一种FISH检测肺癌基因扩增的方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN104278095A

    公开(公告)日:2015-01-14

    申请号:CN201410514904.6

    申请日:2014-09-29

    发明人: 缪为民

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/11

    CPC分类号: C12Q1/6841 C12Q2543/10

    摘要: 本发明涉及一种FISH检测肺癌基因扩增的方法及试剂盒,该方法对肺癌组织石蜡切片进行常规预处理,然后采用一组双色探针进行原位杂交,根据检测到的荧光信号判断是否存在所述肺癌相关基因的扩增;所述一组双色探针是(1)标记为红色的PDGFRB基因探针(2)标记为绿色的5号染色体中心粒探针;其中PDGFRB:Entrez Gene ID:5159。本发明方法特异性和敏感性强,可以快速,准确,直观检测出肺癌细胞中PDGFRB基因扩增状况,检测结果准确可靠,适合于大规模推广使用。

    循环肿瘤细胞鉴定试剂盒和方法

    公开(公告)号:CN104031993A

    公开(公告)日:2014-09-10

    申请号:CN201410228511.9

    申请日:2014-05-27

    IPC分类号: C12Q1/68 C12Q1/04

    摘要: 本发明公开了一种循环肿瘤细胞鉴定试剂盒以及方法,所述鉴定试剂盒包括有检测上皮细胞标志基因mRNA、和/或间质细胞标志基因mRNA的检测探针;所述上皮细胞标志基因选自:EPCAM、KRT16、KRT8、KRT18、KRT19中的一个或一个以上;所述间质细胞标志基因选自:CDH2、VIMENTIN、FN1、AKT2中的一个或一个以上。本发明所述鉴定方法采用多重RNA探针,能够同时标记多种循环肿瘤细胞(CTCs)特异性基因,并将其分型为I型(上皮型)、II型(上皮-间质混合型)及III型(间质型),降低CTCs在进入外周血循环的过程中因缺失部分CTCs特异性基因而导致的假阳性结果。本发明鉴定方法能够在8h内完成,单一拷贝的mRNA杂交探针通过信号放大系统,与相应的荧光探针结合,显著提高RNA原位杂交的检测灵敏度。

    利用基因组原位杂交快速构建黄瓜中期染色体核型方法

    公开(公告)号:CN104004849A

    公开(公告)日:2014-08-27

    申请号:CN201410257785.0

    申请日:2014-06-09

    IPC分类号: C12Q1/68

    CPC分类号: C12Q1/6841 C12Q2543/10

    摘要: 本发明公开了利用黄瓜基因组原位杂交技术快速构建黄瓜中期染色体核型的方法,它是通过提取黄瓜基因组DNA,并将其标备探针。取黄瓜根尖进行酶解,火焰干燥法制片,获得分散度良好的中期染色体制片。将基因组DNA探针变性后杂交到变性的中期染色体制片上,利用高严谨度的杂交条件,使得染色体串联重复序列产生清晰可辨的荧光信号,从而构建黄瓜的中期染色体核型。本发明利用黄瓜基因组DNA作为探针,通过一次GISH快速构建黄瓜中期染色体核型,提高了试验效率。通过此方法,基于黄瓜基因组DNA探针在每条染色体上信号分布模式的不同,可快速构建出黄瓜中期染色体核型,为物种的核型分析研究提供了新的方法与参考。

    一种对细胞内端粒酶活性原位成像的纳米探针及其制备方法

    公开(公告)号:CN103993078A

    公开(公告)日:2014-08-20

    申请号:CN201410193997.7

    申请日:2014-05-09

    申请人: 南京大学

    IPC分类号: C12Q1/68 C12Q1/48 C12Q1/02

    摘要: 本发明涉及一种可对细胞内端粒酶活性进行原位成像检测的纳米探针及其制备方法。纳米探针以金纳米粒子(AuNP)为载体,负载特殊设计的DNA分子信标(MB)。该MB为茎-环结构,并带有一个缺口,将整个DNA序列分为两段:较短的一段是端粒酶引物序列(TSP);较长的一段(1-MB)含环状结构,其茎部3’端的巯基可共价连接AuNP,5’端修饰荧光分子Cy5。由于荧光共振能量转移,Cy5的荧光被AuNP猝灭,纳米探针的荧光状态为“关”。将探针与细胞温育,探针进入细胞后,在细胞质内端粒酶的作用下,TSP被延长并发生内部链取代,使1-MB环被打开,导致Cy5离开AuNP表面,将荧光状态转换为“开”,进而利用激光共聚焦荧光显微镜观察Cy5的荧光,可实现细胞内端粒酶活性的原位成像分析。该探针可区分肿瘤和正常细胞,还可用于监测细胞内端粒酶活性在端粒酶抑制药物作用下的变化,因此该发明具有良好的应用前景。

    一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN107904283A

    公开(公告)日:2018-04-13

    申请号:CN201711095572.2

    申请日:2017-11-09

    IPC分类号: C12Q1/6841

    摘要: 本发明属于荧光原位杂交技术领域,具体涉及一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用。所述多探针杂交玻片由探针附着玻片、各探针、杂交缓冲液和样本附着玻片组成;各探针以冻干的形式分别附着在各相互独立的探针附着区上;样品滴加在样品附着区上,当样本附着区与探针附着区贴合时,样品附着区的样品与相对应的探针附着区的探针实现杂交结合。相比于传统的FISH实验,本发明可以再一张玻片上同时预置多组探针,并且可以再同一张玻片上完成多种探针的检测,大大简化了传统FISH的操作步骤;减少了探针的使用量降低了探针的使用成本;本发明所述的即用型多探针杂交玻片具有极高的信噪比、特异性以及样本检出率。

    RNA原位杂交
    20.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102037137B

    公开(公告)日:2017-11-28

    申请号:CN200980117915.8

    申请日:2009-05-19

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/09 G01N33/58

    摘要: 本发明提供一种RNA原位杂交法,其特征在于,其是使1种或多种寡聚核酸探针与在组织试样中表达的目标基因mRNA杂交,检测在寡聚核酸探针的至少1个碱基上附加的低分子化合物标记来鉴定目标基因mRNA的存在的方法,在使1种或多种假寡聚核酸对组织试样进行前处理即预杂交后,使寡聚核酸探针与组织试样接触,使其与目标基因mRNA杂交,或者使寡聚核酸探针和上述假寡聚核酸的混合液与试样组织接触,使寡聚核酸探针与目标基因mRNA杂交,其中,上述假寡聚核酸由与寡聚核酸探针大致相同的长度形成,不与目标基因mRNA上的寡聚核酸探针进行杂交的区域发生杂交,而且不与寡聚核酸探针发生杂交。