公开(公告)号：US08039259B2

公开(公告)日：2011-10-18

申请号：US11931996

申请日：2007-10-31

申请人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Mueller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterhus ,  Michael Nix

发明人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Mueller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterhus ,  Michael Nix

IPC分类号： C12N5/02 ,  C12N15/87

CPC分类号： C12N15/87 ,  A61K38/00 ,  A61K48/00

摘要： A buffer solution for suspending animal or human cells and for dissolving biologically active molecules in order to introduce the biologically active molecules into the cells using electric current. The buffer solution includes at least one of sodium succinate, mannitol and sodium lactobionate. The buffer solution has a buffer capacity of at least 20 mmol*l−1*pH−1 at a change in the from pH 7 to pH 8 and at a temperature of 25° C., and an ionic strength of at least 200 mmol * l−1.

摘要翻译： 用于悬浮动物或人细胞并溶解生物活性分子以便使用电流将生物活性分子引入细胞的缓冲溶液。 缓冲溶液包括琥珀酸钠，甘露糖醇和乳糖酸钠中的至少一种。 缓冲溶液在pH7至pH8的变化和25℃的温度下具有至少20mmol * l-1 * pH-1的缓冲容量，离子强度至少为200mmol * l-1。

公开(公告)号：US20080220527A1

公开(公告)日：2008-09-11

申请号：US11944253

申请日：2007-11-21

申请人： Hanns-Martin SCHMIDT ,  Ludger ALTROGGE ,  Dietmar LENZ ,  Gudula RIEMEN ,  Helmut BROSTERHUS ,  Elke LORBACH ,  Juliana HELFRICH ,  Katharina HEIN ,  Marion GREMSE ,  Tatjana MALES ,  Rainer CHRISTINE ,  Gregor SIEBENKOTTEN ,  Bodo ORTMANN ,  Tamara GRABECK ,  Andrea MULLER-HARTMANN

发明人： Hanns-Martin SCHMIDT ,  Ludger ALTROGGE ,  Dietmar LENZ ,  Gudula RIEMEN ,  Helmut BROSTERHUS ,  Elke LORBACH ,  Juliana HELFRICH ,  Katharina HEIN ,  Marion GREMSE ,  Tatjana MALES ,  Rainer CHRISTINE ,  Gregor SIEBENKOTTEN ,  Bodo ORTMANN ,  Tamara GRABECK ,  Andrea MULLER-HARTMANN

IPC分类号： C12N15/00 ,  C07K14/00

CPC分类号： C07K14/47 ,  A61K48/00 ,  C07K2319/035 ,  C07K2319/09 ,  C07K2319/10 ,  C07K2319/21 ,  C12N15/87

摘要： The present invention relates to a method for transfection of cells using at least one protein capable of forming nucleoprotein filaments, wherein the protein is initially modified with at least one functional component which influences one or more steps of the transfection, the nucleic acid to be transfected is then loaded with the modified protein, whereby the nucleic acid and the protein form a filament-like complex, and this complex is finally added to the cells to be transfected. The invention further relates to a transfection agent consisting of nucleoprotein filaments (NPF), with at least one nucleoprotein filament-forming protein being modified with at least one functional component for the transfection. Furthermore, the present invention relates to the use of the transfection agent according to the invention for producing a drug for gene therapeutic treatment of humans and animals. The present inventions also includes corresponding pharmaceutical preparations, especially for use in gene therapy as well as the use of such transfection agents as component in kits.

摘要翻译： 本发明涉及使用至少一种能够形成核蛋白长丝的蛋白质转染细胞的方法，其中蛋白质最初用至少一种影响转染一个或多个步骤的功能成分修饰，待转染的核酸 然后加载修饰的蛋白质，由此核酸和蛋白质形成丝状复合物，并将该复合物最终加入待转染的细胞中。 本发明还涉及由核蛋白丝（NPF）组成的转染剂，至少一种核蛋白长丝形成蛋白被至少一个用于转染的功能组分修饰。 此外，本发明涉及根据本发明的转染剂用于生产用于人和动物基因治疗的药物的用途。 本发明还包括相应的药物制剂，特别是用于基因治疗以及使用这样的转染剂作为试剂盒中的组分。

公开(公告)号：US08173416B2

公开(公告)日：2012-05-08

申请号：US10475840

申请日：2002-04-23

申请人： Herbert Müller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Ludger Altrogge ,  Meike Weigel ,  Rainer Christine ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Heike Wessendorf ,  Gregor Siebenkotten

发明人： Herbert Müller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Ludger Altrogge ,  Meike Weigel ,  Rainer Christine ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Heike Wessendorf ,  Gregor Siebenkotten

IPC分类号： C12M1/42 ,  C12M3/00 ,  F41B15/04 ,  H01T23/00

CPC分类号： A61N1/327 ,  A61N1/0412 ,  C12N15/87 ,  H03K3/57

摘要： The invention relates to a novel circuit arrangement for electrotransfection or electrofusion, which enables the transportation of DNA and/or other biologically active molecules to the nucleus of higher eukaryotic cells or the fusion of cells, independent of cell division and with reduced cell mortality.

摘要翻译： 本发明涉及一种用于电转移或电融合的新型电路装置，其能够将DNA和/或其他生物活性分子运输到高等真核细胞的细胞核或细胞融合，而与细胞分裂无关并具有降低的细胞死亡率。

公开(公告)号：US07999073B2

公开(公告)日：2011-08-16

申请号：US11944253

申请日：2007-11-21

申请人： Hanns-Martin Schmidt ,  Ludger Altrogge ,  Dietmar Lenz ,  Gudula Riemen ,  Helmut Brosterhus ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Katharina Hein ,  Marion Gremse ,  Tatjana Males ,  Rainer Christine ,  Gregor Siebenkotten ,  Bodo Ortmann ,  Tamara Grabek ,  Andrea Mueller-Hartmann

发明人： Hanns-Martin Schmidt ,  Ludger Altrogge ,  Dietmar Lenz ,  Gudula Riemen ,  Helmut Brosterhus ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Katharina Hein ,  Marion Gremse ,  Tatjana Males ,  Rainer Christine ,  Gregor Siebenkotten ,  Bodo Ortmann ,  Tamara Grabek ,  Andrea Mueller-Hartmann

IPC分类号： C07K14/00

CPC分类号： C07K14/47 ,  A61K48/00 ,  C07K2319/035 ,  C07K2319/09 ,  C07K2319/10 ,  C07K2319/21 ,  C12N15/87

摘要： The present invention relates to a method for transfection of cells using at least one protein capable of forming nucleoprotein filaments, wherein the protein is initially modified with at least one functional component which influences one or more steps of the transfection, the nucleic acid to be transfected is then loaded with the modified protein, whereby the nucleic acid and the protein form a filament-like complex, and this complex is finally added to the cells to be transfected. The invention further relates to a transfection agent consisting of nucleoprotein filaments (NPF), with at least one nucleoprotein filament-forming protein being modified with at least one functional component for the transfection. Furthermore, the present invention relates to the use of the transfection agent according to the invention for producing a drug for gene therapeutic treatment of humans and animals. The present inventions also includes corresponding pharmaceutical preparations, especially for use in gene therapy as well as the use of such transfection agents as component in kits.

摘要翻译： 本发明涉及使用至少一种能够形成核蛋白长丝的蛋白质转染细胞的方法，其中蛋白质最初用至少一种影响转染一个或多个步骤的功能成分修饰，待转染的核酸 然后加载修饰的蛋白质，由此核酸和蛋白质形成丝状复合物，并将该复合物最终加入待转染的细胞中。 本发明还涉及由核蛋白丝（NPF）组成的转染剂，至少一种核蛋白长丝形成蛋白被至少一个用于转染的功能组分修饰。 此外，本发明涉及根据本发明的转染剂用于生产用于人和动物基因治疗的药物的用途。 本发明还包括相应的药物制剂，特别是用于基因治疗以及使用这样的转染剂作为试剂盒中的组分。

公开(公告)号：US07332332B2

公开(公告)日：2008-02-19

申请号：US10475967

申请日：2002-04-23

申请人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Müller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterbus ,  Michael Nix

发明人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Müller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterbus ,  Michael Nix

IPC分类号： C12N5/02 ,  C12N15/87

CPC分类号： C12N15/87 ,  A61K38/00 ,  A61K48/00

摘要： The invention relates to a buffer solution for suspending animal or human cells and for dissolving biologically active molecules in order to introduce biologically active molecules into cells using an electric current. The inventive buffer solution has a buffering capacity of at least 20 mmol−1×pH−1 and an ionic strength of at least 200 mmol×1−1 during a change to the pH value from pH 7 to pH 8 and at a temperature of 25° C. The use of a buffer solution of this type allows biologically active molecules to be introduced into animal and human cells with a high degree of transfection efficiency and at the same time a low cell mortality. Different cell types, in particular dormant and actively dividing cells of low activity, can be successfully transfected in the buffer solution.

摘要翻译： 本发明涉及用于悬浮动物或人细胞并溶解生物活性分子以便使用电流将生物活性分子引入细胞的缓冲溶液。 本发明的缓冲溶液具有至少20mmol -1pp-1的缓冲能力，并且离子强度至少为200mmol / 在pH值从pH7到pH8改变到25℃的温度下。使用这种缓冲溶液使生物活性分子以高转染效率被引入动物和人细胞中 同时细胞死亡率低。 不同的细胞类型，特别是休眠和活跃分裂细胞的低活性，可以成功地转染到缓冲溶液中。

公开(公告)号：US20050064596A1

公开(公告)日：2005-03-24

申请号：US10475967

申请日：2002-04-23

申请人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Muller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterbus ,  Michael Nix

发明人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Muller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterbus ,  Michael Nix

IPC分类号： C12N15/09 ,  A61K35/12 ,  A61K38/00 ,  A61K47/00 ,  A61K48/00 ,  C12N13/00 ,  C12N15/87 ,  G01N33/50

CPC分类号： C12N15/87 ,  A61K38/00 ,  A61K48/00

摘要： The invention relates to a buffer solution for suspending animal or human cells and for dissolving biologically active molecules in order to introduce said biologically active molecules into the cells using an electric current and to a method for introducing biologically active molecules into animal or human cells using an electric current and a buffer solution. The inventive buffer solution has a buffering capacity of at least 20 mmol*I−1*pH−1 and an ionic strength of at least 200 mmol*I−1 during a change to the pH value from pH 7 to pH 8 and at a temperature of 25° C. The use of a buffer solution of this type in the corresponding method allows biologically active molecules to be introduced into animal and human cells with a high degree of transfection efficiency and at the same time a low cell mortality. Different cell types, in particular dormant and actively dividing cells of low activity, can be successfully transfected in said buffer solution.

摘要翻译： 本发明涉及一种用于悬浮动物或人细胞并用于溶解生物活性分子以便使用电流将所述生物活性分子引入细胞的缓冲溶液以及使用以下方法将生物活性分子引入动物或人细胞的方法： 电流和缓冲液。 本发明的缓冲溶液在pH值从pH7变化期间具有至少20mmol * I -1 * pH <-1的缓冲能力和至少200mmol * I -1的离子强度 至pH8，温度为25℃。在相应方法中使用这种类型的缓冲溶液使生物活性分子以高度的转染效率被引入动物和人类细胞，并且同时 细胞死亡率低。 可以在所述缓冲溶液中成功转染不同细胞类型，特别是低活性的休眠和活跃分化细胞。

公开(公告)号：US20110117654A1

公开(公告)日：2011-05-19

申请号：US13009024

申请日：2011-01-19

申请人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Mueller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterhaus ,  Michael Nix

发明人： Gudula Riemen ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Gregor Siebenkotten ,  Herbert Mueller-Hartmann ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Meike Weigel ,  Heike Wessendorf ,  Helmut Brosterhaus ,  Michael Nix

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N13/00

CPC分类号： C12N15/87 ,  A61K38/00 ,  A61K48/00

摘要： A method for introducing biologically active molecules into animal or human cells using an electric current includes suspending the cells and dissolving the biologically active molecules in a buffer solution including HEPES and at least 10 mmol×1−1 magnesium ions (Mg2+), the buffer solution having a buffer capacity of at least 20 mmol×1−1×pH−1 at a change in the pH from pH 7 to pH 8 and at a temperature of 25° C., and an ionic strength of at least 200 mmol×1−1. An electric voltage is applied to the suspension.

摘要翻译： 使用电流将生物活性分子引入动物或人细胞的方法包括悬浮细胞并将生物活性分子溶解在包括HEPES和至少10mmol×1-1的镁离子（Mg 2+）的缓冲溶液中，缓冲溶液 在pH7至pH8和25℃的温度下，缓冲容量至少为20mmol×1-1×pH-1，离子强度为至少200mmol×1 -1。 向悬架施加电压。

公开(公告)号：US07704727B2

公开(公告)日：2010-04-27

申请号：US10527958

申请日：2003-09-12

申请人： Gregor Siebenkotten ,  Herbert Müller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Günter Kraus

发明人： Gregor Siebenkotten ,  Herbert Müller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Günter Kraus

IPC分类号： C12M1/42 ,  C12N15/87

CPC分类号： C12M35/02 ,  C12N13/00

摘要： Disclosed is a device for processing biological material which at least comprises a chamber at least closable to the outside and having an inner space for receiving the biological material. The chamber comprises at least one electrode placed in contact with the inner space for generating an electric field. Also disclosed is a method for processing biological material. The biological material is introduced into the inner space above and the electrode can generate an electric field after said biological material is introduced by applying voltage to said electrode and a further electrode in contact with the inner space. The chamber comprises at least one inlet line having at least one opening arranged close to the electrode. The biological material is almost completely rinsed out of the inner space after the electric field is generated, via a solution guided via an inlet line of the chamber along at least one electrode.

摘要翻译： 公开了一种用于处理生物材料的装置，其至少包括至少可封闭到外部并且具有用于接收生物材料的内部空间的室。 该室包括至少一个与内部空间接触的电极，用于产生电场。 还公开了一种处理生物材料的方法。 将生物材料引入上述内部空间，并且通过向所述电极施加电压和与内部空间接触的另一电极而在引入所述生物材料之后，电极可以产生电场。 所述腔室包括至少一个入口管线，所述入口管线具有靠近所述电极设置的至少一个开口。 在通过沿着至少一个电极的腔室的入口管线引导的溶液后，生成电场后，生物材料几乎完全从内部空间中冲洗掉。

公开(公告)号：US20090253206A1

公开(公告)日：2009-10-08

申请号：US12440416

申请日：2007-09-13

申请人： Gregor Siebenkotten ,  Bodo Ortmann

发明人： Gregor Siebenkotten ,  Bodo Ortmann

IPC分类号： C12N15/87 ,  C07K2/00 ,  C07C57/00 ,  C07K7/00 ,  C07K14/00

CPC分类号： C12N15/87 ,  C07K2319/01 ,  C07K2319/02

摘要： The present invention relates to a transport agent for transporting nucleic acids into eukaryotic cells and a method for producing said agent. The invention further concerns methods for transporting nucleic acids into eukaryotic cells using the transport agent according to the invention. The present invention provides an alternative transport agent and a method which are effective to allow an efficient transport of nucleic acids into eukaryotic cells. The transport agent comprises a complex forming moiety that is capable of forming complexes with at least one nucleic acid molecule and condensing said nucleic acid molecule, and at least one nuclear localization moiety comprising at least one nuclear localization signal and having an approximately neutral net charge.

摘要翻译： 本发明涉及用于将核酸输送到真核细胞中的运输剂及其制备方法。 本发明还涉及使用根据本发明的转运剂将核酸转运到真核细胞中的方法。 本发明提供了可有效地将核酸有效转运到真核细胞中的替代转运剂和方法。 转运剂包含复合物形成部分，其能够与至少一个核酸分子形成复合物并冷凝所述核酸分子，以及至少一个包含至少一个核定位信号并且具有近似中性净电荷的核定位部分。

公开(公告)号：US20090023131A1

公开(公告)日：2009-01-22

申请号：US11836656

申请日：2007-08-09

申请人： Herbert Muller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Ludger Altrogge ,  Meike Weigel ,  Rainer Christine ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Heike Wessendorf ,  Gregor Siebenkotten

发明人： Herbert Muller-Hartmann ,  Gudula Riemen ,  Kirsten Rothmann-Cosic ,  Corinna Thiel ,  Ludger Altrogge ,  Meike Weigel ,  Rainer Christine ,  Elke Lorbach ,  Juliana Helfrich ,  Heike Wessendorf ,  Gregor Siebenkotten

IPC分类号： C12Q3/00

CPC分类号： A61N1/327 ,  A61N1/0412 ,  C12N15/87 ,  H03K3/57

摘要： The invention relates to a novel circuit arrangement for electrotransfection or electrofusion, which enables the transportation of DNA and/or other biologically active molecules to the nucleus of higher eukaryotic cells or the fusion of cells, independent of cell division and with reduced cell mortality.

摘要翻译： 本发明涉及一种用于电转移或电融合的新型电路装置，其能够将DNA和/或其他生物活性分子运输到高等真核细胞的细胞核或细胞融合，而与细胞分裂无关并具有降低的细胞死亡率。