公开(公告)号：CN116083408A

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202310092339.8

申请日：2023-02-10

申请人： 江南大学

发明人： 韩来闯 ,  周哲敏 ,  宋晨硕 ,  程中一 ,  崔文璟 ,  刘中美 ,  周丽 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种中性pH下高活性的L‑谷氨酸α‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过一步脱羧反应生成GABA通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的GABA传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度高的)的三个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行两次迭代筛选，获得了在中性pH环境下酶活提高的L‑谷氨酸α‑脱羧酶突变体。本发明构建的突变体在中性条件下比酶活为野生的型64倍，有利于工业化生产GABA。

公开(公告)号：CN118562775A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410793074.9

申请日：2024-06-19

申请人： 江南大学

发明人： 周哲敏 ,  宋晨硕 ,  韩来闯 ,  崔文璟 ,  程中一 ,  刘中美 ,  郭军玲

IPC分类号： C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P13/00 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了嗜冷菌来源的谷氨酸脱羧酶突变体及其应用，属于蛋白质工程领域。本发明中Gad‑PsyY的两种突变体相对于野生型，在60℃条件下热处理30min的残余酶活相较于野生型从原本的40％分别提升到了78％和52％，此外这两个突变体的最适催化温度相较于野生型也向高温处发生了3‑10℃的偏移。本发明提供了Gad‑PsyF的两种突变体相对于野生型，最适催化温度相较于野生型也向低温处发生了3‑10℃的偏移。本发明对于进一步深入认识谷氨酸脱羧酶的热适应机理和对其进行改造具有重要意义，同时也很大程度的解决了应用谷氨酸脱羧酶因热稳定性低或最适催化温度高从而导致常规生产条件下的产物产量低的问题。