一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法

    公开(公告)号:CN108866170A

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201810767361.7

    申请日:2018-07-13

    IPC分类号: C12Q1/686 C12Q1/10

    摘要: 本发明涉及一种基于PCR‑DGGE技术的沙门氏菌分型方法,⑴提取供试样品的DNA,并进行样品编号;⑵以样品基因组DNA为模板,采用引物GC‑rpoB1/rpoB3R扩增样品;⑶PCR产物的变性梯度凝胶电泳分析;⑷DGGE图谱中优势条带的回收与测序;⑸DGGE凝胶条带回收后,筛选阳性克隆测序;⑹采用MEGA5软件,Neighbor‑joining法构建系统发育树。PCR‑DGGE技术具有分离快速简便、重复性好等优点,避免了分离纯化和培养所造成的分析上的误差,通过指纹图谱直接再现菌群结构,并且通过序列分析切下的带或者通过独特的探针杂交鉴定其种类,是一种快速高效的病原微生物分型检测方法。

    一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用

    公开(公告)号:CN106987655A

    公开(公告)日:2017-07-28

    申请号:CN201710113551.2

    申请日:2017-02-28

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/68 C12N15/11

    摘要: 本发明提供了一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用,包括如下步骤:(1)富集诺如病毒并提取所述诺如病毒的基因组RNA,反转录为cDNA,备用;(2)取步骤(1)获得的基因组cDNA为模板,设计如下引物,对所述基因组DNA进行PCR扩增;(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳处理,分析所得的凝胶图谱,然后回收凝胶条带,以所述条带的回收产物为模板,设计以下引物,进行PCR扩增;(4)将步骤(3)获得的PCR扩增产物切胶回收、纯化,将PCR产物进行克隆测序,然后登陆Genbank进行测序比对,得到所述诺如病毒的基因类型。所述的方法测定结果准确、稳定可靠,灵敏度高以及检测费用低。

    一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用

    公开(公告)号:CN106987655B

    公开(公告)日:2020-05-08

    申请号:CN201710113551.2

    申请日:2017-02-28

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/686 C12N15/11

    摘要: 本发明提供了一种诺如病毒溯源方法及其引物、试剂盒、应用,包括如下步骤:(1)富集诺如病毒并提取所述诺如病毒的基因组RNA,反转录为cDNA,备用;(2)取步骤(1)获得的基因组cDNA为模板,设计如下引物,对所述基因组DNA进行PCR扩增;(3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物进行变性梯度凝胶电泳处理,分析所得的凝胶图谱,然后回收凝胶条带,以所述条带的回收产物为模板,设计以下引物,进行PCR扩增;(4)将步骤(3)获得的PCR扩增产物切胶回收、纯化,将PCR产物进行克隆测序,然后登陆Genbank进行测序比对,得到所述诺如病毒的基因类型。所述的方法测定结果准确、稳定可靠,灵敏度高以及检测费用低。