外周血CTL细胞的培养方法

    公开(公告)号:CN109486761A

    公开(公告)日:2019-03-19

    申请号:CN201910045777.2

    申请日:2019-01-17

    发明人: 施琳

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明涉及一种外周血CTL细胞的培养方法。该方法包括:1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养;培养体系中的细胞因子为IFN-γ900U/mL~1100U/mL;2)向培养体系中加入IL-1α和IL-2,终浓度均为900U/mL~1100U/mL;培养体系中还加入有IL-7,终浓度为4~6ng/mL;3)换液,新的培养体系中的细胞因子为IL-2 900U/mL~1100U/mL,IL-7,2~3ng/mL,基础培养基为含4%~6%自体血浆的VIVO培养基。该方法CTL扩增效果好,且活化的CTL占比更高、T-reg细胞占比更低。

    一种基于PiggyBac载体的CD-133-CAR-T系统构建方法

    公开(公告)号:CN109022363A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201810926459.2

    申请日:2018-08-15

    申请人: 马晓冬

    摘要: 本发明涉及CD‑133‑CAR‑T系统构建技术,特别是涉及一种基于PiggyBac载体的CD‑133‑CAR‑T系统构建方法,其是通过设计合成CD‑133‑CAR基因片段,然后将CD‑133‑CAR基因片段连接到Piggybac载体上得到Piggybac‑CAR‑CD‑133,再将Piggybac‑CAR‑CD‑133转入大肠杆菌中进行扩增,然后从大肠杆菌中提取质粒,并加入到人血清中分离的淋巴细胞中进行扩展培养,采用Nucleofector细胞转染系统转染共转染质粒Piggybac‑CAR‑CD‑133和Piggybac Transposase到T淋巴细胞,得到带有CD‑133‑CAR基因片段的T淋巴细胞。本发明采用非病毒类载体PiggyBac系统,避免了使用病毒载体存在的安全隐患,具有更高的安全性和有效性,更加适用于临床治疗;采用的Nucleofector细胞核技术,能够将外源基因直接导入到细胞核,克服了脂质体转染和普通电穿孔,必须依赖细胞分裂时才有可能使外源基因入核表达的缺陷,细胞具有更高的存活率和增殖效率。

    肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法

    公开(公告)号:CN108753718A

    公开(公告)日:2018-11-06

    申请号:CN201810639633.5

    申请日:2018-06-20

    发明人: 何英广 马思航

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明公开了肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法,步骤为:步骤S1、TIL细胞分离:取癌旁组织剪碎浸入胶原酶溶液消化,过滤,PBS冲洗,收集滤液,离心,弃上清,加入PBS制成细胞悬液,用淋巴细胞分离液作不连续密度梯度离心,离心结束后收取下层界面的淋巴细胞,经PBS清洗后,按1×106/mL的浓度悬浮于含10%人AB型血清和IL‑2的培养基内培养,每3~5d换液一次;步骤S2、培养和扩增:当孔里的淋巴细胞生长至1×107时,将其转入含抗CD3单抗、抗CD28单抗和药物的培养瓶内孵育,24h后加入IL‑2连续培养,每隔2~3d半量更换含同等浓度IL‑2的新鲜培养基培养22~25d。

    一种肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法

    公开(公告)号:CN108707580A

    公开(公告)日:2018-10-26

    申请号:CN201810639632.0

    申请日:2018-06-20

    发明人: 何英广 马思航

    IPC分类号: C12N5/0783

    摘要: 本发明公开了一种肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法,步骤为:步骤S1、TIL细胞分离:取癌旁组织剪碎浸入胶原酶溶液消化,过滤,PBS冲洗,收集滤液,离心,弃上清,加入PBS制成细胞悬液,用淋巴细胞分离液作不连续密度梯度离心,离心结束后收取下层界面的淋巴细胞,经PBS清洗后,按1×106/mL的浓度悬浮于含10%人AB型血清和IL‑2的培养基内培养,每3~5d换液一次;步骤S2、培养和扩增:当孔里的淋巴细胞生长至1×107时,将其转入含抗CD3单抗、抗CD28单抗和药物的培养瓶内孵育,24h后加入IL‑2连续培养,每隔2~3d半量更换含同等浓度IL‑2的新鲜培养基培养22~25d。

    表达Th1特性和溶细胞性质的细胞
    9.
    发明公开

    公开(公告)号:CN108245673A

    公开(公告)日:2018-07-06

    申请号:CN201810168834.1

    申请日:2011-08-22

    IPC分类号: A61K39/00 A61K35/17 A61P35/00

    摘要: 已经产生具有Th1特性和溶细胞活性的新细胞类型。这些Th1/杀伤细胞为CD4+细胞,CD4+细胞从外周血纯化且被操作以具有Th1特性,例如类似于细胞毒性T‑细胞(CTL)的、结合溶细胞活性的产生IFN‑γ的。CTL活性以病变细胞为目标,而不以正常细胞为目标。Th1/杀伤细胞的溶细胞活性通过粒酶B‑穿孔素机制介导且导致病变细胞的凋亡性死亡。生产和使用这些Th1/杀伤细胞的方法包括从外周血分离出CD4+细胞,激活CD4+T‑细胞以形成Th1/杀伤细胞,以及向患者给药具有溶细胞活性的Th1/杀伤细胞,其中Th1/杀伤细胞对于该患者是同种异体的。