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公开(公告)号：CN106119272B
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201610574812.6
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种将葡萄糖脱氢酶与L‑亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中单独和共表达，利用重组大肠杆菌酶法和全细胞法联产L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸盐的方法。本发明在于：将葡萄糖脱氢酶基因和L‑亮氨酸脱氢酶基因构建重组单独和共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。利用重组菌酶法和全细胞法转化可以促进辅因子在转化体系中的循环，仅需添加少量外源辅因子或不添加外源辅因子，利用该辅因子循环再生系统可以利用底物苯甲酰甲酸及葡萄糖联产高附加值的L‑苯苷氨酸和葡萄糖酸，该转化过程简单快捷，成本低廉。在5L发酵罐中转化2‑4h，该方法所得的L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸产量分别可达58.8g/L及75.6g/L，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN110499301A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910807954.6
申请日：2019-08-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体，属于基因工程技术领域。本发明通过对SEQ ID NO.2的内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶进行单点/双位点突变，并在大肠杆菌中成功表达并纯化出突变体酶D94A、W123K、D94A/W123K、W148K，通过酶活测定，发现所述三种内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶突变体具有相对于野生型较高的催化活性，如突变体酶DAPDH-D94A、DAPDH-W123K、DAPDH-D94A/W123K催化苯丙酮酸的效率分别提高了3.5、1.5、1.3倍，成功提高了关键酶的酶活。
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公开(公告)号：CN106047829B
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201610453958.5
申请日：2016-06-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明是一种新型来源的过氧化氢酶及其重组工程菌的构建。本发明在于：首次根据短小芽孢杆菌的过氧化氢酶基因设计引物并构建了重组表达载体。将载体转化至基因工程菌大肠杆菌及枯草芽孢杆菌进行异源表达。利用发酵培养基对重组工程菌进行5L发酵罐发酵培养，其中重组大肠杆菌的过氧化氢酶主要在胞内表达，酶活为6645U/mL，重组B.subtilis 168的过氧化氢酶总酶活达到23263U/mL，胞外酶活为15368U/mL，而在B.subtilis WB600的过氧化氢酶总酶活高达26635U/mL，胞外酶活为20128U/mL，利用B.subtilis WB600为宿主更有利于胞外合成过氧化氢酶，具有重要的工业应用价值。这是目前报道的利用微生物生产过氧化氢酶的最高产量，为其工业化生产提供了一种实际有效策略。
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公开(公告)号：CN105969748B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201610576989.X
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种提高γ‑谷氨酰转肽酶表达量的方法，主要是将GGT基因3′末端终止子后添加形式为AAA,AAAAAA,TTTAAA,AAATTTAAA,TTTAAATTTAAA,TTTAAAAAAAAA的poly(A/T)尾巴，提高其在钝齿棒杆菌中的表达量，属于基因工程和酶工程领域。本发明在于通过在GGT基因3′末端终止子后添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴，发现与不添加poly(A/T)尾巴的对照菌相比，GGT在钝齿棒杆菌中的表达量提高了2倍多，这说明添加形式为TTTAAA的poly(A/T)尾巴有利于提高GGT在钝齿棒杆菌中的表达量。
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公开(公告)号：CN106434594B
公开(公告)日：2019-09-10
申请号：CN201610979843.X
申请日：2016-11-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种既解除了L‑精氨酸对其的反馈抑制作用又显著提高了催化活性与热稳定性的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。首先采用分子对接技术和对来源于钝齿棒杆菌CGMCC NO:0890的N‑乙酰谷氨酸激酶(CcNAGK)的结构分析，确定了E19位点对精氨酸的反馈抑制具有重要作用和位于底物结合口袋的三个关键氨基酸残基位点I74、F91与K234对酶的催化活性与热稳定性有着重大影响。然后，对其编码的氨基酸进行取代，将复合突变后基因argB4通过pDXW10引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，可显著提高了钝齿棒杆菌中精氨酸的合成速率。最终在5L发酵罐中发酵96h后精氨酸产量由原来的43.2g/L提高至61.2g/L，L‑精氨酸产量提高了41.8％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109929863A
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201910208324.7
申请日：2019-03-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用全细胞转化生产异麦芽酮糖的方法，属于基因工程技术领域。本发明提供了一种生产异麦芽酮糖的方法，此方法为利用可表达编码蔗糖异构酶的基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)的枯草芽孢杆菌工程菌全细胞转化生产异麦芽酮糖，利用此方法转化生产异麦芽酮糖，具有转化率、生产强度以及产率高的优势；利用本发明的方法转化生产异麦芽酮糖9h，即可将反应体系中500g/L的蔗糖转化为443g/L的异麦芽酮糖，蔗糖转化率高达94％、异麦芽酮糖产率高达88.6％、异麦芽酮糖时空产率高达49.2g/L·h。
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公开(公告)号：CN109609530A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910078599.3
申请日：2019-01-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种海藻糖合成酶及其在海藻糖生产中的应用，属于酶工程技术领域。本发明海藻糖合成酶的酶活较高，将携带本发明海藻糖合成酶的大肠杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达35.2U/mg，将携带本发明海藻糖合成酶的谷氨酸棒杆菌诱导培养12h，即可使粗酶液中海藻糖合成酶的比酶活高达33.5U/mg；本发明海藻糖合成酶突变体的比酶活与海藻糖转化率均较野生型海藻糖合成酶有了较为明显的提高，其中，海藻糖合成酶突变体K246A的比酶活较野生型酶提高了1.43倍，海藻糖转化率较野生型酶提高了约15％。
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公开(公告)号：CN109486738A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811507100.8
申请日：2018-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组大肠杆菌全细胞转化生产宝丹酮的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明克隆了来源于Bipolaris oryzae的17β-羟基类固醇脱氢酶，并实现在E.coli BL21(DE3)中过量共表达。此全细胞转化体系的建立，首次鉴定出Bipolaris oryzae来源的17β-HSD具有17β-羟基甾体脱氢酶功能，并在大肠杆菌表达体系中实现了Bipolaris oryzae来源的17β-HSD的功能鉴定。经过24h全细胞转化，1g/L ADD可转化为872.9mg/L宝丹酮。本发明为微生物工业化生产宝丹酮提供了基础。
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公开(公告)号：CN109370975A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811479829.9
申请日：2018-12-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高钝齿棒杆菌合成L-精氨酸产量的方法，属于生物工程技术领域。本发明成功实现了敲除氮转录调控因子AmtR，过量表达铵转运蛋白AmtB的重组钝齿棒杆菌的构建。采用5-L发酵罐分批发酵策略，优化发酵条件，最终重组钝齿棒杆菌Cc5-5/pXMJ19-amtB发酵至96h，重组菌的L-精氨酸产量达到60.9±1.31g/L，较出发菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5提高了30.56％，生产强度达到0.634g/L·h，并且糖酸转化率为0.36±0.018g/g，实现了L-精氨酸的高产。同时，该重组钝齿棒杆菌增加了NH4+的利用，说明敲除氮转录调控因子和过量表达铵转运蛋白对L-精氨酸的产量具有显著效果。
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公开(公告)号：CN105255849B
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201510815792.2
申请日：2015-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的谷氨酸脱羧酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.1所示的氨基酸的基础上，将第172位酪氨酸突变成半胱氨酸。本发明得到的突变体在大肠杆菌中表达，摇瓶发酵24h后酶活为28.6U/mL，突变酶活提高了81％，底物亲和力较原始酶降低53％，同时比酶活提高83％，在35℃下酶的半衰期由16h延长至24h。在大肠杆菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到283.8g/L的γ‑氨基丁酸；在谷氨酸棒菌中表达该重组酶，并全细胞转化谷氨酸18h可得到126.7g/L的γ‑氨基丁酸。本发明表明172位氨基酸残基对酶的催化作用和稳定性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。
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