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公开(公告)号：CN109722457B
公开(公告)日：2022-05-31
申请号：CN201910183792.3
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明中公开了一种磁场辅助黄杆菌液态发酵制备维生素K2的方法，属于微生物发酵技术领域。所述方法步骤如下：（1）将活化后的黄杆菌种接种于种子培养基中，经种子培养，制得种子液；（2）将步骤（1）制得的种子液转接于发酵培养基中，在其生长周期中加入磁场辅助处理促进发酵，得到磁场处理后的发酵产物；（3）对磁场辅助处理条件下的发酵培养基进行优化，可使黄杆菌的发酵产物维生素K2的产量提高了30‑60%，该方法步骤简单，易于操作。
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公开(公告)号：CN109824496B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201910183305.3
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 一种从破壁纳豆芽孢杆菌菌体中提取纯化维生素K2的方法，将发酵之后的微生物用超滤和离心进行固液分离，得到湿菌体，用离子束处理湿菌体进行破壁之后，用无水乙醇进行提取，不仅会获得大量的维生素K2，也提取出较少的油脂，在提取过程中进行了粗纯化，为后面一步式高效率纯化提供了很好的溶液。将提取物通过柱萃取，采用极性不同的有机试剂进行萃取纯化，将不同极性的杂质萃取出来，从而使溶液的纯度得到很大提高。之后将其冷冻结晶能得到纯度为95%的维生素K2晶体。本方法省去了传统方法中的干燥和菌体粉碎的过程，提高了提取效率与提取的纯度。并通过一步式纯化就获得纯度较高的维生素K2。
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公开(公告)号：CN105154484A
公开(公告)日：2015-12-16
申请号：CN201510734733.2
申请日：2015-10-30
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明涉及一种利用添加诱导物质提高黄杆菌合成维生素K2产量的方法，具体包括：黄杆菌菌株活化、黄杆菌种子培养、黄杆菌发酵培养、离心发酵液、冷冻干燥、甲醇处理等步骤，通过向发酵培养基中添加前体物质1,4-二羟基-2-萘甲酸、前体类似物VK3或异戊烯醇(YWXC)作为诱导物质，促进MK的生物合成，将获得的抽提液进行检测。结果表明，与对照组相比，添加诱导物质的黄杆菌合成维生素K2的产量显著提高，维生素K2产量对菌体干重比也得到了较大幅度提高。该方法操作简单、可控性强、结果稳定，且安全环保。此外，利用添加诱导物质大大提高了黄杆菌合成MK的产量，为工业化大规模生产维生素MK提供新的思路和方式。
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公开(公告)号：CN107475312B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201710828555.9
申请日：2017-09-14
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种通过改善细胞膜通透性有效生产维生素K2的方法，包括如下步骤：(1)将维生素K2生产菌株接种于斜面培养基中活化；(2)将活化后的菌株接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养；(3)将得到的培养液继续接种于添加有非离子型表面活性剂的种子培养基中培养；(4)将培养液接入发酵培养基中，100‑700rpm，0.5‑5vvm培养144‑240h；发酵至0‑72h时，添加非离子型表面活性剂，并采用插入式低功率超声间隔处理，定时取样检测细胞和维生素K2浓度。本发明的优点在于：提供了简便、有效、经济的发酵工艺，有效提高维生素K2浓度，提高生产效率，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN109762834A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201910184903.2
申请日：2019-03-12
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开了一种获取芳香族异戊烯基转移酶的发酵和一步纯化方法。通过质粒构建以及融合标签的使用，能够在细胞的胞液中的到大量的可溶性异戊烯基转移酶NovQ，之后经过一步纯化可以得到高活性的蛋白，提高了蛋白获取的效率。利用融合标签与NovQ蛋白共表达可以在不破坏酶结果的前提下得到纯度较高的酶蛋白。本发明相较于其他异戊烯基转移酶获取方法而言，有产量高，酶的提取和纯化方法简单等优势，在萜类的体外和体内生产过程中有广泛的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105861582B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201610392463.6
申请日：2016-05-31
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
IPC: C12P7/66
Abstract: 本发明公开一种NovQ芳香族异戊烯基转移酶催化合成维生素K2的方法，(1)维生素K3溶解于乙醇水溶液中，加入NaBH4，在N2保护下，控制温度不超过50℃，搅拌反应至体系呈淡绿色透明液体，中和至pH4.0后，用乙酸乙酯萃取产物，浓缩后冷冻结晶，过滤除清液得到维生素K3氢醌；(2)将维生素K3氢醌和DMAPP加入酶促反应体系中，反应在密闭和N2保护条件下进行，反应完成后，加入Fe3+，去除N2保护，充分氧化后，使用乙酸乙酯萃取得到产物。本发明核心环节为生物酶催化工程技术，利用廉价的维生素K3催化合成高值的维生素K2。本发明生产工艺简单，生产成本低廉，生产过程绿色环保。
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公开(公告)号：CN105541585A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610080583.2
申请日：2016-02-03
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明公开一种提取微生物湿菌体胞内维生素K2粗品的方法，包括以下步骤：(1)将发酵液经膜浓缩后离心，得湿菌体；(2)向湿菌体中加入脱水性有机溶剂，搅拌均匀后，进行预处理，离心，吸取上清液，得第一次萃取液；(3)向第一次萃取后的湿菌体中加入有机萃取剂，静置，离心，吸取上清液，得第二次萃取液；(4)重复步骤(3)，合并三次萃取液，干燥后，得产物。本发明具有无需干燥设备、节约成本、时间和能源；萃取条件温和，避免了产物的降解和生物活性的丧失；萃取时间短、步骤简单、得率高，提高了生产效率，萃取剂可以回收利用；单一萃取剂即可满足要求，便于后续产品的分离纯化；萃取处理能力大，便于工业化应用的优点。
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公开(公告)号：CN104673849A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510137112.6
申请日：2015-03-26
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
CPC classification number: C12P7/66
Abstract: 本发明公开了一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺,在发酵培养液中接入二级种子培养液，同时向发酵液中添加一定浓度的表面活性剂，促使维生素K2从胞内渗漏到胞外，解除胞内代谢产物的抑制作用。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明的一种基于黄杆菌产维生素K2的生产工艺使维生素K2的发酵单位提高了200-260％，为维生素K2的大规模工业化发酵提供一种可行的发酵策略。
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公开(公告)号：CN104561155A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510032609.1
申请日：2015-01-22
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
CPC classification number: C12P7/66
Abstract: 本发明公开了一种基于黄杆菌产维生素K2的发酵方法，将黄杆菌接种于液体培养基进行种子活化，在pH7.0、培养温度28-40℃条件下，培养2天，制备黄杆菌种子悬液；将获得的黄杆菌种子悬液接入添加食品加工废渣的发酵培养基中培养，在pH7.0、培养温度28-40℃条件下，以转速200摇瓶，在接种量在3-10％范围内，装液量50ml/250ml，培养6天。本发明相比现有技术具有以下优点：本发明是一种基于黄杆菌产维生素K2的发酵方法，采用添加纯花生衣粉、胡萝卜渣粉、绿茶渣粉、黄豆渣粉、栗子衣粉中的一种或几种发酵培养基，提高维生素K2的发酵水平。
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公开(公告)号：CN103952430A
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201310132497.8
申请日：2013-04-16
Applicant: 中国科学院合肥物质科学研究院
Abstract: 本发明涉及一种用于构建产黄青霉形态突变高产菌的分子生物学方法。该方法通过构建干扰载体，利用RNA干扰对形态相关基因进行抑制，并利用载体上自带的抗性基因筛选转化子，从而可以高效定向的获得形态改变并且产量提高的突变株，为丝状菌工业发酵形态代谢控制提供了参考，对青霉素的工业生产具有一定的指导意义。
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