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公开(公告)号：CN104480137A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410748908.0
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株产酪氨酸酶重组钝齿棒杆菌的构建及其在黑色素生产中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过本实验室前期筛选得到的被命名为Streptomyces kathirae SC-1的菌株，利用分子技术克隆了以来自Streptomyces kathirae SC-1的酪氨酸酶基因(melC1C2)，构建重组表达载体pXMJ19-melC1C2，并将其电击转化到C.crenatum SYPA5-5，成功构建了基因工程菌C.crenatum SYPA5-5/pXMJ19-melC1C2。对构建的基因工程菌进行酶活测定，发现重组菌的酶活为61.5U/ml，而原始菌株C.crenatum SYPA5-5没有酶活。以L-酪氨酸为底物进行全细胞转化，黑色素产量为3.49g/L。本发明为首次将酪氨酸酶克隆到重组钝齿棒杆菌并用于黑色素的生产。
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公开(公告)号：CN104031934A
公开(公告)日：2014-09-10
申请号：CN201410249910.3
申请日：2014-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5是通过传统诱变育种手段获得的高产精氨酸菌株，该菌株具有独立知识产权。本专利以SYPA5-5基因组DNA为模板，扩增得到编码磷酸果糖激酶的基因pfk和丙酮酸激酶的基因pyk，将两者串联到表达载体pDXW-10上，电击转化到C.crenatum SYPA5-5中，构建得到基因工程菌SYPA5-5/pDXW-10-pfk-pyk。该工程菌中磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶同时得到加强表达，提高了EMP途径代谢强度，增加了葡萄糖消耗，工程菌在5L发酵罐发酵96h精氨酸产量为48.7g·L-1，比原始菌提高了27.5％。这是首次在钝齿棒杆菌中通过串联加强表达磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶提高精氨酸的发酵产量。
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公开(公告)号：CN103014075B
公开(公告)日：2014-07-16
申请号：CN201210360637.2
申请日：2012-09-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了利用一株环境安全菌株Bacillus subtilis CTCC M2009200发酵生物柴油副产物粗甘油生产2，3-丁二醇的方法，属于生物工程中发酵技术领域。该方法主要包括种子培养和发酵培养。具体的说，将种子液按4％接种量接种于发酵培养基中，在37℃，空气流量为120m3/h·m3培养基，搅拌转速为350r/min条件下进行发酵培养，当发酵液中甘油浓度低于15g/L时，流加粗甘油补料液，使培养液中甘油的浓度维持在0-20g/L，当甘油消耗速率低于1g/l·h时，即刻停止发酵，发酵液即为含有2，3-丁二醇液体。本发明为生物柴油副产物粗甘油进行工业化深度开发提供了基础。
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公开(公告)号：CN101928736A
公开(公告)日：2010-12-29
申请号：CN201010167007.4
申请日：2010-05-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12P13/00 , C07C229/08 , C07C227/40
Abstract: 本发明公开了一种γ-氨基丁酸的分离纯化工艺，它有效解决了生物法制备γ-氨基丁酸由于发酵液成分复杂而导致分离纯化步骤繁冗，工业化成本高的问题。本发明通过采用生物转化法减少转化液中的杂质，从而简化分离工艺，再对转化液进行简单的脱色，得到高纯度，高回收率的γ-氨基丁酸。本发明方法简单，产品回收率高，适合较大规模的工业化生产。
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公开(公告)号：CN101838672A
公开(公告)日：2010-09-22
申请号：CN201010167058.7
申请日：2010-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及固定化植物乳杆菌生产γ-氨基丁酸的方法，以来源广泛的海藻酸钠为固定化原料，选用的菌株为食品安全的植物乳杆菌，克服了一般固定化制备γ-氨基丁酸为有害的大肠杆菌。与固定化酶相比，节省了由于酶的分离提取和纯化而产生的大量成本。固定化细胞酶活力强，转化过程简单，转化液中无复杂成分，简化了GABA的分离纯化过程，对开发γ-氨基丁酸的工业化生产具有积极意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118702823A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202410884241.0
申请日：2024-07-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了核酸编辑工具及其应用,属于基因工程和生物诱变技术领域。本发明基于RNA聚合酶在转录过程中解旋dsDNA，将胞苷脱氨酶pmCDA1、尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)逐步与RNA聚合酶融合，构建高效诱变质粒，将pmCDA1、UGI定位在瞬时ssDNA周围，实现C→T碱基转换，最终使谷氨酸棒杆菌基因组突变率提高3157.38倍。本发明构建的高效诱变质粒成功用于筛选耐受氧化应激的谷氨酸棒杆菌突变株，也对筛选其他抗压力胁迫突变体具有重要指导意义。由于RNA聚合酶的高度保守性，这种方法很容易应用在其他谷氨酸棒杆菌亚种或其他微生物中。
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公开(公告)号：CN117417911A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202311139557.9
申请日：2023-09-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用全细胞转化高效生产苯丙酮酸的方法，属于分子生物技术与酶工程技术领域。本发明通过对pmyLAAD进行蛋白质改造，验证得到突变体pmyLAADT79A/E119A/E314A/S386A/E391A在提高酶活的同时提高苯丙酮酸产量。本发明利用突变体pmyLAADT79A/E119A/E314A/S386A/E391A在以自来水为溶剂的催化体系中，苯丙酮酸的产量可达到42.72g/L，转化率>80％。本发明提供的突变体和全细胞催化剂在提高底物利用率的同时，降低了产物分离纯化的难度与成本，有效缩短产品制备时间的并降低成本，加快了全细胞转化法生产苯丙酮酸的工业化进程。
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公开(公告)号：CN117327672A
公开(公告)日：2024-01-02
申请号：CN202311142787.0
申请日：2023-09-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用全细胞转化高效生产3‑甲基‑2‑氧代戊酸的方法，属于分子生物技术与酶工程技术领域。本发明的改造方法通过pmyLAAD的蛋白质改造，通过分析pmyLAAD产物结合位点周围柔性Loop环结构，并设计最佳突变体，克服了之前野生型酶催化效率低的问题，并通过实验验证。最后，对转化体系的催化剂浓度、缓冲液种类、pH和温度行了优化。最终得到最佳突变体pmyLAAD在最优条件下，48h时3‑甲基‑2‑氧代戊酸的产量可达到86.62g/L，转化率>85％。本发明的方法可以大大降低成本，加快了全细胞转化催化生产3‑甲基‑2‑氧代戊酸的工业化进程。
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公开(公告)号：CN117264917A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202311135974.6
申请日：2023-09-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用微生物高效制备酮蛋氨酸的方法，属于分子生物技术与酶工程技术领域。本发明的改造方法通过phLAAD的蛋白质改造，通过分析phLAAD产物结合位点周围柔性Loop环结构，突变得到酶活提高至0.564±0.009U/mL，摇瓶发酵α‑酮蛋氨酸产量达到71.08±2.67g/L的突变体I60V/K104R/E243A/A337S，克服了之前野生型酶催化效率低的问题证。本发明对转化体系的催化剂浓度、缓冲液种类、pH和温度行了优化，实现了发酵48h时酮蛋氨酸的产量达到93.15g/L，转化率>90％。本发明的方法可以大大降低成本，加快了酶转化法生产酮蛋氨酸的工业化进程。
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