公开(公告)号：CN109161575A

公开(公告)日：2019-01-08

申请号：CN201811083057.7

申请日：2018-09-17

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  邓瑞广 ,  邢广旭 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘艳凯 ,  赵孟孟

IPC分类号： C12P21/02 ,  C07K14/08 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种禽法氏囊病毒VP2蛋白的高表达发酵工艺，旨在解决工程菌禽法氏囊病毒VP2蛋白表达量低的技术问题。该发酵工艺包括以下步骤：（1）菌种活化；（2）种子培养；（3）补料分批发酵：I.细胞快速繁殖阶段：制备基础培养基置于发酵罐中，将二级种子液按4～6%的接种量接入发酵罐中发酵，待溶氧量急剧上升开始补料；II.蛋白表达阶段：加入终浓度为0.5mmol/L诱导剂；加入补料培养基之二，继续发酵至结束即成。本发明的工艺方法蛋白表达量高，能够缩短生产周期、减少设备投资，降低生产成本，提高生产效率，能够极大地提高产品在商场上的竞争力，为IBDV基因工程亚单位疫苗的研制和生产奠定了基础。

公开(公告)号：CN108823218A

公开(公告)日：2018-11-16

申请号：CN201810797851.1

申请日：2018-07-19

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  蒋大伟 ,  陈玉梅 ,  刘东民 ,  赵建国 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  周景明 ,  刘燕凯 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/40 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K14/08 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因、其表达产物、其亚单位疫苗及应用。本发明提供了一种鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的核酸序列、克隆该核酸序列的引物、含该核酸序列的表达载体、由表达载体转化而得的工程菌、由核酸序列编码、表达载体表达或所工程菌分离的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白，及鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白自组装而成的鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒。还提供了由鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白制得的亚单位疫苗，由鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒制得的亚单位疫苗。将亚单位疫苗在预防鸡传染性法氏囊病病毒引起的鸡相关疾病中应用。本发明生产成本低、操作简单、生物安全性好，疫苗可有效预防鸡传染性法氏囊病毒对鸡群的感染。

公开(公告)号：CN110627869B

公开(公告)日：2022-04-22

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9‑15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9‑15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN106148358A

公开(公告)日：2016-11-23

申请号：CN201610557798.9

申请日：2016-07-15

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  刘运超 ,  王爱萍 ,  陈玉梅 ,  邢广旭 ,  姬鹏超 ,  刘文英 ,  王娟 ,  冯景 ,  刘东民 ,  邓瑞广

IPC分类号： C12N15/35 ,  C07K14/015 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12N7/04 ,  A61K39/23 ,  A61P31/20 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/005 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/5258 ,  C12N7/00 ,  C12N15/70 ,  C12N2750/14322 ,  C12N2750/14323 ,  C12N2750/14334 ,  C12N2800/101 ,  C12N2800/22

摘要： 本发明公开了一种猪细小病毒VP2蛋白的编码基因、原核表达VP2蛋白病毒样颗粒的方法及其在疫苗制备中的应用。对序列进行优化，人工合成VP2基因，将合成的基因插入pET28a载体，然后和伴侣蛋白质粒共转入BL21(DE3)宿主菌中，使VP2蛋白和伴侣蛋白共表达，以促进VP2蛋白的正确折叠。实验证明，通过该重组菌表达的VP2蛋白能在体外实现自组装，且具有良好的免疫原性。使用由本发明表达的VP2蛋白制备的病毒样颗粒亚单位疫苗免疫小鼠和豚鼠能够诱导高水平的血凝抑制抗体和中和抗体产生，而且此疫苗能够预防豚鼠免受猪细小病毒强毒的感染。采用本发明的重组菌能够高效制备猪细小病毒病毒样颗粒，生产成本低、操作简单、具有更好的生物安全性。

公开(公告)号：CN110627869A

公开(公告)日：2019-12-31

申请号：CN201910949075.7

申请日：2019-10-08

申请人： 河南省农业科学院 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 刘运超 ,  张改平 ,  陈玉梅 ,  王方雨 ,  尚延丽 ,  魏蔷 ,  冯华 ,  刘东民 ,  邢广旭 ,  邓瑞广

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及与禽法氏囊病毒VP2蛋白特异性结合的多肽序列及其应用，属于分子生物学领域。本发明借助于计算机辅助设计，在禽法氏囊病毒VP2蛋白晶体结构的基础上，通过分子对接虚拟筛选技术，搜寻虚拟多肽数据库中与靶标蛋白结合模式与亲和力最佳的多肽配体，其多肽序列为SERWDN，即IBDVL9-15。本发明利用表达纯化的IBDV VP2蛋白分别进行ELISA和局域表面等离子体共振试验，结果表明，IBDVL9-15多肽能够与IBDV VP2蛋白有良好的结合能力，借助本发明设计而成的多肽，可用于对IBDV VP2抗原进行快速检测和分离纯化。

公开(公告)号：CN112625091A

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN202011565041.7

申请日：2020-12-25

申请人： 河南中泽生物工程有限公司

发明人： 张改平 ,  王爱萍 ,  王方雨 ,  刘东民 ,  周景明 ,  赵建国 ,  刘燕凯 ,  丁培杨 ,  冯景

IPC分类号： C07K7/06 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68

摘要： 本发明主要涉及猪瘟病毒Erns蛋白亲和多肽及应用，该多肽由计算机模拟的虚拟分子对接技术设计而成，序列为WRHYIH。本发明以同源建模获得的猪瘟Erns蛋白晶体结构为模板，根据虚拟分子筛选技术，获得多肽序列P1。人工合成多肽后，采用酶联免疫吸附测定试验和等离子共振试验鉴定该序列与猪瘟Erns蛋白相互作用的亲和性，结果表明P1序列与猪瘟Erns蛋白具有较高的特异性和亲和力；本发明为以亲和肽作为亲和配基的亲和层析提供了可靠理论基础，可通过对多肽标记，从而对猪瘟Erns蛋白进行快速检测。

公开(公告)号：CN109781981B

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN201910088473.4

申请日：2019-01-30

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  郑州大学

发明人： 王爱萍 ,  张改平 ,  刘运超 ,  贾蕊 ,  刘东民 ,  赵建国 ,  祁元明 ,  石海宁

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N21/64

摘要： 本发明公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒的分子探针及Realtime‑PCR检测方法，旨在解决现有检测技术可靠性和实用性差的技术问题。本发明检测非洲猪瘟病毒的分子探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明配制了一种检测非洲猪瘟病毒的RT‑PCR反应液，制备了一种检测非洲猪瘟病毒RT‑PCR反应液冻干粉、一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，并提供了非洲猪瘟病毒的定性和定量检测方法。本发明设计的分子探针及建立RT‑PCR检测方法具有敏度性高、重复性好、特异性强的特点，提高PCR技术检测ASFV的可靠性和易用性，实现无污染、高通量的检测，可用于检测易感动物及相关动物制品中ASFV核酸。

公开(公告)号：CN112940085B

公开(公告)日：2022-03-18

申请号：CN202110162921.8

申请日：2021-02-05

申请人： 郑州大学 ,  河南中泽生物工程有限公司

发明人： 王爱萍 ,  冯华 ,  杜锦然 ,  张磊 ,  周景明 ,  陈玉梅 ,  刘燕凯 ,  贾蕊 ,  田媛媛 ,  刘东民 ,  张改平

IPC分类号： C07K14/14 ,  C07K16/10 ,  C12N5/20 ,  G01N33/569 ,  A61K39/15 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14

摘要： 本发明公开了一种BTV1保护性表位多肽、其特异性识别单克隆抗体、抗体分泌细胞及其应用，旨在解决BTV血清型的检测诊断及BTV预防和治疗试剂或药物不完善、不全面的技术问题。本发明鉴定得到一种全新的BTV1 VP2蛋白的线性B细胞表位：296‑KEPAD‑300，并诱导制得能特异性识别该表位的单克隆抗体。该线性B细胞表位丰富了BTV1 VP2蛋白的免疫学功能，为后续研究VP2蛋白的结构特性以及抗原特性提供参考，可应用于抗病毒药物、防疫疫苗等的研发。

公开(公告)号：CN108802381B

公开(公告)日：2021-03-12

申请号：CN201810604281.X

申请日：2018-06-13

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  扬州大学

发明人： 刘东民 ,  朱礼倩 ,  傅小恬 ,  陈鑫烨 ,  杨继飞 ,  王丽 ,  李青梅 ,  郭军庆 ,  邢广旭 ,  周景明 ,  刘运超

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/558

摘要： 本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法，以快速灵敏检测BVDV抗体。该试纸条由支撑底板、包被吸附材料层、蛋白标记承载材料层、样品缓冲材料层、液体吸收材料层、外层保护材料组成；所述包被吸附材料设有测试线和质控线；所述试纸条的蛋白标记采用胶体金标记；所述蛋白标记所用的蛋白为从噬菌体多肽文库中筛选所得的与BVDV抗体结合的噬菌体单克隆；所述噬菌体单克隆表达的多肽表位为LTPHKHHKHLHA。其制备方法包括金标噬菌体单克隆的制备、金标垫的制备、硝酸纤维素膜的制备、组装各部件，即得。本发明可以在十分钟之内获得检测结果，快速敏感，成本低，操作简单易于基层在生产和科研中推广和应用。

公开(公告)号：CN109781981A

公开(公告)日：2019-05-21

申请号：CN201910088473.4

申请日：2019-01-30

申请人： 河南中泽生物工程有限公司 ,  郑州大学

发明人： 王爱萍 ,  张改平 ,  刘运超 ,  贾蕊 ,  刘东民 ,  赵建国 ,  祁元明 ,  石海宁

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N21/64

摘要： 本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒的分子探针、试剂盒及其应用，旨在解决现有检测技术可靠性和实用性差的技术问题。本发明检测非洲猪瘟病毒的分子探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明配制了一种检测非洲猪瘟病毒的RT-PCR反应液，制备了一种检测非洲猪瘟病毒RT-PCR反应液冻干粉、一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，并提供了非洲猪瘟病毒的定性和定量检测方法。本发明设计的分子探针及建立RT-PCR检测方法具有敏度性高、重复性好、特异性强的特点，提高PCR技术检测ASFV的可靠性和易用性，实现无污染、高通量的检测，可用于检测易感动物及相关动物制品中ASFV核酸。