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公开(公告)号：CN118703568A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202410912233.2
申请日：2024-07-09
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/869 , C07K14/03 , G01N33/533 , G01N33/543 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/245 , A61P31/22
摘要： 本发明涉及物技术领域，具体涉及一种高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株构建方法及其应用，本发明对猫疱疹病毒Ⅰ型gD基因密码子进行优化，构建重组质粒，转染至CHO细胞，通过三轮连续加药筛选，获得高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株，构建的CHO‑FHV‑gD细胞株目的蛋白表达量高。培养CHO‑FHV‑gD细胞，收获细胞培养上清液，进行NTA纯化后，将抗原水相与佐剂混合后乳化制备疫苗。该疫苗安全性好、免疫原性强、生产成本低、工艺简单、批次稳定。基于该蛋白研发抗原夹心荧光微球试纸条抗体检测技术，对于该病防控具有重大意义。
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公开(公告)号：CN116763805A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202310873968.4
申请日：2023-07-17
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： A61K31/7048 , A61P39/02
摘要： 本发明公开了橄榄苦苷在制备缓解呕吐毒素毒性损伤的药物中的应用，涉及生物医药技术领域。本发明利用计算机辅助药物设计，通过分子模拟对接筛选，发现橄榄苦苷具有抗呕吐毒素毒性的作用，并通过实验证实了橄榄苦苷对J774A.1细胞没有显著毒性，也不会影响细胞的生长，但能降低呕吐毒素对J774A.1细胞的毒性作用，提高细胞的存活率。同时，一定浓度的橄榄苦苷能够降低呕吐毒素所致的细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡损伤，从而可以抵抗呕吐毒素所致的细胞毒性。同时，本发明还发现橄榄苦苷在防治呕吐毒素的毒性作用中效果优于N‑乙酰半胱氨酸。因此，橄榄苦苷应用于制备缓解呕吐毒素导致的毒性损伤的药物，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109593694A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201811318486.8
申请日：2018-11-07
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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公开(公告)号：CN104673735A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510097328.4
申请日：2015-03-05
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种皮质抑素生长抑素双表达DNA疫苗及制备方法和应用，该疫苗是将合成好的皮质抑素14肽基因片段CST14融合乙肝表面抗原基因的融合基因插入到质粒pIRES上获得pIRES-S/CST14质粒，再将双拷贝生长抑素14肽的乙肝表面抗原融合基因片段S/2SS插入到质粒pIRES-S/CST14中，获得皮质抑素生长抑素双表达DNA质粒，将该质粒转化到大肠杆菌DH5a中，获得大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a(pIRES-S/CST14-S/2SS)，CCTCC NO：M2014583。将该质粒作为疫苗直接免疫动物或与DNA疫苗佐剂混合后免疫动物，可显著促进动物生长。
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公开(公告)号：CN101407782A
公开(公告)日：2009-04-15
申请号：CN200810197981.8
申请日：2008-12-01
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于动物疫苗制备领域，具体涉及一种非抗性筛选促动物生长的口服DNA疫苗及制备方法与应用。将带有GMCSF细胞因子的生长抑素与乙肝表面抗原融合表达基因GS/2SS克隆到真核表达载体pVAX1中，得到中间质粒pVAX－GS/2SS，用天冬氨酸β－半乳糖脱氢酶基因(asd)替换中间质粒pVAX－GS/2SS中的卡那霉素(Kan)基因，得到非抗性筛选生长抑素真核表达质粒pGS/2SS，再将质粒pGS/2SS转化至缺失asd和crp基因的猪霍乱沙门氏菌C500中，得到所述的非抗性筛选促动物生长的口服DNA疫苗。含有生长抑素真核表达质粒的猪霍乱沙门氏菌(Salmonella enterica sv.Choleraesuis)C500/pGS/2SS，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：M208194。本发明还公开了该疫苗的制备方法及其在促动物生长方面的应用。
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公开(公告)号：CN101407781A
公开(公告)日：2009-04-15
申请号：CN200810197980.3
申请日：2008-12-01
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明属于动物疫苗制备技术领域，具体涉及一种无抗生素基因残留的提高动物繁殖力的猪霍乱沙门氏菌抑制素DNA疫苗及制备与应用。将猪抑制素α(1－32)基因与乙肝表面抗原融和基因插入到缺失了卡那霉素抗性基因的质粒载体pVAX1中，得到抑制素真核表达质粒pXAIS，将抑制素真核表达质粒pXAIS转染入猪霍乱沙门氏菌C500中，构建了猪霍乱沙门氏菌抑制素DNA疫苗。与现有技术相比，本疫苗无抗生素基因残留，具有运动效率高，免疫方法简单，免疫效果好。载体菌本身可作为免疫佐剂，能同时激活粘膜免疫和全身免疫，并可获得对载体菌的免疫等优点。
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公开(公告)号：CN109593694B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN201811318486.8
申请日：2018-11-07
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种基于Ngpiwi蛋白介导的牛源大肠杆菌基因敲除菌株及其构建方法；所述牛源大肠杆菌基因敲除菌株为在牛源大肠杆菌基因组上缺失潜在毒力相关基因的ORF序列或部分序列的缺失菌株。该方法首先成功构建带有Ngpiwi和待缺失靶基因序列左右同源臂的重组质粒；其次将重组质粒化学转化至牛源大肠杆菌中，在28℃传代诱导双交换重组，PCR筛选出缺失靶基因序列的菌株，之后在无抗生素培养基中37℃诱导质粒丢失，从而获得缺失潜在毒力基因相关序列的菌株。该遗传操作系统质粒较小，操作容易，应用广泛，不存在潜在的脱靶效应，敲除效率较高，无抗性基因筛选标记，为牛源大肠杆菌基因工程疫苗的研发提供了优良工具。
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公开(公告)号：CN109536644B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201910023831.3
申请日：2019-01-10
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6858 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的AS‑PCR引物，所述AS‑PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物如SEQ ID NO：2所示；本发明还提供了用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂盒，所述试剂盒包括所述的AS‑PCR引物；本发明还提供了采用所述AS‑PCR引物用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的的方法；该引物采用3端错配原则对Asia‑I型和疫苗株进行鉴别：对Asia‑I检测结果均为阳性，而疫苗株则均为阴性，能够准确区分CDV中Asia‑I和疫苗株，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。
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公开(公告)号：CN109536644A
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201910023831.3
申请日：2019-01-10
申请人： 华中农业大学
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6858 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的AS-PCR引物，所述AS-PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物如SEQ ID NO：2所示；本发明还提供了用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的试剂盒，所述试剂盒包括所述的AS-PCR引物；本发明还提供了采用所述AS-PCR引物用于鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株的的方法；该引物采用3端错配原则对Asia-I型和疫苗株进行鉴别：对Asia-I检测结果均为阳性，而疫苗株则均为阴性，能够准确区分CDV中Asia-I和疫苗株，具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。
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公开(公告)号：CN104673735B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510097328.4
申请日：2015-03-05
申请人： 华中农业大学
摘要： 本发明公开了一种皮质抑素生长抑素双表达DNA疫苗及制备方法和应用，该疫苗是将合成好的皮质抑素14肽基因片段CST14融合乙肝表面抗原基因的融合基因插入到质粒pIRES上获得pIRES‑S/CST14质粒，再将双拷贝生长抑素14肽的乙肝表面抗原融合基因片段S/2SS插入到质粒pIRES‑S/CST14中，获得皮质抑素生长抑素双表达DNA质粒，将该质粒转化到大肠杆菌DH5a中，获得大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a(pIRES‑S/CST14‑S/2SS)，CCTCC NO：M2014583。将该质粒作为疫苗直接免疫动物或与DNA疫苗佐剂混合后免疫动物，可显著促进动物生长。
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