公开(公告)号：CN116837015A

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202310748566.1

申请日：2023-06-25

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  陈立峰 ,  张博 ,  修晓玲 ,  郑裕国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及高产L‑半胱氨酸的基因工程菌及其构建方法和应用。以菌株E.coli W3110EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE为底盘菌，通过利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术将L‑半胱氨酸合成途径中的关键酶cysM、nrdH和cysE定位到半胱氨酸外转运蛋白ydeD上，利用区室结构的优点，提升L‑半胱氨酸碳代谢重要中间产物O‑乙酰丝氨酸的积累，强化大肠杆菌L‑半胱氨酸硫代硫酸盐合成途径，提高转运效率，得到可高产L‑半胱氨酸的大肠杆菌基因工程菌株。

公开(公告)号：CN115806925A

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202211335564.1

申请日：2022-10-28

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  杨辉 ,  张博 ,  吴梓丹 ,  潘佳园 ,  陈立峰 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/90 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法，及其在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过将Esa群体感应系统和乳糖操纵子系统进行整合，构建了一个多功能的QSI动态调控系统，实现了靶基因表达与细胞生长的偶联，并应用到L‑半胱氨酸的生物合成当中，获得了一株高产L‑半胱氨酸的大肠杆菌基因工程菌株。此外，本发明所构建QSI动态控制系统，利用群体感应系统动态地控制乳糖操纵子系统，替代了传统诱导剂IPTG的添加，有效的节约了工业生产的成本和降低了诱导剂IPTG对细胞的毒性影响，具有较好的生产应用价值。

公开(公告)号：CN116622741A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310748578.4

申请日：2023-06-25

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  修晓玲 ,  潘佳园 ,  陈立峰 ,  柳志强 ,  郑裕国

IPC: C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N15/113 ,  C07K14/245 ,  C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及代谢工程技术领域，尤其涉及一种cysB突变体、高产L‑半胱氨酸的基因工程菌及其构建方法和应用，该cysB突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其对硫源结合能力更优及不受OAS激活作用，并基于突变体以菌株E.coli W3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC/pE为底盘菌，构建了一株能够对cysB表达强度性能更优的高产L‑半胱氨酸的基因工程菌E.coli W3110EYC::PyhaO‑ydeD::PyhaO‑yfiK::PyhaO‑yeaS::PyhaO‑alaE::PyhaO‑apFAB689‑tolC‑ΔcysB/pTrc99a‑cysBV122G‑pcysK‑eGFP。相对于出发菌株，本发明中的基因工程菌单位时间内生长效率提高了10.5％，最终使L‑半胱氨酸的效价提高了55％。

公开(公告)号：CN116064354A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211335028.1

申请日：2022-10-28

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  杨辉 ,  吴梓丹 ,  陈立峰 ,  潘佳园 ,  柳志强 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/90 ,  C12N15/67 ,  C12N15/31 ,  C12P13/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法，及其在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明通过构建能够响应细胞内L‑半胱氨酸的DECR‑CYS动态调控系统，利用不同的工程启动子，驱动通过筛选得到的有效的L‑半胱氨酸转运蛋白YdeD，YfiK，YeaS，AlaE和TolC组建成的高效的L‑半胱氨酸转运系统，获得高产L‑半胱氨酸的大肠杆菌工程菌株。本发明所构建的工程菌株，能够响应L‑半胱氨酸的积累水平，动态地激活L‑半胱氨酸转运系统，降低L‑半胱氨酸对细胞的毒性影响，具有较好的生产应用价值。