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公开(公告)号：CN108048429B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201810033898.0
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及构建方法，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。W102L对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac‑mCSO)的最终eep，在25℃下从3.1％提高到81.7％。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。
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公开(公告)号：CN108048423B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033862.2
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化活性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体及其应用，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第196位的亮氨酸突变成了天冬氨酸。本发明摇瓶诱导10h得到的突变酶PvEH1L196D催化活性为69.92U/g，是野生型酶(49.53U/g)的1.41倍。
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公开(公告)号：CN109652354A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811619444.8
申请日：2018-12-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌制备(R)-对氯环氧苯乙烷的方法，属于生物技术领域。本发明将番茄来源的环氧化物水解酶在大肠杆菌中表达，构建了基因工程菌E.coli/sleh1，并利用该菌株表达制备重组环氧化物水解酶；提供了一种利用在本发明中构建的重组菌株发酵所产酶进行生物催化的方法，催化150mM外消旋对氯环氧苯乙烷制备得到对映纯的(R)-对氯环氧苯乙烷(ee>98％)，并且，其最终产率达到47.5％，接近理论值50％。
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公开(公告)号：CN107177563A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710474276.7
申请日：2017-06-21
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/0006 , C12N15/70 , C12P7/42 , C12Y101/01028
摘要： 本发明公开了一种干酪乳杆菌来源的D‑乳酸脱氢酶及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一种D‑乳酸脱氢酶，并实现了该基因的异源表达。通过构建含有该基因的重组质粒pET‑28a(+)‑LcldhD,将其转化至大肠杆菌中，获得了含有表达质粒pET‑28a(+)‑LcldhD的重组大肠杆菌E.coli/LcldhD。以10mmol/L苯丙酮酸为底物，重组LcLDHD工程菌全细胞催化，反应40min，获得D‑PLA的浓度为9.91mmol/L，底物转化率为99.1％，eep为98.3％。表现出了较高的催化活性，有明显的应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN106244637A
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201610926649.5
申请日：2016-10-31
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12P7/22
摘要： 本发明公开了一种双酶催化外消旋环氧苯乙烷制备(R)-苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以外消旋环氧苯乙烷(rac-SO)为底物，以双环氧化物水解酶：环氧化物水解酶突变体AuEH2A250I和环氧化物水解酶VrEH3对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷(rac-SO)制备高对映纯产物(R)-苯乙二醇(PED)。本发明是首次把来源于绿豆的VrEH3和来源于宇佐美曲霉的AuEH2A250I结合对映归一性水解rac-SO。催化10mM rac-SO制备(R)-PED的ee值为96.0％。具有适合于工业应用的理想特性，本发明为该酶的产业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN106047834A
公开(公告)日：2016-10-26
申请号：CN201610534898.X
申请日：2016-07-07
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体，属于酶工程和生物催化技术领域。本发明基于理性设计对宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)环氧化物水解酶(AuEH2)进行分子改造，结合基因的定点饱和突变方法，获得多个对映选择性提高的环氧化物水解酶突变体。本发明获得的6个对映选择性提高的突变体：AuEH2A250I、AuEH2A250M、AuEH2A250Y、AuEH2A250S、AuEH2A250L和AuEH2A250V催化外消旋环氧苯乙烷(rac‑SO)的对映体比率(E值)相比野生型，从16分别提高至48、27.2、23.9、21.8、20.0和19.4。
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公开(公告)号：CN103642826A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666414.3
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种来源于宇佐美曲霉Aspergillus usamii E001的β-1，4-甘露聚糖酶基因的克隆方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，命名为Auman26A。生物信息学分析表明该甘露聚糖酶属于糖苷水解酶第26家族，命名为AuMan26A，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。本发明还公开了AuMan26A基因在毕赤酵母中异源表达、活性测定及酶学性质的分析方法，制备的重组酶热稳定性极好，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN103642768A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666412.4
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/18 , C12N15/815 , C12Y301/01072
摘要： 本发明提出了一种源于Aspergillus usamii E001的新型乙酰木聚糖酯酶成熟肽cDNA序列的克隆及表达方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，相应的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，相应的基因命名为Auaxe。本发明还公开了产乙酰木聚糖酯酶工程菌的构建以及重组乙酰木聚糖酯酶的高效表达方法，该酶能有效地消除乙酰基团对木聚糖酶作用时的空间阻碍作用，在提高纤维资源的生物降解性，开发为饲料酶制剂投入工业化生产及生物漂白等方面显示出良好的效果，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号：CN103642747A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666356.4
申请日：2013-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌表达羰基还原酶生物制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇的方法，及其在不对称还原制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇中的应用。以表达该羰基还原酶(CBR)基因的大肠杆菌BL21(pET28a-cbr)耦合葡萄糖脱氢酶(GDH)重组大肠杆菌BL21(pET28a-gdh)为催化剂，并添加少量NAD(P)H，在有机溶剂二甲基二甲胺／水两相反应体系中实现了不对称还原2-溴-4-硝基-苯乙酮高效制备(R)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇，摩尔转化率高于95％，产物的对映体过量(e.e.)>99％。
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公开(公告)号：CN103014040A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210562517.0
申请日：2012-12-24
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提供了一种来源于细菌的耐热β-1，4-内切木聚糖酶(SyXyn11)基因的异源表达、活性测定及分析和酶学性质分析方法。EvXyn11TS是一种来源于细菌的极端耐热木聚糖酶突变体(GenBank登录号EU591743)，它的热稳定性非常好，具有适合于工业应用的理想特性。为实现EvXyn11TS在工业上的应用，将该耐热基因中的稀有密码子进行优化，并命名为Syxyn11，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。这为该基因的异源表达和工业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值，也为其它β-1，4-内切木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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