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    一种循环肿瘤细胞分离方法
    1.
    发明公开
    一种循环肿瘤细胞分离方法 无效

    公开(公告)号：CN109777775A

    公开(公告)日：2019-05-21

    申请号：CN201910080904.2

    申请日：2019-01-28

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 余小玲 ,  王秀娟 ,  吕阳 ,  朱峰 ,  卢彦羽 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12N5/09 ,  C12N13/00

    摘要： 本发明提供了一种循环肿瘤细胞分离方法，包括如下步骤：1)取血液样本与PBS溶液混匀置于多孔隔膜离心管的隔膜上层，进行密度梯度离心分离；2)将隔膜上层溶液取出置于第一离心管中，离心，去除上清液，得含目的细胞的溶液；3)在第二离心管中加入CD45和CD15混合磁珠，将含目的细胞溶液转入第二离心管，混匀，2～8℃震荡孵育；4)将孵育的混合液置于磁力架上静置，将含目的细胞的上清液转移至第三离心管中，离心，去除上清液，得纯化的循环肿瘤细胞。本发明采用密度梯度离心和免疫磁珠阴性富集相结合的方法从外周血中分离得到肿瘤细胞，分离周期短，且需要的样品量少，实现了对肿瘤细胞的高度富集，肿瘤细胞回收率高达70％以上，白细胞残留量低于1万个。

    用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒
    3.
    发明公开
    用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN105463112A

    公开(公告)日：2016-04-06

    申请号：CN201610022659.6

    申请日：2016-01-13

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 朱峰 ,  杨惠娟 ,  段卫涛 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

    CPC分类号： C12Q1/6858 ,  C12Q2545/101 ,  C12Q2545/113 ,  C12Q2563/107

    摘要： 本发明公开了用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒，其中引物及探针包括突变上游ARMS引物PM1-F，与D842V(2525A>T)位点突变序列特异性结合，选择性扩增突变序列，突变下游引物PW1-R，与PDGFRA基因保守序列结合；5’端标记有FAM信号3’端标记MGB的检测探针PW1-P，能与扩增片段结合；以及5’端双脱氧修饰3’端MGB标记的阻断探针PW1-B，能与D842V位点野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异扩增。本发明的引物及探针特异性高、灵敏度好，检测能力高达1％。由其制备的试剂盒检测结果准确易读，操作简单快速，适用范围广。

    一种DNA提取试剂盒及提取方法
    4.
    发明公开
    一种DNA提取试剂盒及提取方法 无效

    公开(公告)号：CN111808843A

    公开(公告)日：2020-10-23

    申请号：CN202010705451.0

    申请日：2020-07-21

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 余小玲 ,  陆青 ,  朱峰 ,  彭杰 ,  黄翔 ,  卢彦羽 ,  肖红涛 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12N15/10

    摘要： 本发明公开了一种DNA提取试剂盒及提取方法，试剂盒由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白酶K溶液、醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液。提取方法是全血样本先用红细胞裂解液去除无核成分，再加入白细胞裂解液和蛋白酶K裂解细胞并释放核酸，最后采用醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液去除杂质，获得DNA提取产物。该试剂盒成分简单，无有毒有害成分，所需样品少，提取效果好；提取方法操作简单、快速，不需要特殊器材辅助，仅使用离心管和离心机即可完成，整个提取过程只需要40分钟即可完成；所提取的DNA产物浓度和纯度均符合要求。

    用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒
    7.
    发明授权
    用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN105463112B

    公开(公告)日：2019-04-23

    申请号：CN201610022659.6

    申请日：2016-01-13

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 朱峰 ,  杨惠娟 ,  段卫涛 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12Q1/6858 ,  C12N15/11

    摘要： 本发明公开了用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒，其中引物及探针包括突变上游ARMS引物PM1‑F，与D842V(2525A>T)位点突变序列特异性结合，选择性扩增突变序列，突变下游引物PW1‑R，与PDGFRA基因保守序列结合；5’端标记有FAM信号3’端标记MGB的检测探针PW1‑P，能与扩增片段结合；以及5’端双脱氧修饰3’端MGB标记的阻断探针PW1‑B，能与D842V位点野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异扩增。本发明的引物及探针特异性高、灵敏度好，检测能力高达1％。由其制备的试剂盒检测结果准确易读，操作简单快速，适用范围广。

    用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒
    8.
    发明授权
    用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN105441577B

    公开(公告)日：2019-01-08

    申请号：CN201610021335.0

    申请日：2016-01-13

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 朱峰 ,  裴冰雪 ,  段卫涛 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12Q1/6886 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

    摘要： 本发明公开了用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中CM1～CM7的7组引物和探针，每组中突变上游引物能与CKIT基因保守序列结合，突变下游ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测CKIT基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对CKIT基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

    用于检测人类NRAS基因7种突变的探针、引物及试剂盒
    10.
    发明授权
    用于检测人类NRAS基因7种突变的探针、引物及试剂盒 有权

    公开(公告)号：CN105779587B

    公开(公告)日：2020-08-25

    申请号：CN201610023371.0

    申请日：2016-01-13

    申请人： 武汉海吉力生物科技有限公司

    发明人： 朱峰 ,  杨晶晶 ,  段卫涛 ,  赵平锋

    IPC分类号： C12Q1/6886 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

    摘要： 本发明公开了用于检测人类NRAS基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中NM1～NM7的7组引物和探针，每组中突变引物能与NRAS基因保守序列结合，突变ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测NRAS基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对NRAS基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。