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公开(公告)号：CN107904215B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201711439115.0
申请日：2017-12-27
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： C12N7/00 , C12N7/02 , C12N5/0735 , C12N5/02
摘要： 本发明公开了一种禽流感病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：取EB66细胞进行生长培养；步骤2：待EB66细胞的密度生长至适于接毒时，采用流加补液接毒工艺向EB66细胞中接种禽流感病毒，进行病毒的增殖培养；步骤3：在接毒24h后，每隔12h取样测定病毒的HA效价，在病毒HA效价达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的禽流感病毒。本发明用EB66细胞进行禽流感病毒培养，避免了采用传统鸡胚培养工艺生产时易引入大量杂蛋白的缺点，有效降低鸡只免疫副反应的发生，同时提高培养的禽流感病毒滴度及纯度，进而提高禽流感疫苗的生产品质。
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公开(公告)号：CN107904215A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711439115.0
申请日：2017-12-27
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： C12N7/00 , C12N7/02 , C12N5/0735 , C12N5/02
CPC分类号： C12N7/00 , C12N5/0606 , C12N2760/16151
摘要： 本发明公开了一种禽流感病毒的全悬浮培养方法，包括以下步骤：步骤1：取EB66细胞进行生长培养；步骤2：待EB66细胞的密度生长至适于接毒时，采用流加补液接毒工艺向EB66细胞中接种禽流感病毒，进行病毒的增殖培养；步骤3：在接毒24h后，每隔12h取样测定病毒的HA效价，在病毒HA效价达到最高时收获病毒并保存，得到培养后的禽流感病毒。本发明用EB66细胞进行禽流感病毒培养，避免了采用传统鸡胚培养工艺生产时易引入大量杂蛋白的缺点，有效降低鸡只免疫副反应的发生，同时提高培养的禽流感病毒滴度及纯度，进而提高禽流感疫苗的生产品质。
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公开(公告)号：CN110128545B
公开(公告)日：2022-10-25
申请号：CN201910321941.8
申请日：2019-04-22
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/81 , A61K39/295 , A61K39/235 , A61K39/145 , A61P31/16 , A61P31/20
摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种融合基因，碱基序列如序列表SEQ ID NO：1所示；该融合基因采用禽流感H9亚型HA基因、腺病毒4型fiber2基因、特异性连接肽片段基因进行融合，该基因对应的表达蛋白抗原能够诱导家禽产生高水平的特异性抗体，保护家禽免受禽流感和禽腺病毒的感染，同时，本发明还公开了一种重组表达载体、抗原及其制备方法和应用。
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公开(公告)号：CN110128545A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910321941.8
申请日：2019-04-22
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/81 , A61K39/295 , A61K39/235 , A61K39/145 , A61P31/16 , A61P31/20
摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种融合基因，碱基序列如序列表SEQ ID NO：1所示；该融合基因采用禽流感H9亚型HA基因、腺病毒4型fiber2基因、特异性连接肽片段基因进行融合，该基因对应的表达蛋白抗原能够诱导家禽产生高水平的特异性抗体，保护家禽免受禽流感和禽腺病毒的感染，同时，本发明还公开了一种重组表达载体、抗原及其制备方法和应用。
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公开(公告)号：CN110317778A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910551879.1
申请日：2019-06-25
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C12N5/0735 , C12N5/02
摘要： 本发明属于培养基领域，具体为一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，添加剂A中各物质在所述培养基中浓度为：胰岛素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巯基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；维生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；胆固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg-3000mg。该培养基支持EB66细胞在无血清、全悬浮的条件下快速增殖，倍增时间短。细胞呈现较高密度，同时，本发明还提供该培养基的制备方法。
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公开(公告)号：CN114540274B
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202210151336.2
申请日：2022-02-17
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明提供一种无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法。该无血清培养基包含水以及氨基酸、维生素、盐类、脂类、微量元素和其他添加成分。采用该无血清培养基培养2BS细胞，能突破2BS细胞传代极限、增加2BS细胞传代的代次。并且，发明人还发现，所得2BS细胞形态更好、生长密度更高、活率高。同时，本发明提供的无血清培养基配方成分明确，配方简单，低成本，低蛋白，易于配制，利于2BS细胞后续生产病毒的下游纯化，提高产品品质。本发明提供的无血清培养基，适用范围广，不仅适用于细胞工厂、微载体工艺上的无血清传代、扩增和放大，还可支持传统培养基中10％血清用量的2BS细胞在低血清或无血清条件下生产疫苗。
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公开(公告)号：CN108239625A
公开(公告)日：2018-07-03
申请号：CN201611209382.4
申请日：2016-12-23
申请人： 甘肃健顺生物科技有限公司
IPC分类号： C12N7/00
CPC分类号： C12N7/00 , C12N2710/24134 , C12N2710/24151
摘要： 本发明涉及悬浮BHK21细胞相关疫苗生产的二阶培养工艺技术，本发明以悬浮BHK21细胞为宿主细胞，采用二阶培养接毒方式生产能在BHK21悬浮细胞上病变的病毒，即，在细胞密度生长到2X106/mL-20X106/mL时，用生产培养基稀释1-5倍，稀释后细胞密度在1X106/mL-10X106/mL之间，然后接毒，或在稀释之前接毒。本发明的生产工艺简单；不浪费培养基；不换液；生产培养基和生长培养基为相同或不同培养基，二者按比例混合，即可以达到细胞生长和病毒生产的作用。
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公开(公告)号：CN114540274A
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202210151336.2
申请日：2022-02-17
申请人： 上海健士拜生物科技有限公司 , 澳斯康生物(南通)股份有限公司 , 甘肃健顺生物科技有限公司 , 健顺生物科技(南通)有限公司
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明提供一种无血清培养基及其制备方法和用其培养2BS细胞的方法。该无血清培养基包含水以及氨基酸、维生素、盐类、脂类、微量元素和其他添加成分。采用该无血清培养基培养2BS细胞，能突破2BS细胞传代极限、增加2BS细胞传代的代次。并且，发明人还发现，所得2BS细胞形态更好、生长密度更高、活率高。同时，本发明提供的无血清培养基配方成分明确，配方简单，低成本，低蛋白，易于配制，利于2BS细胞后续生产病毒的下游纯化，提高产品品质。本发明提供的无血清培养基，适用范围广，不仅适用于细胞工厂、微载体工艺上的无血清传代、扩增和放大，还可支持传统培养基中10％血清用量的2BS细胞在低血清或无血清条件下生产疫苗。
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公开(公告)号：CN108570454A
公开(公告)日：2018-09-25
申请号：CN201711098901.9
申请日：2017-11-09
申请人： 甘肃健顺生物科技有限公司
CPC分类号： C12N7/00 , A61K39/12 , C12N2710/16034 , C12N2710/16051 , C12N2770/24334 , C12N2770/24351
摘要： 本发明涉及MDBK细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺。具体而言，本发明涉及驯化贴壁MDBK细胞使其适应无血清悬浮培养，并以其作为宿主细胞，采用二阶培养接毒方式生产能在悬浮MDBK细胞上病变或有敏感性的病毒，即，细胞长至2.0～20.0×106细胞/mL时，用生产培养基稀释1～5倍，使密度在1.0～10.0×106细胞/mL之间，然后接毒，或在稀释之前接毒。本发明的悬浮MDBK细胞适应在无血清和化学成分确定的培养基中悬浮生长，其二阶病毒生产工艺简单，易放大；不换液，培养基利用效率高；生产和生长培养基可相同或不同，二者按照比例混合，即可使细胞二次生长并促进病毒表达。
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公开(公告)号：CN108570445A
公开(公告)日：2018-09-25
申请号：CN201711098900.4
申请日：2017-11-09
申请人： 甘肃健顺生物科技有限公司
CPC分类号： C12N5/0686 , C12N7/00
摘要： 本发明涉及PK15细胞驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺。具体而言，本发明涉及驯化PK15细胞使其适应无血清悬浮培养，并以其为宿主细胞，采用二阶培养接毒方式生产能在悬浮PK15细胞上病变或有敏感性的病毒，即，细胞长至2.0～20.0×106细胞/mL时，用生产培养基稀释1～5倍，使密度在1.0～10.0×106细胞/mL间，然后接毒，或在稀释前接毒。本发明的悬浮PK15细胞适应在无血清和化学成分确定的培养基中悬浮生长，其二阶病毒生产工艺简单，易放大，不换液，培养基利用率高；生产和生长培养基可相同或不同，二者按照比例混合，即可使细胞二次生长并促进病毒表达。
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