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公开(公告)号：CN112501151B
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202011450515.3
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第48号构建的单点突变体L48D和L48H的酶活分别为750.26±1.63U/mg、820.01±0.98U/mg，与未进行改造的野生型腈水合酶的比酶活220.30±2.28U/mg相比，都有明显的提高。其中，突变体L48D与突变体L48H的酶活分别为野生型的3.4和3.7倍。上述这两个氨基酸残基的突变显著改善腈水合酶催化活性，有利于应用于工业上精细化学品如烟酰胺的生产，提高催化效率，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN112553236A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011449745.8
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于异源群体感应的高效表达系统，属于基因工程技术领域。本发明通过将金黄色葡萄球菌的agr群体感应系统中的agrA、agrB、agrC和agrD基因异源构建至枯草芽孢杆菌168基因组，将P3启动子克隆至穿梭载体，进而构建相配套的宿主和表达质粒。使用绿色荧光蛋白sfGFP作为报告基因，证明该系统可以高效表达外源蛋白，且不需要额外添加诱导剂。分别对P3启动子在RepA、RepB和RepF复制类型质粒上的蛋白表达水平进行检测，表明其与强组成型启动子P43和PylbP相比，在RepA和RepF复制类型质粒上具有超高的活性。
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公开(公告)号：CN110016459B
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN201910355173.8
申请日：2019-04-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产β‑丙氨酸的重组大肠杆菌及其厌氧发酵的方法，属于代谢工程领域。本发明构建得到的菌株B0016‑083BB/pPL‑panD、B0016‑100BB/pPL‑panD、B0016‑110BB/pPL‑panD厌氧发酵生产β‑丙氨酸的产量分别为57.55×10‑3g/L、58.37×10‑3g/L、80.31×10‑3g/L，较出发菌株B0016‑080BB/pPL‑panD分别提高到142.62％、146.41％和238.82％。本发明首次利用厌氧发酵生产β‑丙氨酸，与好氧发酵相比，理论转化率更高，副产物更少，且避免了好氧发酵中所需通气搅拌，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN109251882B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201811438328.6
申请日：2018-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株异源表达耐热腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高腈水合酶酶活的大肠杆菌重组菌株，发酵得到的重组腈水合酶具有更好的热稳定性。另外，可以此大肠杆菌重组菌株为催化剂，以烟腈或丙烯腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺或丙烯酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，简化了产物的分离纯化步骤，催化效率高，终产物烟酰胺或丙烯酰胺产率95％以上。
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公开(公告)号：CN109355276B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201811426687.X
申请日：2018-11-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种普鲁兰酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明构建了一种普鲁兰酶突变体，得到的单突变体K419R(第419位赖氨酸突变为精氨酸)的酶活是野生型的1.3，67℃保温30min剩余酶活达67.3U/mg；迭代突变体K419R+Y102C+K383C(第419位赖氨酸突变为精氨酸，第102位酪氨酸和第383位赖氨酸分别突变为半胱氨酸)的酶活提高为野生型的2倍，在67℃保温30min剩余酶活达88.3U/mg，为保温前的43.1％，具有较好的热稳定性。本发明的普鲁兰酶突变体能够应用于淀粉糖化过程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109370997B
公开(公告)日：2020-07-03
申请号：CN201811415904.5
申请日：2018-11-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种苯丙氨酸氨基变位酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明的苯丙氨酸氨基变位酶的突变体序列如SEQ ID NO.2所示，该突变酶的比酶活相对于野生型提高了1.13倍，在50℃处理1小时仍有50％残留酶活性，温度稳定性相比野生酶有了较大的提高。同时该突变体也具备了更好的pH稳定性，有利于以后的工业生产。
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公开(公告)号：CN110804602A
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201911127316.6
申请日：2019-11-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供的L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体N35D、A179E，pH 7.0条件下催化酶活性分别提高238％、244％。pH 4.5条件下处理12h酶活分别剩余83.9％、85.5％，相比对照野生型酶残余酶活24.8％，突变体酸稳定性有明显提高。因此，本发明提供的L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体N35D、A179E具有较好的酶学性质。
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公开(公告)号：CN109593750B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201910039981.3
申请日：2019-01-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体、含该突变体的基因工程菌及其应用，属于酶工程技术领域。本发明是将腈水合酶突变体αL6T/A19V/F126Y‑βM46K/E108R/S212Y(公开于发明专利CN102216455A)的第47位甘氨酸突变为天冬酰胺，获得的新突变酶具有更好的温度耐受性和产物耐受性，有利于以后的工业生产。将含该腈水合酶突变体的重组菌株高密度发酵，以烟腈为底物，进行全细胞催化反应制备烟酰胺。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，催化效率高，终产物烟酰胺产率95％以上，浓度达到680g/L，简化了产物的分离纯化步骤。
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公开(公告)号：CN106636052B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201611108889.0
申请日：2016-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶的热稳定性改造及其应用，属于酶工程领域。本发明将来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶基因maiA通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，得到的突变体与野生型的马来酸顺反异构酶相比，突变体G27A‑G171A在55℃的半衰期是野生型的2.9倍，酶活是野生型的1.96倍；突变体G27A‑K104R在55℃的半衰期是野生型的4.18倍，酶活是野生型的1.59倍。
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公开(公告)号：CN107828714A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711376385.1
申请日：2017-12-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/06 , C12Y401/01011
Abstract: 本发明公开了一株异源表达L-天冬氨酸-α-脱羧酶的大肠杆菌重组菌，属于生物工程领域。本发明通过构建重组大肠杆菌，获得具有高酶活的L-天冬氨酸α-脱羧酶菌株，将重组菌株高密度发酵，以L-Asp-Na作为底物，进行全细胞催化反应制备β-丙氨酸。此法与化学生产法相比，生产工艺安全清洁，无环境污染，与酶法相比，底物价格便宜，催化效率高，终产物β-丙氨酸产率95％以上，简化产物的分离纯化步骤。
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