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公开(公告)号：CN111748515A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201910248819.2
申请日：2019-03-29
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一株Vero克隆细胞株及其应用，用于高效生产猪流行性腹泻病毒。所述的细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO：16294，本发明采用有限稀释法进行Vero单细胞克隆，获得一株单克隆细胞株命名为2B8，该克隆细胞株比母本细胞生长速度快，能够很好繁殖猪流行性腹泻病毒，显著提高病毒在细胞上的复制水平，相比母本细胞，利用该细胞株能够获得高效价的病毒液，在疫苗生产中应用价值高。
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公开(公告)号：CN109251897A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811031496.3
申请日：2018-09-05
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种猪圆环病毒3型毒株PCV3-LY及其应用。该病毒是国内外首次通过感染性克隆技术拯救出的猪圆环病毒3型,接种贴壁生长的单层猪肾细胞PK15细胞培养后，进行D-氨基葡萄糖处理而后继续培养，收获细胞培养物作为下一轮传代的接种物，依次连续传代获得一株细胞培养适应毒株。在适应过程中，传至15代后可以观察到明显的细胞病变。经过间接免疫荧光证实该细胞能够支持猪圆环病毒3型的有效复制。病毒的滴度lgTCID50＝106.53/mL。动物回归试验发现5头28日龄猪攻毒后可以致死两头，该病毒对仔猪致病力较强。这是国内外首次通过感染性克隆技术拯救出的猪圆环病毒3型，为进一步研究PCV3的致病机制以及开展有效防控该病的疫苗研究提供直接支持。
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公开(公告)号：CN102994643B
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201210580405.8
申请日：2012-12-27
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种检测鸡FMO3基因A1034T突变的引物和探针，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1~4所示。利用这些引物和探针，采用实时荧光定量PCR技术，能够快速灵敏地检测鸡FMO3基因A1034T突变位点即鱼腥味敏感基因的基因型，从而准确判定鸡只是否携带鱼腥味敏感基因位点。与传统的检测技术相比具有诸多优点，包括操作简单、检测速度快，只需要一次PCR反应即可判型，自动化程度高，高通量，灵敏度高，而且节约了时间，提高了检测效率。反应全过程在封闭的管内进行，减少了交叉污染。
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公开(公告)号：CN103739717A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201410018219.4
申请日：2014-01-15
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种抗猪2型圆环病毒病的重组亚单位疫苗，该疫苗是具有较高免疫原性的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白（flagellin）和猪2型圆环病毒Cap蛋白的融合蛋白。本发明通过将人工编码的Flagellin-ORF2、Flagellin-ΔORF2基因融合克隆进pFastBac表达载体，同ORF2、ΔORF2重组克隆（pFastBac载体）一起转染Sf9细胞，利用杆状病毒系统表达四个融合蛋白，并通过间接免疫荧光（IFA）和Western-blot进行鉴定。通过上述系统获得重组杆状病毒的周期短，且表达的flagellin+Cap融合蛋白具有较高的免疫保护力。
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公开(公告)号：CN116444681A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310186820.3
申请日：2023-02-22
申请人： 北京市农林科学院
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N15/64
摘要： 本发明提供了一种高效融合表达猪圆环病毒3型Cap重组鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的方法与应用。本发明使用杆状病毒昆虫表达系统对PCV3Cap和鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白进行高效融合表达，鞭毛蛋白作为免疫佐剂增强Cap的免疫原性。通过对Cap基因进行最适密码子优化并与鞭毛蛋白进行融合后克隆到pFastBac I载体。通过Bac‑to‑Bac系统，筛选获得重组Cap‑Flagellin杆状病毒，经鉴定和免疫小鼠评价其免疫原性，结果显示表达的Cap‑Flagellin重组蛋白具有良好的生物学活性，免疫小鼠发现具有良好的免疫原性，且鞭毛蛋白作为免疫佐剂可以增强Cap的免疫原性。本发明为PCV3亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113046472A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201911377673.8
申请日：2019-12-27
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了用于检测猪圆环病毒1型、2型和3型的三重PCR引物试剂盒。利用本发明提供的三重PCR检测试剂盒可在2小时内对三种病原同时进行检测，所使用的材料价格便宜，所使用的仪器在大多数畜牧场均有配备，并且该方法特异性强，敏感性高，非常适用于临床对猪圆环三种病原的诊断、流行病学调查以及实验室对该三种病原的初步筛查。
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公开(公告)号：CN109867727B
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN201910133195.X
申请日：2019-02-22
申请人： 北京市农林科学院
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/866 , C12N15/66 , A61K39/39 , A61K39/235 , A61P31/20
摘要： 本发明提供了一种flagellin‑fiber2融合蛋白、其制备方法和应用，所述融合蛋白具有较高免疫保护性的禽4型腺病毒fiber2蛋白和鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的融合蛋白。制备方法是通过将人工编码的flagellin‑fiber2基因融合克隆进pFastBac‑HA表达载体，经基因转座形成重组的Bacmid，随后转染入Sf9昆虫细胞，利用杆状病毒系统表达这个融合蛋白，并通过间接免疫荧光IFA和Western blot进行鉴定。通过上述系统获得重组杆状病毒的周期短，将其flagellin‑fiber2融合蛋白免疫SPF鸡，结果显示杆状病毒系统表达的flagellin‑fiber2融合蛋白具有较高的免疫保护力。
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公开(公告)号：CN105296439B
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201510700997.6
申请日：2015-10-26
申请人： 北京市农林科学院
IPC分类号： C12N7/00 , A61K39/155 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明提供一种鸡C型禽偏肺病毒毒株aMPV/C‑JCX及其应用，所述病毒毒株的保藏号为CGMCC No.10900。该病毒是收集国内首次分离到的鸡C型禽偏肺病毒感染病鸡组织研磨液，接种贴壁生长的单层非洲绿猴肾细胞Vero，细胞培养物作为下一轮传代的接种物，依次连续传代获得一株细胞培养适应毒株。在适应过程中，早代次培养周期为7‑9天，传至60代后缩短至3‑5天可以观察到明显的细胞病变。经过透射电镜、间接免疫荧光和蛋白质印迹法证实该细胞能够有效的培养C型禽偏肺病毒。病毒的滴度lgTCID50＝10‑4.2/0.1ml。经过SPF鸡证实该病毒毒力较弱，具有良好的免疫原性和保护性，该细胞适应毒是研究生产病毒疫苗的理想候选毒株。
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公开(公告)号：CN103739717B
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201410018219.4
申请日：2014-01-15
申请人： 北京市农林科学院
摘要： 本发明提供了一种抗猪2型圆环病毒病的重组亚单位疫苗，该疫苗是具有较高免疫原性的鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白（flagellin）和猪2型圆环病毒Cap蛋白的融合蛋白。本发明通过将人工编码的Flagellin-ORF2、Flagellin-ΔORF2基因融合克隆进pFastBac表达载体，同ORF2、ΔORF2重组克隆（pFastBac载体）一起转染Sf9细胞，利用杆状病毒系统表达四个融合蛋白，并通过间接免疫荧光（IFA）和Western-blot进行鉴定。通过上述系统获得重组杆状病毒的周期短，且表达的flagellin+Cap融合蛋白具有较高的免疫保护力。
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公开(公告)号：CN107904326A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711318180.8
申请日：2017-12-12
申请人： 北京市农林科学院
CPC分类号： C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2600/166 , C12Q2545/113 , C12Q2521/107
摘要： 本发明属于生物技术领域，具体公开了一组用于RT-PCR快速分型检测禽偏肺病毒亚型的核酸，其特征在于，包括用于检测禽偏肺病毒A型的引物对1、用于检测禽偏肺病毒B型的引物对2、用于检测禽偏肺病毒C型的引物对3和用于检测禽偏肺病毒D型的引物对4；其中，所述引物对1的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，所述引物对2的序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示，所述引物对3的序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示，所述引物对4的序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。上述核酸可用于分别检测禽偏肺病毒A、B、C、D四种亚型，其所用引物的特异性强，各引物对之间没有交叉反应，与其它病毒也没有交叉反应。
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