公开(公告)号：CN118064341A

公开(公告)日：2024-05-24

申请号：CN202410229553.8

申请日：2024-02-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  徐显皓 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  廖超

IPC: C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种合成乳酰‑N‑新四糖的无质粒重组大肠杆菌及其应用，属于代谢工程技术领域。本发明基于蛋白组装支架PDZ和SH3，连接表达β‑1,3‑N‑乙酰氨基葡萄糖氨基转移酶LgtA和β‑1,4‑半乳糖基转移酶LgtB，并将其在基因组位点进行整合表达，最终构建合成乳酰‑N‑新四糖的无质粒重组大肠杆菌。乳酰‑N‑新四糖的摇瓶产量达到1.99g/L，在不含有机氮源并以葡萄糖和乳糖作为碳源的培养基进行发酵时，乳酰‑N‑新四糖在3‑L发酵罐中的产量达到23.73g/L，为乳酰‑N‑新四糖的高效合成和进一步的产业化奠定了基础。

公开(公告)号：CN111690647B

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202010566287.X

申请日：2020-06-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  李江华 ,  吕雪芹 ,  徐显皓

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种丙酮酸响应生物传感器及其构建方法与应用，本发明通过对插入在P43启动子上的PdhR结合序列优化以及插入位点进行优化，在本发明中成功构建了不同动态范围丙酮酸响应生物传感器，其中最小的动态范围增加了0.6倍，最高的增加了30.7倍。可以用于细胞中各个基因表达量的精细控制。由于丙酮酸是细胞中的关键中心碳代谢物，因此，这些生物传感器可以根据细胞内丙酮酸含量的变化，动态调控胞内基因的表达水平，从而实现对胞内代谢流的动态控制。本发明获得的丙酮酸生物传感器具有良好的特异性，此外其对丙酮酸响应范围为10‑35nmol/g DCW。

公开(公告)号：CN111690647A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010566287.X

申请日：2020-06-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  李江华 ,  吕雪芹 ,  徐显皓

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/31

Abstract: 本发明公开了一种丙酮酸响应生物传感器及其构建方法与应用，本发明通过对插入在P43启动子上的PdhR结合序列优化以及插入位点进行优化，在本发明中成功构建了不同动态范围丙酮酸响应生物传感器，其中最小的动态范围增加了0.6倍，最高的增加了30.7倍。可以用于细胞中各个基因表达量的精细控制。由于丙酮酸是细胞中的关键中心碳代谢物，因此，这些生物传感器可以根据细胞内丙酮酸含量的变化，动态调控胞内基因的表达水平，从而实现对胞内代谢流的动态控制。本发明获得的丙酮酸生物传感器具有良好的特异性，此外其对丙酮酸响应范围为10-35nmol/g DCW。

公开(公告)号：CN119753083A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411949322.0

申请日：2024-12-27

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  徐显皓 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  武耀康 ,  彭麟惠

IPC: C12Q1/10 ,  C12Q1/48 ,  C12Q1/6897 ,  C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种α‑1,2‑岩藻糖基转移酶的高通量筛选方法及筛选得到的突变体，属于酶工程技术领域。本发明提供一种α‑1,2‑岩藻糖基转移酶高通量筛选方法，步骤包括构建2’‑岩藻糖基乳糖的指示菌株，使2’‑岩藻糖基乳糖的含量与荧光强度呈正相关，之后在底盘菌株中表达L‑岩藻糖激酶和α‑1,2‑岩藻糖基转移酶突变体文库，将底盘菌株进行油包水液滴包埋并将其与指示菌株融合共培养，通过液滴微流控分选根据荧光检测结果得到包含α‑1,2‑岩藻糖基转移酶正向突变体的底盘菌株，其中突变体FutCV93I的酶活为原始酶的2.31倍，酶活力得到极大提升。使用本发明提供的方法，能够对α‑1,2‑岩藻糖基转移酶进行高通量筛选，有利于2’‑岩藻糖基乳糖的工业化生产及其在食品和医药等领域的大规模应用推广。

公开(公告)号：CN119752957A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411946161.X

申请日：2024-12-27

Applicant: 江南大学 ,  山东润德生物科技有限公司

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  卢健行 ,  徐显皓 ,  李江华 ,  刘长峰 ,  刘思奇

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/54 ,  C12N15/77 ,  C12N15/64 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种基于棒状杆菌内源重组酶的谷氨酸棒杆菌基因编辑工具及其应用，属于基因编辑技术领域。为了解决非模式菌株基因编辑效率低下的问题，本发明以C.glutamicum S9114为例，构建了以cpf1为基础的高效基因编辑工具，具体地：由于目前谷氨酸棒杆菌没有兼容性较好的基因编辑重组酶，且缺少效率良好的编辑系统，本发明通过blast迭代法进行筛选，为该菌株的基因编辑提供了一种来自C.aurimucosum ATCC 700975的新的工具酶CauR，其在非模式菌株谷氨酸棒杆菌S9114中的效率相较于现有的高效重组酶recET和red系统更高。在此基础上，我们对cpf1核酸酶和CauR重组酶进行了耦合，进一步显著提升了C.glutamicum S9114的同源重组能力，为非模式菌株的基因编辑提供了一种新的选择。

公开(公告)号：CN118440970A

公开(公告)日：2024-08-06

申请号：CN202410607555.6

申请日：2024-05-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  徐显皓 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  张权威

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C07K14/245 ,  C12N15/31 ,  C12Q1/02 ,  G01N21/64 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中乳糖或其类似物生物传感器筛选系统的构建及应用。本发明设计了一种基于乳糖操纵子的适用于枯草芽孢杆菌的“双筛选”生物传感器阻遏蛋白筛选基因回路：通过负筛选致死回路实现阻遏蛋白DNA结合活性筛选；通过正筛选荧光信号实现变构激活活性筛选；最终获得目标乳糖类似物识别活性的生物传感器。使用该筛选平台可获得响应乳糖、2’‑岩藻糖基乳糖、3‑岩藻糖基乳糖等物质的新型生物传感器，且经验证，本发明根据筛选结果构建的生物传感器具有较高的检测灵敏度和特异性。