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公开(公告)号：CN105002145B
公开(公告)日：2017-12-15
申请号：CN201510377269.6
申请日：2015-07-01
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , A61K48/00 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用，采用从C57BL/6小鼠的胸腺DNA、小鼠黑色素瘤B16细胞总RNA和新城疫病毒(NDV)LaSota株中分别扩增出的mTERT启动子、mTyr启动子和HN基因，将获得的目的基因克隆到pShuttle‑IRES‑hrGFP‑2穿梭载体中，线性化重组穿梭载体后与骨架载体pAdeasy‑1共转染大肠杆菌BJ5183感受态细胞，使其在BJ5183内进行同源重组，构建了包含上述目的基因的重组腺病毒质粒Ad‑mTERTp‑Tyrp‑HN；将重组腺病毒质粒由PacⅠ酶切后，经脂质体介导转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价HN基因在双启动子的联合调控作用下对B16细胞的抑瘤效果。
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公开(公告)号：CN106011087A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610622267.3
申请日：2016-07-28
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61K39/02 , A61P31/04 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种S1基因和TM‑1基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从IBV H52株和MG S6株中分别扩增出S1基因和TM‑1基因，将获得的目的基因克隆到穿梭载体pDC315‑MCS‑EGFP中，利用脂质体转染法将重组腺病毒穿梭质粒pDC315‑S1‑TM‑1‑EGFP与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞，重组并包装获得含有S1基因和TM‑1基因的重组腺病毒pBH‑S1‑TM‑1‑EGFP；本发明用于免疫鸡以预防鸡传染性支气管炎和慢性呼吸道病，将此重组腺病毒免疫鸡后，鸡的抗体水平得到显著提高，且对鸡产生有效的保护作用。
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公开(公告)号：CN106011088B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610622268.8
申请日：2016-07-28
申请人： 天津农学院
摘要： 本发明公开了一种cLYZ和hLTF双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从石斑鱼头肾组织和人乳体细胞总RNA中分别扩增出cLYZ基因和hLTF基因，将获得的目的基因克隆到pDC315穿梭载体中，将含有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经脂质体共转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价cLYZ基因和hLTF基因在腺病毒介导下对奶牛乳房炎主要致病菌的联合抑制作用。
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公开(公告)号：CN105132461A
公开(公告)日：2015-12-09
申请号：CN201510574849.4
申请日：2015-09-10
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , C12N7/01 , A61K35/761 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了一种共表达SAL-2基因和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒载体的构建方法及重组腺病毒和应用，采用从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组和人乳体细胞总RNA中分别扩增出的SAL-2基因和hLYZ基因，将获得的目的基因克隆到pShuttle-IRES-hrGFP-2穿梭载体中，线性化重组穿梭载体后与骨架载体pAdeasy-1共转染大肠杆菌BJ5183感受态细胞，使其在BJ5183内进行同源重组，构建了包含上述目的基因的重组腺病毒质粒Ad-SAL-LYZ；将重组腺病毒质粒由PacⅠ酶切后，经脂质体介导转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价SAL-2基因和hLYZ基因在腺病毒介导下对奶牛乳房炎主要致病菌的联合抑制作用。
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公开(公告)号：CN109439686B
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN201811405595.3
申请日：2018-11-23
申请人： 天津农学院
摘要： 本发明公开了一种重组减毒沙门氏菌LH430及其制备方法和用途，利用蜂毒肽MEL基因和肿瘤靶向肽RGD基因，将目的基因克隆到pMD‑18‑T载体中，线性化重组穿梭载体后构建重组真核表达载体pEGFP‑RGD‑MEL，将其转化至感受态LH430，构建了包含上述目的基因的重组减毒沙门氏菌LH430；用重组减毒沙门氏菌LH430侵染黑色素瘤细胞B16，使其表达RGD‑MEL基因；评价RGD‑MEL基因共表达的减毒沙门氏菌LH430对B16细胞的抑瘤效果。
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公开(公告)号：CN107488676A
公开(公告)日：2017-12-19
申请号：CN201710908690.4
申请日：2017-09-29
申请人： 天津农学院
CPC分类号： C12N15/86 , A61K38/164 , A61K38/47 , C07K14/245 , C07K14/31 , C07K14/315 , C12N7/00 , C12N9/2462 , C12N2710/10021 , C12N2710/10043 , C12N2800/22 , C12Y302/01017 , A61K2300/00
摘要： 本发明公开了一种奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用。试验中选取奶牛乳房炎主要致病菌特异性蛋白，通过ABCpred方案与BepiPred方案预测获得每种蛋白的2个B细胞优势表位将所得优势表位进行连接获得TRE序列，GeneBank上得到cLYZ序列并进行哺乳动物细胞偏好性密码子优化。在TRE序列与cLYZ序列之间插入高剪切效率的Thoseaasigna virus 2A(T2A)自剪切肽，合成后得到含有目的基因片段的pMD-19T载体。将TRE基因、T2A基因、cLYZ基因亚克隆到穿梭载体pDC315-MCS-EGFP上；利用LipoFiterTM脂质体转染法将重组穿梭载体与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3cre共转染HEK293细胞，实现同源重组，获得重组腺病毒Ad-TRE-T2A-cLYZ-EGFP。
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公开(公告)号：CN106011087B
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201610622267.3
申请日：2016-07-28
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , A61K39/295 , A61K39/215 , A61K39/02 , A61P31/04 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种S1基因和TM‑1基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从IBV H52株和MG S6株中分别扩增出S1基因和TM‑1基因，将获得的目的基因克隆到穿梭载体pDC315‑MCS‑EGFP中，利用脂质体转染法将重组腺病毒穿梭质粒pDC315‑S1‑TM‑1‑EGFP与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞，重组并包装获得含有S1基因和TM‑1基因的重组腺病毒pBH‑S1‑TM‑1‑EGFP；本发明用于免疫鸡以预防鸡传染性支气管炎和慢性呼吸道病，将此重组腺病毒免疫鸡后，鸡的抗体水平得到显著提高，且对鸡产生有效的保护作用。
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公开(公告)号：CN105132461B
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201510574849.4
申请日：2015-09-10
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , C12N7/01 , A61K35/761 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了一种共表达SAL‑2基因和hLYZ双抑菌基因重组腺病毒载体的构建方法及重组腺病毒和应用，采用从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组和人乳体细胞总RNA中分别扩增出的SAL‑2基因和hLYZ基因，将获得的目的基因克隆到pShuttle‑IRES‑hrGFP‑2穿梭载体中，线性化重组穿梭载体后与骨架载体pAdeasy‑1共转染大肠杆菌BJ5183感受态细胞，使其在BJ5183内进行同源重组，构建了包含上述目的基因的重组腺病毒质粒Ad‑SAL‑LYZ；将重组腺病毒质粒由PacⅠ酶切后，经脂质体介导转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价SAL‑2基因和hLYZ基因在腺病毒介导下对奶牛乳房炎主要致病菌的联合抑制作用。
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公开(公告)号：CN106011088A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610622268.8
申请日：2016-07-28
申请人： 天津农学院
摘要： 本发明公开了一种cLYZ和hLTF双抑菌基因重组腺病毒的构建方法及重组腺病毒和应用，从石斑鱼头肾组织和人乳体细胞总RNA中分别扩增出cLYZ基因和hLTF基因，将获得的目的基因克隆到pDC315穿梭载体中，将含有目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经脂质体共转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价cLYZ基因和hLTF基因在腺病毒介导下对奶牛乳房炎主要致病菌的联合抑制作用。
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公开(公告)号：CN105002145A
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201510377269.6
申请日：2015-07-01
申请人： 天津农学院
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/861 , A61K48/00 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种利用mTERT和mTyr双启动子联合调控HN基因构建重组腺病毒的方法及重组腺病毒和应用，采用从C57BL/6小鼠的胸腺DNA、小鼠黑色素瘤B16细胞总RNA和新城疫病毒(NDV)LaSota株中分别扩增出的mTERT启动子、mTyr启动子和HN基因，将获得的目的基因克隆到pShuttle-IRES-hrGFP-2穿梭载体中，线性化重组穿梭载体后与骨架载体pAdeasy-1共转染大肠杆菌BJ5183感受态细胞，使其在BJ5183内进行同源重组，构建了包含上述目的基因的重组腺病毒质粒Ad-mTERTp-Tyrp-HN；将重组腺病毒质粒由PacⅠ酶切后，经脂质体介导转染HEK293细胞，包装获得高滴度的重组腺病毒；评价HN基因在双启动子的联合调控作用下对B16细胞的抑瘤效果。
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