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公开(公告)号：CN109628476B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910120166.X
申请日：2019-02-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用全细胞转化生产4‑羟基异亮氨酸的方法，属于基因工程技术领域。本发明提供了一段可用于编码L‑异亮氨酸羟化酶的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，将此基因在枯草芽孢杆菌中进行表达，可使枯草芽孢杆菌能够高效合成比酶活高且4‑羟基异亮氨酸转化率高的L‑异亮氨酸羟化酶；将本发明的枯草芽孢杆菌工程菌培养12～24h，即可使粗酶液中的L‑异亮氨酸羟化酶的酶活高达171.67U/mL；利用本发明的的枯草芽孢杆菌工程菌生产得到的L‑异亮氨酸羟化酶比酶活和4‑羟基异亮氨酸转化率均较高，其中，比酶活可达437.6U/mg，4‑羟基异亮氨酸转化率可达99.87％。
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公开(公告)号：CN112111468A
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN202011006299.3
申请日：2020-09-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种γ‑谷氨酰胺转肽酶突变体及其应用，属于基因工程领域；本发明在天然γ‑谷氨酰胺转肽酶的基础上，通过定点突变生物技术改造γ‑谷氨酰胺转肽酶分子结构，本发明所提供的突变体T401P、T422S，其转肽酶活较原始菌株分别提高了32.3％、41.8％；比酶活分别提高了近4.5倍、5.1倍，本发明表明401位点及422位点残基对于GGT催化苦味氨基酸具有重要影响，可用于改善含苦味氨基酸产品的口感与品质，这对于γ‑谷氨酰胺转肽酶在医药和食品行业的应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN111778225A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010729811.0
申请日：2020-07-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种天冬氨酸激酶突变体及其在生产L-苏氨酸中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种可高产L-苏氨酸的重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum ATCC 13032/pET21a(+)-lysCr-asdA，此重组谷氨酸棒杆菌表达编码天冬氨酸激酶突变体G359D的基因以及编码天冬氨酸半醛脱氢酶的基因；将此重组谷氨酸棒杆菌接种至发酵罐中发酵60h，即可使发酵液中L-苏氨酸的产量达62.8g/L、糖酸转化率达到38％，较出发菌株谷氨酸棒杆菌ATCC 13032分别提高了29.5％和33.9％。
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公开(公告)号：CN107881159B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201711352455.X
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/06 , C12N15/53 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P7/40 , C12P13/04 , C12P35/02 , C12Q1/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种提高D‑氨基酸氧化酶可溶性异源表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，在甲硫氨酸后面添加三个额外的组氨酸和一个甘氨酸。本发明得到的突变体获得的体积酶活比野生型提高3.4倍。同时突变体经5L发酵罐发酵最终获得体积酶活为86.8U/mL，体积产率为4.52kU·L‑1·h‑1，为圆冬红酵母在大肠杆菌中表达获得的最高酶活，加强了该酶的工业应用潜力。
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公开(公告)号：CN107828768B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201711328978.0
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/82 , C12N15/55 , C12N1/21 , C12N15/75 , A61K38/50 , A61P35/02 , A61P35/00 , A23L5/20 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程、酶工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的核苷酸的基础上，将其编码的第298位赖氨酸突变成亮氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白，得到的突变体最适温度从95℃降低到85℃，最适pH从8降低到7，Km值从6.5降低到4.9，比酶活突变前后无变化。本发明表明298位赖氨酸残基对酶底物亲和性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111500566A
公开(公告)日：2020-08-07
申请号：CN202010337983.3
申请日：2019-01-28
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/90 , C12N15/61 , C12N15/77 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/24 , C12P19/12 , C12R1/15 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种海藻糖合成酶突变体及其制备方法和应用，属于酶工程技术领域。本发明海藻糖合成酶的酶活较高，将携带本发明海藻糖合成酶的大肠杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达35.2U/mg，将携带本发明海藻糖合成酶的谷氨酸棒杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达33.5U/mg；本发明海藻糖合成酶突变体的比酶活与海藻糖转化率均较野生型海藻糖合成酶有了较为明显的提高，其中，海藻糖合成酶突变体K246A的比酶活较野生型酶提高了1.43倍，海藻糖转化率较野生型酶提高了约15％。
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公开(公告)号：CN108103049B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201711354028.5
申请日：2017-12-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种嗜热L‑天冬酰胺酶突变体及其筛选和发酵方法，属于基因工程、酶工程和发酵工程领域。在枯草芽孢杆菌168中，以嗜热菌Pyrococcus yayanosii CH1来源的L‑天冬酰胺酶编码基因作为模板，以易错PCR技术构建突变文库，并通过“同步细胞破碎和酶活测定”的高通量筛选方法，筛选出比酶活提高的突变株。分析正突变株所包含的突变残基，构建比酶活得到提高的复合突变株S17G/A90S/R156S/K272A，其比酶活达到3108U/mg。利用强启动子P43及RBS优化的手段，提高复合突变株在枯草芽孢杆菌168中的表达量。最后通过培养基优化和pH补料偶联策略,将含L‑天冬酰胺酶复合突变株基因的枯草芽孢杆菌168在5L发酵罐中产酶发酵，L‑天冬酰胺酶酶活产量达到到6453±127U/mL。
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公开(公告)号：CN107828754B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201711324140.4
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的γ‑谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第413位氨基酸由苏氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，γ‑谷氨酰转肽酶突变体酶的转肽反应活力较突变前提高12％，水解反应活力降低了50％。本发明表明413位氨基酸残基对γ‑谷氨酰转肽酶的转肽反应活力有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。本发明所得的γ‑谷氨酰转肽酶突变体可用于制备L‑茶氨酸。
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公开(公告)号：CN111394291A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010227468.X
申请日：2020-03-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组谷氨酸棒杆菌发酵生产L-谷氨酸的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种可低产L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-胱氨酸和L-甲硫氨酸等副产物的重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum G01/pXMJ19-cg2115，将此菌株接种至5-L发酵罐中发酵48h所获得的发酵液中L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-胱氨酸和L-甲硫氨酸的含量分别仅有0.15g/L、0.185g/L、0.369g/L、0.02g/L和0.277g/L，分别较野生型谷氨酸棒杆菌G01降低了98.1％、96.1％、86.1％、99.4％和91.4％。
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公开(公告)号：CN108060145B
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201711324120.7
申请日：2017-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的2,3‑丁二醇脱氢酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.2所示的氨基酸的基础上，将第52位脯氨酸突变成赖氨酸。本发明得到的突变体酶活力比突变前提高了68％，加强了该酶的工业应用潜力。
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