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN109294928A

    公开(公告)日:2019-02-01

    申请号:CN201811237799.0

    申请日:2018-10-23

    摘要: 本发明公开了一种微生物土壤活化菌剂及其制备方法与应用,涉及微生物应用领域,基于秸秆原位还田时土壤消解慢、效率低的问题而提出的,本发明由白地霉GGC105(Geotrichum candidum)和枯草芽孢杆菌GBS118(Bacillus subtilis)按照(20-30):(70-80)体积比组成,本发明的有益效果在于:两株菌具有互不拮抗、稳定持久、适应性强的特点;能强化秸秆腐解,兼具解磷、解钾的功能,有效活化土壤,增加有效磷、钾供给;改善土壤有益微生物数量,增加土壤对秸秆等短期难以利用生物质及矿物质的消纳及快速分解能力。

    一种高效丝氨酸羟甲基转移酶体外进化的方法

    公开(公告)号:CN104017819A

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201410286347.7

    申请日:2014-06-23

    IPC分类号: C12N15/70 C12N9/10

    摘要: 本发明公开了一种高效丝氨酸羟甲基转移酶体外进化的方法,步骤包括:对多种来源的丝氨酸羟甲基转移酶基因进行PCR扩增;上述多种来源的丝氨酸羟甲基转移酶基因体外低能离子注入,构建载体并转化受体菌;筛选高活性的丝氨酸羟甲基转移酶菌株并测序。本发明的有益效果在于,利用低能离子辐照技术,将低能离子直接作用于不同来源丝氨酸羟甲基转移酶基因,造成丝氨酸羟甲基转移酶基因体外辐照损伤和修饰,再与载体连接、转化受体菌,经体内修复与突变后,对突变基因文库进行表达和筛选,获得丝氨酸羟甲基转移酶突变基因,完成体外进化。本方法亦可应用于其他酶分子的体外进化。