一种转肽活力提高的γ-谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法

    公开(公告)号:CN108611333A

    公开(公告)日:2018-10-02

    申请号:CN201810442796.4

    申请日:2018-05-10

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种转肽活力提高的γ-谷氨酰转肽酶突变体及其构建方法,属于基因工程领域。本发明的突变体是在SEQ ID N0.3所示的氨基酸的基础上,将第463位氨基酸由苏氨酸突变成天冬氨酸。本发明得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达,γ-谷氨酰转肽酶突变体酶的转肽反应活力较突变前提高22.6%,水解反应活力降低了90%。本发明表明463位氨基酸残基对γ-谷氨酰转肽酶的转肽反应活力有较大影响,对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础,并提高了该酶的工业应用潜力。本发明所得的γ-谷氨酰转肽酶突变体可用于制备L-茶氨酸。

    利用一株安全菌株发酵酒糟生产2,3-丁二醇的方法

    公开(公告)号:CN104388477B

    公开(公告)日:2018-06-19

    申请号:CN201410748634.5

    申请日:2014-12-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明首次公开了利用一株环境安全菌株Bacillus amyloliquefaciens CCTCC M2012349,以酒糟为唯一碳氮源,发酵生产2,3‑丁二醇的方法,属于生物工程中发酵技术领域。该方法主要包括种子培养和发酵培养。具体的说,将种子液按4%接种量接种于发酵培养基中,在37℃,空气流量为120m3/h·m3培养基,搅拌转速为350r/min条件下进行发酵培养,发酵60h,即刻停止发酵,发酵液即为含有2,3‑丁二醇液体。能有效地降低白酒生产成本、提高资源利用率、延伸产业链,是建立高效、经济的生物质能源综合利用产业的重要措施,将大大提升白酒产业的整体技术水平和循环效益。

    一种新的新金色分枝杆菌表达体系及其在转化植物甾醇合成ADD中的应用

    公开(公告)号:CN104830888B

    公开(公告)日:2018-05-01

    申请号:CN201510143997.0

    申请日:2015-03-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种新金色分枝杆菌表达载体及其构建方法和应用,属于基因工程技术领域。本发明的新金色分枝杆菌表达载体pMTac‑2,可用于在新金色分枝杆菌高效表达蛋白,适用于分枝杆菌代谢产物的研究和生产。利用pMTac‑2在新金色分枝杆菌中过量表达KSDD,使重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd胞内的KSDD活性比原始菌提高15.12倍。以30g/L植物甾醇为底物,5L发酵罐中重组菌M.neoaurum JC‑12/pMTac‑2‑ksdd的ADD产量达到15g/L以上,为目前报道的发酵法利用新金色分枝杆菌降解植物甾醇合成ADD的最高水平。因此,该表达体系能够有效利用于新金色分枝杆菌的遗传改造。

    一种通过添加葡萄糖酸提高乙偶姻产量的方法

    公开(公告)号:CN104404089B

    公开(公告)日:2018-02-23

    申请号:CN201410748883.4

    申请日:2014-12-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 添加葡萄糖酸提高乙偶姻产量的方法,属于发酵工程领域。利用本实验室前期筛选得到的高产乙偶姻野生型枯草芽孢杆菌B.subtilis JNA(保藏号CCTCC M209309;专利申请公布号CN 101864381A)进行发酵,通过调节葡萄糖与葡萄糖酸的比例改变胞内辅酶变化水平从而改变乙偶姻与2,3‑丁二醇比例。最终在较低NADH浓度及NADH/NAD+比例下(50g/L葡萄糖和50g/L葡萄糖酸),转化约为55.8g/L的乙偶姻,副产物2,3‑丁二醇仅为4.1g/L;与使用葡萄糖作为唯一碳源相比较,乙偶姻生产效率上升到0.78g/(L·h),乙偶姻产量提高近86%,副产物2,3‑丁二醇积累量下降80%。为国内外首次利用混合还原态底物降低NADH浓度及其NADH/NAD+比例发酵生产乙偶姻,实现了提高生产效率、减少NADH依赖型副产物的目的。

    一种高效联产L‑苯甘氨酸及葡萄糖酸的策略

    公开(公告)号:CN106119272A

    公开(公告)日:2016-11-16

    申请号:CN201610574812.6

    申请日:2016-07-20

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明是一种将葡萄糖脱氢酶与L‑亮氨酸脱氢酶在大肠杆菌中单独和共表达,利用重组大肠杆菌酶法和全细胞法联产L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸盐的方法。本发明在于:将葡萄糖脱氢酶基因和L‑亮氨酸脱氢酶基因构建重组单独和共表达载体并将其转化至基因工程菌大肠杆菌内。利用重组菌酶法和全细胞法转化可以促进辅因子在转化体系中的循环,仅需添加少量外源辅因子或不添加外源辅因子,利用该辅因子循环再生系统可以利用底物苯甲酰甲酸及葡萄糖联产高附加值的L‑苯苷氨酸和葡萄糖酸,该转化过程简单快捷,成本低廉。在5L发酵罐中转化2‑4h,该方法所得的L‑苯甘氨酸和葡萄糖酸产量分别可达58.8g/L及75.6g/L,为其工业化生产提供了一种实际有效策略。

    一种信号肽及其在利用淀粉产L-精氨酸重组菌中的应用

    公开(公告)号:CN105274129A

    公开(公告)日:2016-01-27

    申请号:CN201510817023.6

    申请日:2015-11-23

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种信号肽及其在利用淀粉产L-精氨酸重组菌中的应用,属于基因工程和酶工程领域。本发明通过分子克隆技术和基因工程技术将来源Streptomyces kathirae CCTCC M2012432不带自身信号肽的α-淀粉酶与不同微生物来源的Sec和Tat两个主要分泌途径的十二条信号肽分别融合,在高产L-精氨酸菌种中表达,筛选出一条高效分泌α-淀粉酶的信号肽SEQ ID N0.1。首次报道,以该信号肽介导分泌α-淀粉酶的重组钝齿棒状杆菌CGMCC No.0890/pMSPamy能利用廉价淀粉发酵生产L-精氨酸,最优碳源添加条件下5L发酵罐上产量为48g/L。

    一种辅酶高效再生体系的构建及其应用

    公开(公告)号:CN105238807A

    公开(公告)日:2016-01-13

    申请号:CN201510817220.8

    申请日:2015-11-23

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明是一种串联氨基酸脱氢酶及密码子优化的甲酸脱氢酶重组大肠杆菌制备α-氨基丁酸的方法。首先,按照大肠杆菌的密码子偏好对博伊丁假丝酵母菌甲酸脱氢酶基因序列进行密码子优化。对甲酸脱氢酶密码子优化后可以显著提高其在大肠杆菌中的表达量,增加α-氨基丁酸的产量,同时共表达甲酸脱氢酶及L-氨基酸脱氢酶于大肠杆菌中可以促进辅因子在菌体胞内的循环,可以不需要添加任何外源辅因子,另外利用全细胞转化大宗化学品L-苏氨酸生产α-氨基丁酸过程简单快捷,成本低廉。在5L发酵罐中该方法所得的α-氨基丁酸产量可达81.5g/L,为其工业化生产提供了一种实际有效策略。

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