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公开(公告)号：CN110257227B
公开(公告)日：2020-08-04
申请号：CN201910535312.5
申请日：2019-06-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种用于动物细胞培养的生物反应器，属于细胞培养领域。本发明利用活塞的往复运动代替搅拌桨的旋转，直接推动反应器的液体流动，在极低剪切力的条件下满足快速混合的需求，同时又将碟式气体分布器安装在反应器最低处，使气流带动液体流动，保证细胞和微载体不发生沉积。此外，本发明使用连续离心浓缩细胞，排泄代谢废物，避免了错流过滤对细胞造成的危害。本发明将剪切力对动物细胞造成的损失最小化，能够提高细胞的活性、生长特性和产率。本发明所设计的生物反应器适用于连续运行、长时间运行和反复运行，降低了设备成本，减少固体工业垃圾的产生，不造成二次污染。
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公开(公告)号：CN118389516A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410662454.9
申请日：2024-05-27
IPC: C12N15/113 , C12N15/81 , C12N15/55 , C12N1/19 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种乳酸克鲁维基因组多位点编辑和高效筛选方法，属于基因编辑技术领域。本发明提供了一种基于CRISPR/Cas9的乳酸克鲁维酵母基因编辑系统，具体地，通过对gRNA靶点进行筛选，发现在以TGG为目的基因的PAM序列设计gRNA时，总编辑效率以及同源重组编辑效率均有所提升，并进一步从供体DNA同源臂长度、供体DNA浓度、基因表达框串并联方式等方面进行同源重组编辑效率的优化。将该编辑系统用于基因组的整合表达时大大提升了该物质的表达水平，在乳酸克鲁维酵母相关研究中具有巨大潜力。
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公开(公告)号：CN117603899A
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311762831.8
申请日：2023-12-19
Abstract: 本发明提供了蛋白质谷氨酰胺酶在食品级大肠杆菌中的重组表达，属于发酵工程技术领域。本发明以大肠杆菌Nissle1917为初始菌株，构建了异源表达蛋白质谷氨酰胺酶的重组菌株，对RBS和启动子进行优化和筛选，通过融合表达绿色荧光蛋白和目的基因，检测细胞荧光强度，对发酵条件进行筛选，得到最佳酶活化时间、发酵温度与IPTG添加量，在该发酵条件下，发酵12h之后，摇瓶发酵酶活可达13.5U/mL。该重组菌株可以广泛应用于蛋白质谷氨酰胺酶的生产，有利于降低蛋白质谷氨酰胺酶的生产成本，且由于大肠杆菌Nissle1917作为食品级大肠杆菌具有无毒害等优势，该重组菌株也扩大了蛋白质谷氨酰胺酶在食品领域的应用。
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公开(公告)号：CN116731135A
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202211642607.0
申请日：2022-12-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种乳酸克鲁维酵母裂解工程菌及其应用，属于生物工程技术。本发明提供了甘露糖蛋白在促进乳酸克鲁维酵母菌胞内物质释放方面的新用途，通过敲除甘露糖蛋白编码基因，提高乳酸克鲁维酵母对裂解酶Lyticase的敏感性，可使构建的乳酸克鲁维酵母工程菌裂解时间较短，30min内几乎可使细胞完全裂解。本发明的乳酸克鲁维酵母裂解方法操作简便，在酶活检测、蛋白鉴定等方面有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114806906B
公开(公告)日：2023-02-21
申请号：CN202210609797.X
申请日：2022-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产中性乳糖酶的乳酸克鲁维酵母，属于生物工程技术和酶工程领域。本发明提供的乳酸克鲁维酵母JNXR‑2101已于2021年12月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211628。该菌株胞外中性乳糖酶酶活可达10.22U/mL，摇瓶发酵优化后胞内酶活可达83.36U/mL，5L发酵罐中分批补料优化后，其总酶活可达220‑250U/mL。本发明的乳酸克鲁维酵母JNXR‑2101所产的乳糖酶符合国家食品安全标准和食品添加剂标准，安全性较高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113061608A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110308846.1
申请日：2021-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导型启动子的进化方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过易错PCR对麦芽糖诱导型启动子进行突变获得启动子突变体库，再通过偶联细胞生长的方式高通量筛选突变体，获得不同响应灵敏度和强度的启动子突变体；所述麦芽糖诱导型启动子后连有编码融合蛋白的基因，所述融合蛋白能够同时发挥双重筛选标记和定量报告基因表达量的作用。本发明进化得到的诱导型启动子对诱导剂麦芽糖的响应阈值范围从0‑3g/L扩展至0‑25g/L，最高诱导表达强度较原始启动子提高约3.5倍。
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公开(公告)号：CN112522285A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011521964.2
申请日：2020-12-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了高效表达异源蛋白的一种温度控制系统的方法及其应用，该发明所使用的突变体CI857能够在37℃摇瓶发酵9h内诱导效果比出发菌株CI857提高13.8倍，并且30℃基本与出发菌株保持一致的阻遏效果，能够显著提高目标蛋白的表达量，因此本发明可作为一种用于高效表达异源蛋白的温度控制系统。
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公开(公告)号：CN102367467A
公开(公告)日：2012-03-07
申请号：CN201110375582.8
申请日：2011-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种大豆分离蛋白酶解产物中的天冬氨酸蛋白酶抑制剂的制备方法，属于生物制品分离纯化技术领域。本发明涉及采用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白，得到一种天冬氨酸蛋白酶抑制剂粗品。该粗品继续采用将酶解液进行热处理，高速离心，上清液经DEAE-52离子交换层析分离得到天冬氨酸蛋白酶抑制剂，再经真空冷冻干燥得天冬氨酸蛋白酶抑制剂干粉。本发明所制备的天冬氨酸蛋白酶抑制剂对天冬氨酸蛋白酶家族中胃蛋白酶、凝乳酶有较高的抑制活性，从酶解后的大豆分离蛋白这种天然植物类加工材料中提取的天冬氨酸蛋白酶抑制剂不仅具备特异性较好、稳定性好、且应用相对安全，在医药保健、食品添加剂及病虫害防治等领域都会有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN119082087B
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411307856.3
申请日：2024-09-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种酶活性提高的麦芽糖淀粉酶突变体及其筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明首先构建麦芽糖淀粉酶突变体文库，之后在重组枯草芽孢杆菌中使用Pglvc和PamyE启动子分别表达荧光蛋白和麦芽糖淀粉酶突变体，其中Pglvc经过突变，对麦芽糖的响应范围和诱导强度进一步提升。由于麦芽糖淀粉酶突变体与可溶性淀粉反应生成麦芽糖，在麦芽糖诱导下Pglvc启动子表达荧光蛋白，因此通过重组菌株的荧光强度差异，从中筛选高活性麦芽糖淀粉酶突变体AmyMQ440N和AmyMS442N/Q661L，突变体较野生型在酶活性、催化效率和热稳定性等方面均得到了明显提升，能够更广泛地应用于水解淀粉制备麦芽糖。
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公开(公告)号：CN118389516B
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202410662454.9
申请日：2024-05-27
IPC: C12N15/113 , C12N15/81 , C12N15/55 , C12N1/19 , C12R1/645
Abstract: 本发明公开了一种乳酸克鲁维基因组多位点编辑和高效筛选方法，属于基因编辑技术领域。本发明提供了一种基于CRISPR/Cas9的乳酸克鲁维酵母基因编辑系统，具体地，通过对gRNA靶点进行筛选，发现在以TGG为目的基因的PAM序列设计gRNA时，总编辑效率以及同源重组编辑效率均有所提升，并进一步从供体DNA同源臂长度、供体DNA浓度、基因表达框串并联方式等方面进行同源重组编辑效率的优化。将该编辑系统用于基因组的整合表达时大大提升了该物质的表达水平，在乳酸克鲁维酵母相关研究中具有巨大潜力。
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