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公开(公告)号：CN114934053B
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202210757360.0
申请日：2022-06-30
申请人： 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 上海健士拜生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 上海澳斯康生物制药有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
发明人： 牛庆田 , 刘兵 , 施赛赛 , 林健芬 , 马燕 , 周亲亲 , 殷翔宇 , 孙超 , 何家玲 , 郑海峰 , 卜纪斌 , 郜诗炯 , 顾如林 , 胡加慧 , 刘峰 , 仇金树 , 阚子义 , 罗顺
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/54 , C12N5/10 , C12R1/91
摘要： 本发明公开了一种岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系的制备方法，包括：采用三种sgRNA与FUT8基因编码SH3结构域的外显子区域片段重组敲除CHO细胞的FUT8基因，以获得岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系；其中，外显子区域片段包含如SEQ ID NO.1所示的序列；三种sgRNA的序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明创造性地采用三种sgRNA与FUT8基因编码SH3结构域的外显子区域片段重组以敲除CHO细胞的FUT8基因，显著提高sgRNA的打靶效率，进而显著提高了FUT8基因的敲除效率，更容易获得岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系。
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公开(公告)号：CN115807040A
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202210856914.2
申请日：2022-07-20
申请人： 上海澳斯康生物制药有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 上海健士拜生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： C12N15/864 , C12N15/12 , C12N5/10 , A61K48/00 , A61P35/00
摘要： 本发明公开了一种PD‑1蛋白表达载体及其应用，其中，PD‑1蛋白表达载体包括AAV载体，AAV载体的多克隆位点的酶切位点间插入有PD‑1基因片段。本发明的PD‑1蛋白表达载体，能够在人体内长期表达PD‑1蛋白，PD‑1蛋白和肿瘤细胞的PD‑L1特异性结合，从而降低肿瘤细胞对T细胞的负调节作用，提高T淋巴细胞对肿瘤细胞生长的抑制作用。
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公开(公告)号：CN114934053A
公开(公告)日：2022-08-23
申请号：CN202210757360.0
申请日：2022-06-30
申请人： 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 上海健士拜生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 上海澳斯康生物制药有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
发明人： 牛庆田 , 刘兵 , 施赛赛 , 林健芬 , 马燕 , 周亲亲 , 殷翔宇 , 孙超 , 何家玲 , 郑海峰 , 卜纪斌 , 郜诗炯 , 顾如林 , 胡加慧 , 刘峰 , 仇金树 , 阚子义 , 罗顺
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/54 , C12N5/10 , C12R1/91
摘要： 本发明公开了一种岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系的制备方法，包括：采用三种sgRNA与FUT8基因编码SH3结构域的外显子区域片段重组敲除CHO细胞的FUT8基因，以获得岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系；其中，外显子区域片段包含如SEQ ID NO.1所示的序列；三种sgRNA的序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明创造性地采用三种sgRNA与FUT8基因编码SH3结构域的外显子区域片段重组以敲除CHO细胞的FUT8基因，显著提高sgRNA的打靶效率，进而显著提高了FUT8基因的敲除效率，更容易获得岩藻糖基转移酶8缺陷型CHO细胞系。
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公开(公告)号：CN115073549B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202210794754.3
申请日：2022-07-07
申请人： 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 上海健士拜生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 上海澳斯康生物制药有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种HEK293细胞裂解液的纯化方法。该HEK293细胞裂解液的纯化方法，由于细胞裂解液中存在大量的细胞碎片、宿主细胞蛋白(HCP)以及宿主细胞DNA等杂质，先经过碟式离心机离心去除大部分细胞碎片后再进行深层过滤，能够极大地减轻深层过滤的压力，避免深层过滤时的滤膜堵塞，大大提高深层过滤的效率，易于扩大生产，并能制备得到浊度较低的澄清液，所得澄清液中的宿主细胞DNA含量和HCP含量都得到了大幅度降低，极大减轻了后续蛋白进一步纯化工艺的压力，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN115073549A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210794754.3
申请日：2022-07-07
申请人： 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 上海健士拜生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 上海澳斯康生物制药有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
摘要： 本发明涉及一种HEK293细胞裂解液的纯化方法。该HEK293细胞裂解液的纯化方法，由于细胞裂解液中存在大量的细胞碎片、宿主细胞蛋白(HCP)以及宿主细胞DNA等杂质，先经过碟式离心机离心去除大部分细胞碎片后再进行深层过滤，能够极大地减轻深层过滤的压力，避免深层过滤时的滤膜堵塞，大大提高深层过滤的效率，易于扩大生产，并能制备得到浊度较低的澄清液，所得澄清液中的宿主细胞DNA含量和HCP含量都得到了大幅度降低，极大减轻了后续蛋白进一步纯化工艺的压力，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN114657153A
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210568364.4
申请日：2022-05-24
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司 , 上海澳斯康生物制药有限公司
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/864 , C12N15/66 , C12N5/10
摘要： 本发明提供一种rAAV重组包装质粒、用于rAAV包装的质粒系统和rAAV的制备方法。rAAV重组包装质粒包含pAAV‑RC质粒，以及插入所述pAAV‑RC质粒的P5启动子、真核启动子和mir342基因；P5启动子位于pAAV‑RC质粒rep基因上游，用于调控rep基因的表达；真核启动子位于mir342基因的上游，用于调控mir342基因的表达。本发明通过在pAAV‑RC质粒中插入mir342基因及调控其表达的真核启动子，并同时在其所含rep基因的上游引入P5启动子用于调控rep基因表达，从而构建得到一种rAAV重组包装质粒，采用包含该rAAV重组包装质粒的三质粒产品包装病毒，能够有效提升病毒滴度，提高产生效率，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN114438131A
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202210181171.3
申请日：2022-02-25
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司
摘要： 本发明公开了293细胞的转染方法，包括以下步骤：将293细胞与待转染物质混合，进行流式电转转染，所述流式电转转染的电压值为100V～300V，脉冲值为1000μs～5000μs，电击次数为1～10次，间隔为100ms～600ms，转染液流速为1mL/min～10mL/min，转染时的所述293细胞的细胞密度为1×105cells/mL～5×107cells/mL；将转染后的293细胞接种到转染培养基进行培养，所述转染培养基中含有L‑酪氨酸、烟酰胺、硫酸镁和氢化可的松，流式电转染条件和转染后营养环境相互配合，可使细胞的转染损伤修复并获得更好的生长环境，实现较高的基因表达强度、细胞密度和细胞存活率。
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公开(公告)号：CN114539351B
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202210094984.9
申请日：2022-01-26
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司
摘要： 本发明涉及一种纳米抗体的纯化方法，包括如下步骤：将纳米抗体收获液依次进行阳离子层析和阴离子层析，收集阴离子层析洗脱液；其中，所述阴离子层析采用的洗脱液的pH为7±0.5，所述洗脱液包含：10±2mM的Na2HPO4、10±2mM的NaH2PO4、0.01M～0.03M的精氨酸以及2mM～8mM的(NH4)2SO4。上述纳米抗体的纯化方法能够有效提高纳滤过程中的纳滤膜可滤过载量，同时还能够有效去除纳米抗体制品中的宿主细胞蛋白(HCP)，并在层析过程中维持纳米抗体的稳定性，减少聚集体的形成。
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公开(公告)号：CN114539351A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202210094984.9
申请日：2022-01-26
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司
摘要： 本发明涉及一种纳米抗体的纯化方法，包括如下步骤：将纳米抗体收获液依次进行阳离子层析和阴离子层析，收集阴离子层析洗脱液；其中，所述阴离子层析采用的洗脱液的pH为7±0.5，所述洗脱液包含：10±2mM的Na2HPO4、10±2mM的NaH2PO4、0.01M～0.03M的精氨酸以及2mM～8mM的(NH4)2SO4。上述纳米抗体的纯化方法能够有效提高纳滤过程中的纳滤膜可滤过载量，同时还能够有效去除纳米抗体制品中的宿主细胞蛋白(HCP)，并在层析过程中维持纳米抗体的稳定性，减少聚集体的形成。
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公开(公告)号：CN116655726A
公开(公告)日：2023-08-29
申请号：CN202310945170.6
申请日：2023-07-31
申请人： 上海澳斯康生物制药有限公司
摘要： 本申请涉及一种基于离子交换层析的抗体纯化方法，包括对待纯化抗体样品依次进行上样至离子交换层析柱、淋洗和洗脱的步骤；其中，所述淋洗包括第一次淋洗、第二次淋洗、第三次淋洗和第四次淋洗，所述第三次淋洗采用的淋洗液包含浓度为1.5mM~3mM的半胱氨酸以及浓度为0.4mM~0.8mM的胱氨酸，pH为7~7.8。上述基于离子交换层析的抗体纯化方法，在离子交换层析的基础上配合采用包含特定浓度的半胱氨酸以及胱氨酸，且pH为7~7.8的淋洗液进行洗脱，能够在实现抗体纯化的同时实现对抗体的修复，使纯化后获得分子结构完整的抗体的含量提升，且蛋白收率高。
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