区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN110161246A

    公开(公告)日:2019-08-23

    申请号:CN201910449511.4

    申请日:2019-05-28

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒,属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原,以单克隆抗体为抗体诊断试剂,利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化,对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化;根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中,同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验,将混合物与固相抗原结合作用,再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育,用TMB显色液显色,加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源,消灭持久疫源地的存在,为新城疫的净化提供理论依据,具有检测灵敏、准确,操作简便及特异性强的优点。

    一种新城疫病毒样颗粒、制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN106754765A

    公开(公告)日:2017-05-31

    申请号:CN201611183096.5

    申请日:2016-12-20

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明属于新城疫疫苗技术领域,具体涉及一种新城疫病毒样颗粒、制备方法及其应用的专利申请。该病毒样颗粒由新城疫病毒M蛋白、F蛋白、NP蛋白和HN蛋白自行组装形成的空心化结构的蛋白颗粒;其中M蛋白对应的M1基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,F蛋白对应的F1基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示,NP蛋白对应的NP1基因的碱基序列如SEQ ID NO.3所示,HN蛋白对应的HN1基因的碱基序列如SEQ ID NO.4所示。本发明具有结构蛋白表达水平高、病毒样颗粒自行组装,免疫原性与真实病毒粒子更为接近、病毒样颗粒的产量和纯度高、免疫效果好等技术优势。

    一种快速检测鹿粘膜病病毒BVDV的方法

    公开(公告)号:CN104195267A

    公开(公告)日:2014-12-10

    申请号:CN201410456381.4

    申请日:2014-09-09

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: C12Q1/702 C12Q1/6862 C12Q2561/125

    Abstract: 本发明提供了一种快速检测鹿粘膜病病毒BVDV的方法,通过将LDR与PCR技术相结合的检测导致梅花鹿粘膜病的BVDV,具体为:首先,从NCBI中下载BVDV全序列,通过软件比对BVDV的5’-UTR进行病毒特异性序列的设计,并以副猪嗜血杆菌的引物为通用引物进行探针合成;探针包括上游探针和下游探针,上游探针从左到右依次是上游通用引物对应序列、上游病毒特异序列,下游探针从左到右依次是下游病毒特异序列、下游通用引物对应序列。以病毒基因组RNA反转录的cDNA为模板进行LDR、PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测。此方法的建立对鹿粘膜病病毒的流行病学调查和疫情控制具有重要的意义。

    区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN110161246B

    公开(公告)日:2020-08-11

    申请号:CN201910449511.4

    申请日:2019-05-28

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 区分新城疫病毒样颗粒疫苗免疫血清与野毒感染血清的间接竞争ELISA方法及试剂盒,属于病毒检测领域。本发明以NP蛋白为免疫抗原,以单克隆抗体为抗体诊断试剂,利用棋盘法对包被抗原及单抗浓度进行优化,对包被时间、一抗浓度及孵育时间、二抗浓度及孵育时间等条件优化;根据工作浓度将免疫抗原包被于ELISA孔中,同时以不同稀释倍数的样本血清与固定稀释倍数的单克隆抗体混合后进行阻断实验,将混合物与固相抗原结合作用,再以辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG为二抗继续孵育,用TMB显色液显色,加入2M硫酸溶液终止反应。本发明可有效移除传染源,消灭持久疫源地的存在,为新城疫的净化提供理论依据,具有检测灵敏、准确,操作简便及特异性强的优点。

    一种嵌合型新城疫病毒样颗粒的制备方法

    公开(公告)号:CN106636015B

    公开(公告)日:2019-12-10

    申请号:CN201611182622.6

    申请日:2016-12-20

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明属于禽病预防疫苗制备技术领域,具体涉及一种嵌合型新城疫病毒样颗粒的制备方法的专利申请。该方法包括制备新城疫病毒样颗粒、制备GM‑CSF‑GPI锚定蛋白、嵌合型新城疫病毒样颗粒组装等步骤。利用本发明所制备的嵌合型新城疫病毒样颗粒,其基于蛋白水平的修饰策略,可避免基因水平转染不稳定的缺陷,并且嵌合的蛋白可被准确定量;同时,该嵌合型新城疫病毒样颗粒可作为新型灭活疫苗应用,在免疫鸡后可诱导机体产生特异性免疫反应,有效提高免疫应答,因而具有广阔的应用前景。

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