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公开(公告)号：CN107177569A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710474196.1
申请日：2017-06-21
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/14 , C12P17/02 , C12P41/00 , C12Y303/02003
摘要： 本发明公开了一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法，属于生物工程技术领域。本发明的菜豆环氧化物水解酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO:1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2。本发明还公开了PvEH4工程菌的构建以及重组PvEH4的活性测定的方法。以6mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组PvEH4工程菌全细胞催化，于25℃、220r/min反应4h时，获得(R)‑SO的对映体过量(ees)和产率分别为99.9％和32.1％，(R)‑PED的对映体过量(eep)和产率分别为92.7％和65.4％。
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公开(公告)号：CN107988308A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201810033872.6
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac-pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac-pCSO的对映选择性提高了9.8倍。使用PvEH1W102L全细胞动力学拆分150mmol·L-1的rac-pCSO，反应4h后，可获得(R)-对氯环氧苯乙烷的产率为45.62％(ees＝96.30％)和(R)-对氯苯基乙二醇产率为50.91％(eep＝90.26％)。
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公开(公告)号：CN107937364A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201810033894.2
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种对映选择性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第102位的色氨酸突变成了亮氨酸。本发明的突变酶PvEH1W102L的对映体比率(E值)是14.95，是野生型酶(E＝7.36)的2.03倍。
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公开(公告)号：CN108048423B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033862.2
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化活性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体及其应用，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第196位的亮氨酸突变成了天冬氨酸。本发明摇瓶诱导10h得到的突变酶PvEH1L196D催化活性为69.92U/g，是野生型酶(49.53U/g)的1.41倍。
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公开(公告)号：CN107201349A
公开(公告)日：2017-09-26
申请号：CN201710474195.7
申请日：2017-06-21
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/14 , C12P7/22 , C12Y303/02003
摘要： 本发明公开了一种表达菜豆环氧化物水解酶的工程菌及应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种环氧化物水解酶及表达该酶的重组大肠杆菌。本发明的环氧化物水解酶能够催化外消旋对氯环氧苯乙烷(rac‑pCSO)生成(R)‑对氯苯基乙二醇(pCPED)，在转化率达99.7％时产物对映体过剩值为85.1％eep。与其它植物来源的环氧化物水解酶相比与提高了10倍。
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公开(公告)号：CN106636038A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610926647.6
申请日：2016-10-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种耐热性改善的木聚糖酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明对具有最高B‑factor值位点处的Gly21进行替换，构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标，从文库中筛选出最优突变转化子(E.coli/Aoxyn11AG21I)，E.coli/Aoxyn11AG21I表达一种由Ile21替换了Gly21的突变酶AoXyn11AG21I。该突变酶的表现出更好的温度特性。本发明得到的突变体比野生木聚糖酶具有更大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN108165538B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033882.X
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化活性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第106位的缬氨酸突变成了异亮氨酸。本发明摇瓶诱导10h得到的突变酶PvEH1V106I催化活性为234.75U/g，是野生型酶(157.15U/g)的1.49倍。
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公开(公告)号：CN107988308B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033872.6
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。使用PvEH1W102L全细胞动力学拆分150mmol·L‑1的rac‑pCSO，反应4h后，可获得(R)‑对氯环氧苯乙烷的产率为45.62％(ees＝96.30％)和(R)‑对氯苯基乙二醇产率为50.91％(eep＝90.26％)。
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公开(公告)号：CN107937364B
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201810033894.2
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种对映选择性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第102位的色氨酸突变成了亮氨酸。本发明的突变酶PvEH1W102L的对映体比率(E值)是14.95，是野生型酶(E＝7.36)的2.03倍。
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公开(公告)号：CN106636038B
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201610926647.6
申请日：2016-10-31
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种耐热性改善的木聚糖酶及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明对具有最高B‑factor值位点处的Gly21进行替换，构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标，从文库中筛选出最优突变转化子(E.coli/Aoxyn11AG21I)，E.coli/Aoxyn11AG21I表达一种由Ile21替换了Gly21的突变酶AoXyn11AG21I。该突变酶的表现出更好的温度特性。本发明得到的突变体比野生木聚糖酶具有更大的工业化生产潜力。
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