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公开(公告)号：CN112575030A
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN202110033552.2
申请日：2021-01-12
申请人： 河南师范大学
摘要： 本发明公开了一种利用浮萍表达系统制备草鱼呼肠孤病毒口服亚单位疫苗的方法。本发明能够利用浮萍表达系统简便、高效表达草鱼呼肠孤病毒口服亚单位疫苗，本方法包括外源基因的扩增、农杆菌植物双元表达载体的构建、浮萍愈伤组织遗传转化体系的建立，并使用PCR、荧光显微观察、GUS染色和Western blotting等实验技术验证外源基因的表达。本发明能利用浮萍高效表达草鱼呼肠孤病毒亚单位疫苗，制备的疫苗可直接口服免疫草鱼，可减少因草鱼呼肠孤病毒感染而造成的经济损失，也便于操作，节省成本，更具有推广和实际应用价值。
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公开(公告)号：CN109568575A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811461668.0
申请日：2018-12-02
申请人： 河南师范大学
摘要： 本发明公开了一种增强嗜水气单胞菌OmpA疫苗接种效果的小分子代谢物佐剂及其应用，属于免疫佐剂技术领域。本发明的技术方案要点为：一种增强嗜水气单胞菌OmpA疫苗接种效果的小分子代谢物佐剂，该小分子代谢物佐剂为精氨酸或/和半胱氨酸。本发明还具体公开了该小分子代谢物佐剂作为嗜水气单胞菌OmpA疫苗增效剂的应用。本发明的小分子代谢物佐剂可以有效提高嗜水气单胞菌OmpA疫苗接种后的免疫效果，进而提高鱼体抗病能力。
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公开(公告)号：CN109568572A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811461669.5
申请日：2018-12-02
申请人： 河南师范大学
IPC分类号： A61K39/116 , A61K39/02 , A61P31/04 , C12N15/85 , C12N15/31
摘要： 本发明公开了一种气单胞菌多价DNA疫苗的制备方法及其应用，属于水产动物病害防治技术领域。本发明的技术方案要点为：设计用于扩增嗜水气单胞菌主要粘附素基因的特异性引物，引物序列为mah-F：5’CGCGGATCCATGAAAAAGACAATTCTGGC 3’；mah-R：5’CCCAAGCTTTTAGAAGTTGTATTGCAGGG 3’，下划线为酶切位点；细菌培养并提取嗜水气单胞菌DNA；扩增嗜水气单胞菌主要粘附素基因片段，以pcDNA3.1质粒为载体，构建重组质粒并测序验证，命名为mah-pcDNA3.1重组质粒即气单胞菌多价DNA疫苗。本发明的DNA疫苗通过养殖鱼类免疫接种含mah基因的重组疫苗，在鱼体内产生主要粘附素蛋白并调控抗感染免疫相关基因的表达，从而有效防治多种气单胞菌的感染。
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公开(公告)号：CN114875036A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210570553.5
申请日：2022-05-24
申请人： 河南师范大学
IPC分类号： C12N15/12 , C07K14/46 , C12N15/81 , A23K20/147 , A23K50/80 , A61K38/17 , A61P31/04 , C12R1/84
摘要： 本发明公开了一种黄河鲤抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其应用，克隆黄河鲤抗菌肽hepcidin基因全长cDNA序列，扩增出基因片段，构建到毕赤酵母表达载体pPICZα A，得到重组表达载体，重组载体电转至毕赤酵母X‑33后，通过筛选获得重组毕赤酵母菌株，使用甲醇的培养基诱导表达，成功表达出重组Hepcidin蛋白，重组Hepcidin蛋白对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、鳗弧菌、枯草芽孢杆菌均具有较好的抑菌活性。在黄河鲤基础饲料中添加重组Hepcidin蛋白，饲养周期为28d后，可以显著提高黄河鲤感染嗜水气单胞菌后的存活率。
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公开(公告)号：CN110129254A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910330910.9
申请日：2019-04-23
申请人： 河南师范大学
IPC分类号： C12N5/07
摘要： 本发明公开了一种以Percoll为介质分离方斑东风螺颗粒细胞和透明细胞的方法，属于方斑东风螺血细胞分选技术领域。本发明的技术方案要点为：取15mL离心管，加入3mL体积分数为38%的Percoll溶液和2mL方斑东风螺血细胞悬液，在1300g 4℃离心45min，溶液分为上下两层和上下两层的交界层，再取一支新的15mL离心管，加入3mL体积分数为35%的Percoll溶液和1mL上下两层的交界面溶液，再次1300g 4℃离心45min，分别收集上层溶液和下层溶液，最终实现方斑东风螺颗粒细胞和透明细胞的分离。本发明分选过程简单、方便、易操作、特异性强且成本低廉。
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公开(公告)号：CN107823640A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711023099.7
申请日：2017-10-27
申请人： 河南师范大学
摘要： 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒类纤突VP56蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于基因工程及分子免疫学技术领域。本发明的技术方案要点为：一种草鱼呼肠孤病毒类纤突VP56蛋白亚单位疫苗，该亚单位疫苗蛋白由草鱼呼肠孤病毒S7基因节段编码，该草鱼呼肠孤病毒S7基因节段的碱基序列如序列表SEQ ID No.1所示，其编码的蛋白即为草鱼呼肠孤病毒类纤突VP56蛋白亚单位疫苗蛋白，该亚单位疫苗蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.4所示。本发明的亚单位疫苗蛋白注射草鱼鱼体后能够显著刺激鱼体免疫细胞增殖、抗病毒相关基因上调表达以及特异性抗体大量产生，有效提高草鱼抗草鱼呼肠孤病毒感染的能力，进而用于预防水产养殖中因病毒引起的草鱼出血病。
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公开(公告)号：CN108324936B
公开(公告)日：2019-11-01
申请号：CN201711022026.6
申请日：2017-10-27
申请人： 河南师范大学
摘要： 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于基因工程及分子免疫学技术领域。本发明的技术方案要点为：一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗，该亚单位疫苗蛋白的基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。本发明还具体公开了该草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗的制备方法及其作为抗草鱼呼肠孤病毒感染疫苗用于提高草鱼感染草鱼呼肠孤病毒后鱼体的存活率。本发明中草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗为新型抗原蛋白疫苗，其制备方法简单，成分明确，安全稳定，能够诱导草鱼鱼体产生较高的非特异性和特异性免疫应答，进而获得较好的免疫保护效果。
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公开(公告)号：CN109464449A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811459005.5
申请日：2018-11-30
申请人： 河南师范大学
IPC分类号： A61K31/7036 , A61K31/198 , A61P31/04 , A61P33/02
摘要： 本发明公开了一种水产抗菌药物组合物及其应用，属于水产药物制剂技术领域。本发明的技术方案要点为：一种水产抗菌药物组合物，该水产抗菌药物组合物的活性组分由以下重量百分配比的原料组成：硫酸新霉素0.2%-70.3%和精氨酸29.7%-99.8%。本发明的抗菌药物组合物具有更好的抗菌杀菌作用，扩大抗菌药物防治范围，同时减少抗菌药物的使用，促进水产动物健康养殖。
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公开(公告)号：CN107760716A
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201711022072.6
申请日：2017-10-27
申请人： 河南师范大学
CPC分类号： C12N15/85 , A61K39/12 , A61K2039/53 , A61K2039/552 , C12N15/66 , C12N2720/12034
摘要： 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒S11基因真核表达重组质粒的制备方法及其作为核酸疫苗的应用，属于基因工程及分子免疫学技术领域。本发明的技术方案要点为：提取病毒基因组RNA，逆转录为cDNA，扩增出相应DNA序列，将该DNA序列构建到pcDNA-3.1(+)质粒并转化大肠杆菌DH5α，筛选出含重组质粒的阳性克隆菌并将阳性菌大量培养，提取菌体中含有的重组质粒S11-pcDNA3.1。将该重组质粒作为核酸疫苗肌肉注射草鱼，该核酸疫苗进入肌肉细胞并在肌肉细胞中表达草鱼呼肠孤病毒的VP35蛋白，从而刺激鱼体免疫细胞增殖、上调抗病毒相关基因表达以及刺激鱼体产生抗病毒抗体，有效提高草鱼抗草鱼呼肠孤病毒感染的能力，进而用于预防水产养殖中因该病毒引起的草鱼出血病。
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公开(公告)号：CN116143940A
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202210996525.X
申请日：2022-08-19
申请人： 河南师范大学
摘要： 本发明公开了一种鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗及其制备方法和应用，其中口服疫苗由鲤春病毒血症病毒抗原蛋白与黄河鲤防御素蛋白通过柔性接头连接构建成融合蛋白并在大肠杆菌中表达，再通过生物载体富集而成，该融合蛋白编码基因序列包括鲤春病毒血症病毒抗原蛋白基因截短片段64‑1389bp和黄河鲤防御素蛋白去信号肽部分基因片段70‑201bp，以及连接两组基因片段的柔性接头融合基因。与已报道的抗SVCV疫苗相比，本发明制备的鲤鱼抗鲤春病毒血症病毒口服疫苗整个免疫过程不伤鱼体，操作简单、安全稳定，保护率更高。因此，这种口服疫苗为防控鲤春病毒血症提供了广阔的前景。
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