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公开(公告)号：CN113980916B
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202111136995.0
申请日：2021-09-27
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： C12N7/02
摘要： 本发明涉及一种慢病毒的纯化方法，该纯化方法是在纯化的浓缩过程中使用一定浓度的PEG(添加KCl或NaCl)按比例与病毒上清进行混合，离心，得到慢病毒沉淀；用PBS溶解，对获得的慢病毒悬液进行核酸酶Benzonase酶切处理；添加鱼精蛋白进行沉淀慢病毒，添加1mol/L NaCl溶解病毒，离心，得到初纯化的慢病毒悬液；再经过蔗糖密度梯度离心，获得纯化的慢病毒。本发明制得的慢病毒纯化液无外源因子污染，细胞宿主蛋白、宿主DNA残留度低，安全性好，纯度和滴度高，可达到动物实验及临床要求。
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公开(公告)号：CN118240756A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410338783.8
申请日：2024-03-25
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： C12N5/0775 , A61K9/19 , A61K35/28 , A61K8/98 , A61K8/02 , A61K47/24 , A61K47/28 , A61K47/10 , A61K8/55 , A61K8/63 , A61K8/86 , A61Q19/00 , A01N1/02 , A23L33/10
摘要： 本发明涉及细胞技术领域，公开了一种干细胞外泌体纳米颗粒制剂及其制备方法和应用。该方法包括：(1)将卵磷脂、胆固醇、聚乙二醇加入二氯甲烷中进行第一搅拌，得到初乳；(2)将脐带间充质干细胞外泌体加入磷酸盐缓冲液中，得到水相；(3)将所述初乳注入所述水相中进行第二搅拌，得到复乳；(4)将所述复乳进行浓缩处理，再加入磷酸盐缓冲液进行稀释处理，得到初级脂质体；(5)将所述初级脂质体进行分散处理，得到干细胞外泌体纳米颗粒溶液。本发明提供的方法能够实现干细胞长期传代培养而不失去其干性，降低了干细胞的获取成本；且该方法能够实现在常温状态下维持外泌体的形态，降低了冷冻保存和运输的成本。
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公开(公告)号：CN109295103A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811276840.5
申请日：2018-10-30
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10 , C12N7/01
摘要： 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种慢病毒载体及其在构建永生化细胞中的应用。本发明通过慢病毒感染将不同永生化关键基因有选择、针对性整合到目的细胞基因组中，不仅提高了永生化效率，而且不会使细胞中产生有害副产物。由于同时导入了两种永生化基因，使该质粒载体的应用范围扩大了，可以适用于更多的细胞种类，并且两组基因诱导永生化的机制有差异，能够互补提高永生化效率。加入了诱导型启动子，可以通过诱导剂来控制TERT的表达，降低了细胞的癌变可能，能更好控制细胞的永生化过程。
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公开(公告)号：CN108094405B
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN201711392799.3
申请日：2017-12-21
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： A01N1/02
摘要： 本发明涉及细胞领域，特别涉及细胞冻存组合物及其应用。本发明在细胞冻存液中使用抗冻蛋白，显著的提高了细胞的存活率。本发明提供的抗冻组合物加入了抗冻蛋白，可以显著的提高存活率，达到80％以上，这在干细胞、神经细胞等稀少细胞的保存上有很重要的意义，同时也降低了细胞复苏后细胞培养的成本，缩短了细胞培养的周期。
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公开(公告)号：CN106222141B
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201610905270.6
申请日：2016-10-17
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
发明人： 许澎
IPC分类号： C12N5/0783 , C12N5/078
摘要： 本申请属于细胞技术领域，具体涉及细胞培养液和细胞培养方法及其应用。本发明提供的细胞培养液，包括：培养液A和培养液B，所述培养液A中包含OKT3、CD16、IL‑2、IL‑15和4‑1BBL等细胞因子，所述培养液B中包含IL‑2、IL‑15和4‑1BBL等细胞因子。本发明还提供了一种细胞培养方法，包括：将细胞接种于培养液A中培养，隔天补充所述培养液A；培养至第9天时补充培养液B继续培养，隔天补充所述培养液B。本发明优化了细胞因子组合和培养工艺流程，不仅缩短了培养周期，使培养只需14‑21天，而且培养得到的NK细胞纯度达到70％以上；本发明方法无需对NK细胞进行纯化，步骤简便，可操作性强。
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公开(公告)号：CN108094405A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711392799.3
申请日：2017-12-21
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： A01N1/02
摘要： 本发明涉及细胞领域，特别涉及细胞冻存组合物及其应用。本发明在细胞冻存液中使用抗冻蛋白，显著的提高了细胞的存活率。本发明提供的抗冻组合物加入了抗冻蛋白，可以显著的提高存活率，达到80％以上，这在干细胞、神经细胞等稀少细胞的保存上有很重要的意义，同时也降低了细胞复苏后细胞培养的成本，缩短了细胞培养的周期。
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公开(公告)号：CN107904252A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711159062.7
申请日：2017-11-20
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及质粒载体及其构建方法、应用。本发明提供了双表达载体是以此质粒载体为基础，使用具有自我剪切功能的p2A序列代替到IRES(内部核糖体进入位点序列)。转染后，质粒从CMV启动子区域开始形成的mRNA可以自我剪切成2个独立的mRNA序列，分别表达两种基因，并且保证了两种蛋白的表达量相当，方便后续的研究。
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公开(公告)号：CN107868799A
公开(公告)日：2018-04-03
申请号：CN201711158905.1
申请日：2017-11-20
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
IPC分类号： C12N15/867 , C12N15/66 , C12N15/62
CPC分类号： C12N15/86 , C07K14/47 , C07K2319/02 , C12N15/66 , C12N2740/15043 , C12N2840/44
摘要： 本发明涉及生物技术领域，特别涉及表达载体及其构建方法和应用。本发明提供了新的双表达慢病毒载体，使用具有自我剪切功能的p2A序列代替到IRES(内部核糖体进入位点序列)。感染后，慢病毒表达载体自启动子区域开始形成的mRNA可以自我剪切成2个独立的mRNA序列，分别表达两种基因，并且保证了两种蛋白的表达量相当，方便后续的研究。本发明提供的思路也适用于包括腺病毒在内的其他的病毒载体。
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公开(公告)号：CN106222141A
公开(公告)日：2016-12-14
申请号：CN201610905270.6
申请日：2016-10-17
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
发明人： 许澎
IPC分类号： C12N5/0783 , C12N5/078
CPC分类号： C12N5/0646 , C12N5/0634 , C12N2500/90 , C12N2501/2302 , C12N2501/2315 , C12N2501/25 , C12N2501/515 , C12N2501/599
摘要： 本申请属于细胞技术领域，具体涉及细胞培养液和细胞培养方法及其应用。本发明提供的细胞培养液，包括：培养液A和培养液B，所述培养液A中包含OKT3、CD16、IL-2、IL-15和4-1BBL等细胞因子，所述培养液B中包含IL-2、IL-15和4-1BBL等细胞因子。本发明还提供了一种细胞培养方法，包括：将细胞接种于培养液A中培养，隔天补充所述培养液A；培养至第9天时补充培养液B继续培养，隔天补充所述培养液B。本发明优化了细胞因子组合和培养工艺流程，不仅缩短了培养周期，使培养只需14-21天，而且培养得到的NK细胞纯度达到70％以上；本发明方法无需对NK细胞进行纯化，步骤简便，可操作性强。
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公开(公告)号：CN106119192A
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201610498144.3
申请日：2016-06-29
申请人： 湖南丰晖生物科技有限公司
发明人： 许澎
IPC分类号： C12N5/0783
CPC分类号： C12N5/0646 , C12N2500/90 , C12N2501/2302 , C12N2501/2312 , C12N2501/2315 , C12N2501/998
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及组合物及其在CIK细胞培养中的应用。本发明提供了组合物及其在CIK细胞培养中的应用，以本发明提供的组合物配合本发明提供的培养方法，能够提高CIK细胞的得率，且其中CD3+CD56+双阳性细胞的比例较高。实验表明，本发明提供的组合物和培养方法对单个核细胞进行诱导，能够将细胞的总数从诱导前的5×107提高至8.9×109，且CD3+CD56+双阳性细胞的比例为36.1％，该效果显著优于单独使用IL‑2(p
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