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公开(公告)号：CN109266635A
公开(公告)日：2019-01-25
申请号：CN201811384656.2
申请日：2018-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明在天然L-天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L-天冬酰胺酶分子结构，L-天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。
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公开(公告)号：CN108559735A
公开(公告)日：2018-09-21
申请号：CN201810443305.8
申请日：2018-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供一种亮氨酸脱氢酶突变体的构建及其应用，属于基因工程领域。本发明提供了SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.8三个亮氨酸脱氢酶突变体，以及上述突变体或产生突变体的基因工程菌在氨化还原α-酮酸制备光学纯手性L-α-氨基酸中的应用。本发明在于：所述亮氨酸脱氢酶突变体或含有突变体基因工程菌氨化还原制备L-α-氨基酸具有高催化活性及稳定性，能够合成高光学纯度L-α-氨基酸(ee>99％)，如突变体酶催化L-苯甘氨酸的转化速率提高了2.62倍，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN108103038A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201711352466.8
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0016 , C12N9/0008 , C12P13/04 , C12Y102/01002 , C12Y104/01009
Abstract: 本发明公开了一种高效合成L‑苯甘氨酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明首先实现了来源于Bacillus cereus的亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达，并通过定点突变得到还原特性显著提高的突变体N71S，并将该突变酶与甲酸脱氢酶突变体在大肠杆菌中共表达，形成胞内原位辅因子NADH循环体系，通过启动子和RBS序列优化控制甲酸脱氢酶突变体的表达量，成功构建了重组大肠杆菌单细胞工厂，并利用单细胞工厂进行全细胞转化制备L‑苯苷氨酸，该方法转化过程简单快捷，成本低廉，没有副产物，利于分离纯化，在5L发酵罐中转化4h，L‑苯甘氨酸产量可达105.7g/l，转化率为93.3％，L‑苯苷氨酸的时空产率为26.3g/L·h，为L‑苯苷氨酸的工业化生产提供了一种实际有效的策略。
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公开(公告)号：CN107988176A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711353989.4
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活和稳定性提高的酪氨酸酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将187位氨基酸由缬氨酸突变成苏氨酸得到的。本发明的突变体酶的纯酶比酶活较突变前提高了38％，60℃的半衰期(t1/2)较突变期提高了2.9倍。本发明表明10位氨基酸残基突变成半胱氨酸与天然酪氨酸酶的30位半胱氨酸残基形成正确的二硫键从而提高了酶的稳定性和催化效率，加强了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN107881159A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711352455.X
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/06 , C12N15/53 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P7/40 , C12P13/04 , C12P35/02 , C12Q1/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高D-氨基酸氧化酶可溶性异源表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，在甲硫氨酸后面添加三个额外的组氨酸和一个甘氨酸。本发明得到的突变体获得的体积酶活比野生型提高3.4倍。同时突变体经5L发酵罐发酵最终获得体积酶活为86.8U/mL，体积产率为4.52kU·L-1·h-1，为圆冬红酵母在大肠杆菌中表达获得的最高酶活，加强了该酶的工业应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107828710A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711328979.5
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种无标记多位点整合表达谷氨酰胺酶菌株及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的是将谷氨酰胺酶基因在16S rDNA、nprB、nprE、aprE、spo0A、epr、bpr 7个位点整合表达，最终得到了多位点无抗性整合表达谷氨酰胺酶菌株BSM7。本发明得到的BSM1和BSM7，摇瓶发酵24h后，酶活分别为40.5U/mL和85.6U/mL，突变酶活提高了111.4％。BSM7菌株分批补料发酵，在32h左右达到最高酶活，为375.6U/mL。通过遗传稳定性分析发现，BSM7的遗传稳定性远远大于改基因的质粒表达的稳定性。该发明提高了谷氨酰胺酶酶在食品工业的应用潜力。
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公开(公告)号：CN105418461B
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201510819440.4
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
IPC: C07C277/08 , C07C279/14
Abstract: 本发明提供了一种L‑精氨酸的提取工艺，所述L‑精氨酸是通过微生物发酵制得，包括以下步骤：1)L‑精氨酸发酵液通过陶瓷膜过滤除菌，再经超滤膜过滤除蛋白；2)膜过滤液进入连续离子交换系统，经阳离子交换树脂吸附，氨水洗脱，得到的L‑精氨酸的洗脱液；3)经连续离子交换后经驱氨，脱色，浓缩结晶，离心分离，烘干后得到L‑精氨酸成品，L‑精氨酸总收率为80％以上，产品纯度95％以上。
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公开(公告)号：CN106566816A
公开(公告)日：2017-04-19
申请号：CN201611010784.1
申请日：2016-11-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/75 , C12N9/0073 , C12N2800/101 , C12Y114/13054
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第366位缬氨酸突变成丝氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为2.15U/mL，突变酶活提高了23％，底物亲和力较原始酶提高67％，催化效率提高43％，同时比酶活提高176％。本发明表明366位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN106399216A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201611006643.2
申请日：2016-11-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成α-氨基丁酸的单细胞工厂及其构建与应用，属于微生物技术领域。本发明将L-苏氨酸脱氨酶、L-氨基酸脱氢酶及提供辅因子NADH循环的脱氢酶基因串联表达构建重组的大肠杆菌单细胞工厂用于α-氨基丁酸高效合成，通过rbs序列优化控制L-苏氨酸脱氨酶的表达量，解决中间产物酮丁酸的快速积累而抑制转化的问题，同时通过启动子及rbs序列优化控制提供辅因子NADH循环的脱氢酶表达量，增强NADH再生速率最终增加产量。利用单细胞工厂进行全细胞转化可减少物质进出障碍加快转化速率，促进辅因子胞内循环而无需外源添加，成本低廉。在20h内，5L发酵罐中重组大肠杆菌单细胞工厂产量为204g/L，时空产率10.2g/L·h，为其工业化生产提供实际有效策略。
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公开(公告)号：CN106047829A
公开(公告)日：2016-10-26
申请号：CN201610453958.5
申请日：2016-06-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种新型来源的过氧化氢酶及其重组工程菌的构建。本发明在于：首次根据短小芽孢杆菌的过氧化氢酶基因设计引物并构建了重组表达载体。将载体转化至基因工程菌大肠杆菌及枯草芽孢杆菌进行异源表达。利用发酵培养基对重组工程菌进行5L发酵罐发酵培养，其中重组大肠杆菌的过氧化氢酶主要在胞内表达，酶活为6645U/mL，重组B.subtilis 168的过氧化氢酶总酶活达到23263U/mL，胞外酶活为15368U/mL，而在B.subtilis WB600的过氧化氢酶总酶活高达26635U/mL，胞外酶活为20128U/mL，利用B.subtilis WB600为宿主更有利于胞外合成过氧化氢酶，具有重要的工业应用价值。这是目前报道的利用微生物生产过氧化氢酶的最高产量，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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