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公开(公告)号：CN118599746A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410693207.5
申请日：2024-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种多酶级联转化L‑酪氨酸生产酪醇和红景天苷的方法，属于生物工程技术领域。本发明首先将野生糖基转移酶的第158位苏氨酸突变为丙氨酸，并将第311位酪氨酸突变为丙氨酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的糖基转移酶。然后构建了以大肠杆菌为宿主的共表达工程菌，通过双质粒表达系统表达糖基转移酶、酪氨酸脱羧酶和酪胺氧化酶，实现了以L‑酪氨酸为底物进行酪醇和红景天苷的高效生产。本发明的生产方法通过模块化组装和基因重复表达实现各酶的平衡表达，避免副产物的积累，实现了以L‑酪氨酸为底物高效合成酪醇和红景天苷，为酪醇和红景天苷的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN118291315A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410317954.9
申请日：2024-03-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高氧化葡萄糖酸杆菌抗有机溶剂胁迫的方法，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明通过在培养基中梯度添加有机溶剂环氧苯乙烷，对野生型氧化葡萄糖酸杆菌621H进行适应性进化。进化菌株显著提高了对有机溶剂的耐受性。在氧化葡萄糖酸杆菌中过量表达LysR家族转录调控因子GOX_RS04700显著提高了氧化葡萄糖酸杆菌的抗有机溶剂胁迫能力；将利用本发明的方法制备得到的重组氧化葡萄糖酸杆菌在10g/L环氧苯乙烷环境下培养10h后的生长性远远强于野生型氧化葡萄糖酸杆菌。
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公开(公告)号：CN114891710B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210604061.3
申请日：2022-05-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过重构辅酶再生系统强化重组大肠杆菌催化合成胆绿素的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过从Clostridium tetani中获得血红素加氧酶，以E.coliBL21(DE3)作为底盘细胞，pETDuet为表达载体构建重组大肠杆菌，实现该酶的表达。强化大肠杆菌中谷氨酸脱氢酶的表达，引入辅酶NADPH再生系统，成功构建重组菌株E.coliBL21/pETDuet‑gdhAEc‑hoCt，实现E.coli来源的GdhA和C.tetani来源的HO共表达。该重组菌在无需额外添加辅酶NADPH条件下，即可进行全细胞催化血红素合成胆绿素，转化率高达71.5％，为胆绿素的高效生产提供了新途径。
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公开(公告)号：CN117448246A
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202311382576.4
申请日：2023-10-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种合成非天然α‑氨基酸的氧化葡萄糖酸杆菌及其应用，属于基因工程和全细胞催化领域。本发明通过在氧化葡萄糖酸杆菌中异源表达鞘氨醇单胞菌来源的环氧化物水解酶、短乳杆菌来源的扁桃酸脱氢酶和蜡样芽孢杆菌来源的亮氨酸脱氢酶，同时利用氧化葡萄糖酸杆菌自身膜结合的醇、醛脱氢酶，以1,2‑二醇类和环氧化物为底物一步法多酶级联催化合成对应的非天然α‑氨基酸，此外本发明的合成系统不需要额外添加辅酶，内部可实现辅酶自循环。本发明合成的脂肪族非天然α‑氨基酸如：L‑α‑氨基丁酸、L‑正缬氨酸、L‑正亮氨酸和L‑高烯丙基甘氨酸是首次以1,2‑二醇类和环氧化物为底物生物法合成的报道。
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公开(公告)号：CN117402800A
公开(公告)日：2024-01-16
申请号：CN202311284804.4
申请日：2023-09-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用谷氨酸棒杆菌生产新型染料谷蓝的方法及其应用，属于生物工程领域。本发明提供了一种重组谷氨酸棒杆菌，所述重组谷氨酸棒杆菌是以谷氨酸棒杆菌N01或谷氨酸棒杆菌E01为底盘细胞，表达了来源于Streptomyces chromofuscus ATCC 49982的天然蓝色素合成酶；采用本发明得到的菌株C.glutamicum N01/pECXK‑99E‑Sc‑IndC发酵60h谷蓝产量最终可达到52.96±0.53g/L。C.glutamicum N01/pECXK‑99E‑R4‑Sc‑IndC发酵60h谷蓝产量最终可达到74.16±0.41g/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116732009A
公开(公告)日：2023-09-12
申请号：CN202310947313.7
申请日：2023-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种重组二肽酶突变体及其在L‑肌肽生产中的应用，属于酶工程技术领域。本发明以二肽酶为基础，选择其第148位和第168位进行的氨基酸进行定点突变，将第148位甘氨酸突变成天冬氨酸(G148D)，第168位苏氨酸突变成丝氨酸(T168S)，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体酶活性比野生型高41.6％。本发明提供的二肽酶突变体催化β‑丙氨酸和L‑组氨酸合成L‑肌肽的效率更高，与野生型相比，产量提高了40.9％。本发明的重组二肽酶突变体能更好的满足工业生产需求，并解决现有技术中二肽酶活性低，表达量低，L‑肌肽的合成产量低等的问题。
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公开(公告)号：CN114874950B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210638715.4
申请日：2022-06-07
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/20 , C12N1/21 , C07K7/58 , A61K35/742 , A61K38/12 , A61P31/04 , A23L33/18 , A23L33/135 , A23K20/147 , A23K10/18 , A01N63/22 , A01P1/00 , C12R1/10
Abstract: 本发明公开了一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法，属于微生物技术领域。本发明从饲料样品中筛选获得高产杆菌肽的地衣芽孢杆菌ATH，通过基因工程的方法在地衣芽孢杆菌ATH内表达枯草芽孢杆菌来源的乙酰辅酶A合成酶Bsacs基因，增加胞内杆菌肽组成氨基酸的供给，提高杆菌肽效价。将得到的重组地衣芽孢杆菌接种至含豆粕粉的发酵培养基中发酵培养42h后，得到的杆菌肽效价为1928IU/mL，比出发菌株ATH杆菌肽效价提高了46.16％，同时杆菌肽A的含量为1081IU/mL，与出发菌株相比，提高了37.2％。整个发酵过程产杆菌肽效率高，原料成本低，且方法简单，易于操作。
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公开(公告)号：CN113667651B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110908307.1
申请日：2021-08-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高及最适pH改变的NADH氧化酶突变体，属于基因工程技术领域。本发明提供的NADH氧化酶突变体N20D、Y66D、N116E、N20D/Y66D、N20D/N116E均能够实现在中性条件下酶活提高的技术效果，并且，NADH氧化酶突变体N20D/N116E的最适pH从9.0下调到了7.0，比酶活也得到显著提升，在pH 7.0时比酶活可达9.19U/mg蛋白，是野生型的2.9倍，加强了该酶再生NAD+的能力，为工业化氧化还原酶催化提供了一种实际有效的辅酶再生策略。
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公开(公告)号：CN115074304B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210768607.9
申请日：2022-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种谷氨酸棒杆菌高效突变体及重组菌构建方法与应用，属于基因工程和诱变技术领域，基于筛选来源于C.glutamicum自身DNA复制过程中的DNA聚合酶，得到高度保守性的ExoI区域，并通过定点突变解除DNA聚合酶的校对、修复功能，提高突变率。基于筛选得到的DNA聚合酶突变体，逐步串联组装尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂UGI、胞嘧啶脱氨酶pmCDA1和腺嘌呤脱氨酶TadA‑ABE8e，构建一系列突变质粒MPs，该突变体在C.glutamicum中实现高效的突变率以及广泛的突变谱，且突变过程绿色、健康，没有有毒有害的物质参与，本发明构建的谷氨酸棒杆菌高效突变体系，可用于筛选高产谷氨酸底盘细胞，也为应用于其他氨基酸生产提供了重要借鉴。
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公开(公告)号：CN113549643B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202110800394.9
申请日：2021-07-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过过表达基因psrB提高粘质沙雷氏菌合成灵菌红素的方法，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明通过在粘质沙雷氏菌中过表达DeoR家族转录调控因子PsrB(BVG90_04085)编码基因BVG90_04085(psrB)，显著提高了粘质沙雷氏菌合成灵菌红素能力；将利用本发明的方法制备得到的重组粘质沙雷氏菌在发酵培养基中发酵72h产灵菌红素发现，重组菌株JNB5‑1‑PsrB发酵产灵菌红素能力较野生型菌株JNB5‑1相比，提高了28.33％，产量达6.84g/L。
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