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公开(公告)号：CN118726431A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202411072477.0
申请日：2024-08-06
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种基于丙酮酸前体池累积的D‑泛酸高产工程菌构建方法，构建得到的D‑泛酸高产工程菌及其应用。本发明主要通过(1)利用柠檬酸合酶变体降低其对乙酰辅酶A的亲和力进一步削弱TCA循环碳通量，进一步使碳通量流向D‑泛酸的合成；(2)随后，为减少丙酮酸向乙酰辅酶A的转化，筛选出对丙酮酸低亲和力的丙酮酸脱氢酶突变体，突变体的引入有效促进了D‑泛酸的合成；最后(3)将更多的代谢通量引入泛解酸合成途径，增加主路径关键基因的拷贝数，得到一株无质粒、无抗生素添加用于高产D‑泛酸的工程菌株，使得D‑泛酸摇瓶效价达到6.68g/L。
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公开(公告)号：CN116590209A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310695262.3
申请日：2023-06-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明主要通过(1)增加大肠杆菌生物体内泛解酸合成途径中关键基因拷贝数，进一步使碳通量流向D‑泛酸的合成；(2)为继续增强碳通量流向D‑泛酸的合成，通过削弱氮限制负调控转录因子，激活糖酵解前端基因拉动碳流，节约磷酸烯醇式丙酮酸及减少中心碳流进入TCA，得到一株无质粒、无抗生素添加用于产D‑泛酸的工程菌株。最终使得D‑泛酸摇瓶效价相对于出发菌株提升87.2％，达到5.43g/L；运用5‑L发酵罐发酵84小时，D‑泛酸产量能够达到94.2g/L。
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公开(公告)号：CN116622609A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310695247.9
申请日：2023-06-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明基于CRISPRi筛选技术来识别内源性基因靶点，提供一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明证实CRISPRi筛选可以得到对DPA合成有益的基因靶点；运用CRISPRi技术，筛选识别内源性基因靶点大幅度提高基因工程菌D‑泛酸生物合成能力，菌株DPAP10/pdCas9gRNA‑gltA‑ptsH相对于原始菌株DPAP10，在摇瓶中DPA产量提高了49.5％达到5.3g/L；中间代谢物检测分析发现，改变丙酮酸通量分布和降低TCA循环速率，会导致碳流更多流向DPA合成代谢路径中，从而提高DPA的产量，这一发现为构建更高产菌株提供了新思路。
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公开(公告)号：CN119220512A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411766945.4
申请日：2024-12-04
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了酮醇酸还原异构酶突变体及其在构建高产D‑泛酸的基因工程菌中的应用。为了解决现有技术中微生物发酵合成D‑泛酸产量不高的技术问题，本发明运用酶的半理性设计，获得了具有底物特异性的酮醇酸还原异构酶突变体，并将其应用至构建高产D‑泛酸的基因工程菌中。本发明还通过CRISPR‑Cas9基因编辑技术，利用所述的酮醇酸还原异构酶突变体，构建得到了高产D‑泛酸的基因工程菌，使D‑泛酸产量增加了12.04%左右，且相对于出发菌株，所得发酵液中缬氨酸积累量和对照相比几乎无变化，但支链氨基酸异亮氨酸积累较少，达到酮醇酸还原异构酶其底物特异性的改造。
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公开(公告)号：CN118910112A
公开(公告)日：2024-11-08
申请号：CN202411070975.1
申请日：2024-08-06
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明提供了一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明在现有工程菌的基础，过表达异源glF基因以及glK基因增强非PTS系统的糖摄取，提升该菌株的葡萄糖的转运，满足细胞对能量和其他代谢物质的需求，强化基因工程菌生长力；同时进一步强化了D‑泛酸合成途径中关键基因panC的表达水平，使碳通量流向D‑泛酸的合成；通过动态调控泛酸激酶编码基因coaA以减少泛酸副产物的生成；最终运用Hfq蛋白参与非编码RNA与其靶标mRNAs的互作过程，抑制ptsH基因翻译，从而使得PTS系统对葡萄糖的摄取减弱。由此构建得到的菌株D‑泛酸摇瓶效价达到7.81g/L，相比出发菌株提高了12.29％。
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