Expression von Alkalischer Phosphatase in Hefe
    1.
    发明公开
    Expression von Alkalischer Phosphatase in Hefe 有权
    表达von Alkalischer磷酸酶在Hefe

    公开(公告)号:EP1176205A2

    公开(公告)日:2002-01-30

    申请号:EP01117822.5

    申请日:2001-07-21

    摘要: Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur rekombinanten Herstellung bzw. Expression von eukaryontischer Alkalischer Phosphatase in Hefezellen, wobei insbesondere eine DNA, kodierend für eine eukaryontische hochaktive Alkalische Phosphatase mit einer spezifischen Aktivität über 3000 U/mg eingesetzt wird. Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Insertion entsprechender Nukleinsäuresequenzen in einen Vektor zur Expression in methylotrophen Hefe-Stämmen sowie entsprechende Vektoren und Wirtsstämme.

    摘要翻译: 在酵母细胞中制备真核碱性磷酸酶(AP),包括将基因序列(A)克隆到不同载体中,转化和表达和纯化AP,是新的。 在酵母细胞中制备真核碱性磷酸酶(AP),包括将基因序列(A)克隆到不同载体中,转化和表达和纯化AP,是新的。 使用含有针对选择标记(SM1)的抗性基因(RG1)的第一载体,并且通过在含有低浓度SM1的培养基上生长选择将RG1和(A)整合到基因组中的转化体。 通过多重转化增加基因拷贝数,并在高选择压力下在生长培养基上选择多个转化体。 引入含有针对第二标记(SM2)的(A)和抗性基因(RG2)的第二载体,其拷贝数增加为RG1,并且选择具有多个拷贝(A)的克隆和RG1和RG2的拷贝, 整合到基因组中。 还包括以下独立权利要求:(1)说明书中完全定义的1476个碱基对序列(S5); (2)载体(S5); 和(3)用(2)的载体转化的宿主细胞。