公开(公告)号：CN108640990A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810549725.4

申请日：2018-05-31

申请人： 河南省农业科学院 ,  扬州大学 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  朱礼倩 ,  黄丽嫒 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  乔松林 ,  周景明 ,  邢广旭 ,  刘燕凯 ,  陈玉梅 ,  王彦伟 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K16/10 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种NcpBVDV单克隆抗体及其制备方法和应用，该单克隆抗体的重链型为：lgG1，轻链型为：Kappa型；IPMA效价不低于1.02×106。本发明提供一种NcpBVDV单克隆抗体的制备方法，并将所述的NcpBVDV单克隆抗体在抗病毒药物高通量筛选中应用。本发明还提供一种抗NcpBVDV药物筛选的方法。本发明具有较强的特异性，成本低，操作简便快速，显示检测结果直观准确，不依赖于大型仪器，易于在科研和临床诊断中广泛应用推广。

公开(公告)号：CN111606978A

公开(公告)日：2020-09-01

申请号：CN202010515345.6

申请日：2020-06-09

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  王聚财 ,  陈玉梅 ,  尚延丽 ,  王方雨 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  杨苏珍 ,  柴书军 ,  金前跃 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K14/015 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C07K1/14 ,  C12P21/02 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供一种去除大肠杆菌表达重组猪细小病毒VP2蛋白中内毒素的方法，包括猪细小病毒重组VP2蛋白抗原溶液制备、氢氧化铝悬液制备、氢氧化铝吸附和层析法分离步骤。通过氢氧化铝吸附和复合模式层析介质分离两步，可以有效去除大肠杆菌表达系统中重组蛋白的内毒素，操作简单实用，符合规模化生产需求。采用本发明方法处理后的生物制品的VP2蛋白内毒素含量小于200EU/mL，且对VP2蛋白抗原活性无明显影响，安全性好，处理后的蛋白可在制备疫苗、药物类等生物制品中应用，解决了PPV疫苗生产中的核心技术问题。

公开(公告)号：CN106947832A

公开(公告)日：2017-07-14

申请号：CN201710200348.9

申请日：2017-03-30

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  苏运芳 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  郝慧芳 ,  王娟 ,  杨聪聪

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC分类号： C12Q1/701 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2561/101 ,  C12Q2545/114

摘要： 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)经典株和变异株荧光定量PCR鉴别检测方法，该方法基于PEDV经典毒株和变异毒株的S1基因，设计了两条特异性探针，并在探针的外围设计了一对特异性引物。分别以PEDV经典毒株和变异毒株的代表毒株CV777和CH/HNLY的cDNA为模板扩增目的片段，构建重组质粒作为标准品，用于建立标准曲线，并根据两个探针的不同报告基团来鉴别检测不同毒株。该方法具有较好的特异性、灵敏性和可重复性，可用于临床样本PEDV的鉴别检测。

公开(公告)号：CN109161575A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811083057.7

申请日：2018-09-17

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘艳凯 ,  赵孟孟

IPC分类号： C12P21/02 ,  C07K14/08 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN108823218A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810797851.1

申请日：2018-07-19

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  蒋大伟 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  赵建国 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘燕凯 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/40 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/08 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的核酸序列、克隆该核酸序列的引物、含该核酸序列的表达载体、由表达载体转化而得的工程菌、由核酸序列编码、表达载体表达或所工程菌分离的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白，及鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白自组装而成的鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒。还提供了由鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白制得的亚单位疫苗，由鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒制得的亚单位疫苗。将亚单位疫苗在预防鸡传染性法氏囊病病毒引起的鸡相关疾病中应用。本发明生产成本低、操作简单、生物安全性好，疫苗可有效预防鸡传染性法氏囊病毒对鸡群的感染。

公开(公告)号：CN111606978B

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202010515345.6

申请日：2020-06-09

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  王聚财 ,  陈玉梅 ,  尚延丽 ,  王方雨 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  杨苏珍 ,  柴书军 ,  金前跃 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K14/015 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16 ,  C07K1/14 ,  C12P21/02 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供一种去除大肠杆菌表达重组猪细小病毒VP2蛋白中内毒素的方法，包括猪细小病毒重组VP2蛋白抗原溶液制备、氢氧化铝悬液制备、氢氧化铝吸附和层析法分离步骤。通过氢氧化铝吸附和复合模式层析介质分离两步，可以有效去除大肠杆菌表达系统中重组蛋白的内毒素，操作简单实用，符合规模化生产需求。采用本发明方法处理后的生物制品的VP2蛋白内毒素含量小于200EU/mL，且对VP2蛋白抗原活性无明显影响，安全性好，处理后的蛋白可在制备疫苗、药物类等生物制品中应用，解决了PPV疫苗生产中的核心技术问题。

公开(公告)号：CN110627869A

公开(公告)日：2019-12-31

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9-15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9-15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN110627869B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN106148358A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610557798.9

申请日：2016-07-15

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  王爱萍 ,  陈玉梅 ,  邢广旭 ,  姬鹏超 ,  刘文英 ,  王娟 ,  冯景 ,  刘东民 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/35 ,  C07K14/015 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N7/04 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/005 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5258 ,  C12N7/00 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/14322 ,  C12N2750/14323 ,  C12N2750/14334 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22

摘要： 本发明公开了一种猪细小病毒VP2蛋白的编码基因、原核表达VP2蛋白病毒样颗粒的方法及其在疫苗制备中的应用。对序列进行优化，人工合成VP2基因，将合成的基因插入pET28a载体，然后和伴侣蛋白质粒共转入BL21(DE3)宿主菌中，使VP2蛋白和伴侣蛋白共表达，以促进VP2蛋白的正确折叠。实验证明，通过该重组菌表达的VP2蛋白能在体外实现自组装，且具有良好的免疫原性。使用由本发明表达的VP2蛋白制备的病毒样颗粒亚单位疫苗免疫小鼠和豚鼠能够诱导高水平的血凝抑制抗体和中和抗体产生，而且此疫苗能够预防豚鼠免受猪细小病毒强毒的感染。采用本发明的重组菌能够高效制备猪细小病毒病毒样颗粒，生产成本低、操作简单、具有更好的生物安全性。

公开(公告)号：CN113063935A

公开(公告)日：2021-07-02

申请号：CN202110272751.9

申请日：2021-03-13

申请人： 河南省农业科学院

发明人： 杨苏珍 ,  孙亚宁 ,  胡骁飞 ,  郭军庆 ,  杨继飞 ,  邢云瑞 ,  邓瑞广 ,  张改平

IPC分类号： G01N33/52 ,  G01N33/541

摘要： 本发明涉及一种一体化“自放大”的间接竞争免疫层析检测试纸，试纸包括支撑层、固定在支撑层上的吸附层和保护层；吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫一、结合垫二、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层；纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；结合垫一吸附有靶标物单克隆抗体，结合垫二吸附有纳米材料标记的人工抗原及纳米材料标记的生物素。该试纸抗体无需标记，加保护液干燥于结合垫一，避免了标记抗体过程中抗体的折叠及损伤，且可以精确的控制抗体用量；以纳米颗粒标记人工抗原作为探针，检测线上拦截的每个抗体都能精准结合两个标记抗原，实现了信号自放大，使免疫层析试纸的灵敏度更高。