公开(公告)号：US6146635A

公开(公告)日：2000-11-14

申请号：US930917

申请日：1997-09-16

申请人： Carlos Antonio Durate Cano ,  Enrique Gerardo Guillen Nieto ,  Anabel Alvarez Acosta ,  Luis Emilio Carpio Munoz ,  Diogenes Quintana Vazquez ,  Carmen Elena Gomez Rodriquez ,  Recardo de la Caridid Siva Rodriguez ,  Consuelo Nazabal Galvez ,  Maria De Jesus Leal Angulo ,  Alejandro Miguel Martin Dunn

发明人： Carlos Antonio Durate Cano ,  Enrique Gerardo Guillen Nieto ,  Anabel Alvarez Acosta ,  Luis Emilio Carpio Munoz ,  Diogenes Quintana Vazquez ,  Carmen Elena Gomez Rodriquez ,  Recardo de la Caridid Siva Rodriguez ,  Consuelo Nazabal Galvez ,  Maria De Jesus Leal Angulo ,  Alejandro Miguel Martin Dunn

IPC分类号： G01N33/569 ,  A61K39/00 ,  A61K39/095 ,  A61K39/395 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P31/12 ,  C07K1/22 ,  C07K14/16 ,  C07K14/22 ,  C07K16/00 ,  C07K16/12 ,  C07K19/00 ,  C12N1/21 ,  C12N15/02 ,  C12N15/31 ,  C12N15/48 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12P21/08 ,  C12R1/19 ,  A61K39/02 ,  A61K39/21

CPC分类号： C07K14/005 ,  C07K14/22 ,  C07K16/1217 ,  C12N15/62 ,  A61K39/00 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/40 ,  C07K2319/75 ,  C12N2740/16122 ,  Y10S530/82 ,  Y10S530/825

摘要： The present invention relates to biotechnology and genetic engineering, particularly the expression of proteins of viral origin in microorganisms through their fusion, by applying the recombinant DNA technology, to bacterial peptides. The present invention provides an efficient process for the expression in Escherichia coli of heterologous proteins as fusion polypeptides with a view to obtaining them with a high degree of purity, in commercially useful amounts, and in an appropriate form for their inclusion in vaccine preparations intended to human use. To this effect, what is essentially used is a stabilizing sequence derived from the first 47 amino acids of the antigen P64k of Neisseria meningitidis B:4:P1.15. In particular, use is made of a recombinant plasmid containing said sequence, under the control of the tryptophane promotor of E. coli and of the terminator of the transcription of the phage T4, including restriction sites which provide for the cloning in phase of DNA fragments coding for polypeptides of interest. The process of the invention is applicable to the pharmaceutical industry, for the development of diagnostic systems, vaccine preparations, and in any situation where it is required to obtain high amounts of heterologous proteins as fusion polypeptides in E. coli.

摘要翻译： PCT No.PCT / CU97 / 00001 Sec。 371日期：1997年9月16日 102（e）1997年9月16日PCT PCT 1997年1月17日PCT公布。 第WO97 / 26359号公报 日期1997年7月24日本发明涉及生物技术和遗传工程，特别是通过将重组DNA技术应用于细菌肽，通过其融合将微生物中的病毒来源的蛋白质的表达。 本发明提供了在大肠杆菌中将异源蛋白质作为融合多肽表达的有效方法，以便以商业上有用的量以高度纯度获得它们，并以适合的形式包含在旨在用于 人用。 为此，基本上使用的是来自脑膜炎奈瑟氏球菌B：4：P1.15的抗原P64k的前47个氨基酸的稳定化序列。 特别地，使用包含所述序列的重组质粒，其在大肠杆菌的色氨酸启动子和噬菌体T4的转录终止子的控制下，包括提供DNA片段相克隆的限制性位点 编码感兴趣的多肽。 本发明的方法适用于制药工业，用于开发诊断系统，疫苗制剂，并且在需要在大肠杆菌中获得大量异源蛋白质作为融合多肽的任何情况下。

公开(公告)号：US06921809B1

公开(公告)日：2005-07-26

申请号：US09612925

申请日：2000-07-10

申请人： Carlos Antonio Durate Cano ,  Enrique Gerardo Guillen Nieto ,  Anabel Alvarez Acosta ,  Luis Emilio Carpio Munoz ,  Diogenes Quintana Vazquez ,  Carmen Elena Gomez Rodriquez ,  Recardo De La Caridid Siva Rodriquez ,  Consuelo Nazabal Galvez ,  Maria De Jesus Leal Angulo ,  Alejandro Miguel Martin Dunn

发明人： Carlos Antonio Durate Cano ,  Enrique Gerardo Guillen Nieto ,  Anabel Alvarez Acosta ,  Luis Emilio Carpio Munoz ,  Diogenes Quintana Vazquez ,  Carmen Elena Gomez Rodriquez ,  Recardo De La Caridid Siva Rodriquez ,  Consuelo Nazabal Galvez ,  Maria De Jesus Leal Angulo ,  Alejandro Miguel Martin Dunn

IPC分类号： G01N33/569 ,  A61K39/00 ,  A61K39/095 ,  A61K39/395 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P31/12 ,  C07K1/22 ,  C07K14/16 ,  C07K14/22 ,  C07K16/00 ,  C07K16/12 ,  C07K19/00 ,  C12N1/21 ,  C12N15/02 ,  C12N15/31 ,  C12N15/48 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12P21/08 ,  C12R1/19

CPC分类号： C07K14/005 ,  A61K39/00 ,  C07K14/22 ,  C07K16/1217 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/40 ,  C07K2319/75 ,  C12N15/62 ,  C12N2740/16122 ,  Y10S530/82 ,  Y10S530/825

摘要： The present invention related to biotechnology and genetic engineering, particularly the expression of proteins of viral origin in microorganisms through their fusion by applying recombinant DNA technology to bacterial peptides. The present invention provides an effcient process for the expression in Escherichia coli of heterlogous proteins as fusion peptides with a view to obtaining them with a high degree of purity, in commercially useful amounts, and in an appropriate form for their inclusion in vaccine preparations. What is essentially used is a stabilizing sequence derived from the first 47 amino acids of the antigen P64k of Neisseria meningitides B:4:P1.15. In particular, use is made of a recombinant plasmid containing said sequence, under the control of the tryptophane promoter of E. coli and of the terminator of the transcription of the phage T4, including restrictions sites which provide for the cloning in phase of DNA fragments coding for polypeptides of interest.

摘要翻译： 本发明涉及生物技术和遗传工程，特别是通过将重组DNA技术应用于细菌肽，通过其融合在微生物中表达病毒来源的蛋白质。 本发明提供了一种在大肠杆菌中将异源蛋白质作为融合肽表达的有效方法，以便以商业上有用的量获得高纯度的纯度，并以适合的形式包含在疫苗制剂中。 基本上使用的是来自脑膜炎奈瑟菌B：4：P1.15的抗原P64k的前47个氨基酸的稳定序列。 特别地，使用含有所述序列的重组质粒，其在大肠杆菌的色氨酸启动子和噬菌体T4的转录终止子的控制下，包括限制性位点，其提供DNA片段的同时性克隆 编码感兴趣的多肽。